Способ определения токсичности кормового продукта

(54) СПОСОБ ОПРКОРМОВОГО ПРОД Я ТОКСИЧНОСТ кава ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПо ИЗОВ КТЕНИЯМ И ОтНРЫтиПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ Н АВТОРСКОМУ СВйДЕТЕЛЬСТВУ(71) Всесоюзныи научно-исследователский институт биоскнтеза белковыхвеществ(56) Максаков В.Я. и др. Оценка каства комбикормов. - М.: Колос,1977, с. 173-176. Изобретение относится к биотехнологии, к микробиологической промьпппенностк, к способам обработки биомассы продукта с последующим использованием ее в качестве объекта для определения токсичности.Цель изобретения - повьппение чувствительности при определении мало- токсичных продуктов,Биомасса продукта подвергается зкстракции водноорганическими растворителями с последующим разделением проэкстрагированной биомассы на жидкую и твердую Фазы. Затем жидкую Фазу используют в качестве объекта для исследования на токсичность.Экстракцию биомассы микроорганизмов проводят горячей водой при 65- 95 С водой в соотношении биомасса:воЯО 1651206 2(57) Изобретение относится к биотех. нологии, к микробиологической про-ъшленностк, к способам обработки биомассы продукта с последующим использованием ее в качестве объекта для определения токсичности. Цель изобретения - повысить чувствительность при определении малотоксичных продуктов . Для этого биомассу разрушают, экстрагируют водой при 65-95 С в течение 20 - 60 мин, разделяют центрифугированием при факторе разделения 1000-10000 я, затем экстракт смешивают с биомассой в соотношении отЪ 1:3 до 1:б и гомогенкзируют, оценивая по градиенту скорости в пределах 200- 1500 с. 1 табл. да (1:10)-(3:8), в течение 20-60 мин. Разделение проэкстрагкрованной биомассы осуществляют центрифугированием с Ж Фактором разделения 1000-10000 я. Полученный экстракт смешивают с биомассой в соотношении соответственно экстракт;биомасса (3:1)-(6:1) и гомогенизируют в течение 10-40 мин с градиентом скорости 200-1500 с . Интенсификацию процесса экстракции и повы щенке точности исследования объектатоксичность достигают путем предрительного разрушения биомассы, например, в слое инертной псевдоожиженной насадки.Гомогенизированная смесь вводится животно, в частности белым мьппам - самцам, в количестве 1 мл на одно животное массой 18-22 г.1651206 Способ обработки П Результаты экспериментов Опыт ИзвестныйВодный экстракт то же Проводят химико-технологическиенаблюдения за животными и по степениизменений внутренних органов делаютзаключение о степени токсичности исследуемого объекта (биомассы микроорганизмов),П р и м е р 1. Биомассу дрожжей(масса 100 г), выращенную на и-параФинах (БВК), помещают в колбу, разме шивают в 400 мл горячей воды, соотношение 1:4, с температурой 80 фС в течение 40 мин. Проэкстрагированную массу разделяют центриФугированием сФактором разделения 4500 д . Экстракт 15в количестве 200 мл смешивают с 40 гБВК, что соответствует соотношениюэкстракт:биомасса 5:1, и гомогенизируют в течение 25 мин с продуктом прискорости 850 с . 20Затем гомогенизированную смесь че"рез емкость 1-2 см зондом вводят вжелудок белой мьншл по 1 см (5-8 животных). Контрольным животным вводятдистиллированную воду в том же объеме 25Далее проводятклинико-токсикологические исследования на токсичность биомассы, Результаты приведены в таблице, Достоверность опыта 95% относительная погрешность 5%. 30П р и м е р 2, Обработку биомассыдрожжей ВСП-ЦМПИ-Ув количестве 100 г проводят как в примере 1,только соотношение биомасса;вода составляет 110, температура воды 65 С,время обработки 20 мин, Разделениепроэкстрагированной биомассы проводятпри Факторе разделения 1000 8; соотношение экстракт:биомасса 5:1, интенсивность гомогенизации с градиентом скорости 200 с. Достоверность опыта95%, погрешность 5,8%. В контроле (известный способ) 13% (таблица),Дрожжевая биомасса Предлагаемыйиз н-параФинов(пример 1),Ы=О, 95 П р и м е р 3. Обработку биомассыдрожжей ВСБ в 8-УИПИ-Ув количестве 100 г проводят как в примере 1,за исключением того, что соотношениебиомасса:вода 3:8, температура воды95 С, время обработки 60 мин. Разделение проэкстрагированной биомассы проводят при Факторе разделения 10000 8;соотношение экстракт:биомасса 3:1,интенсивность гомогенизации, оцениваемая градиентом скорости, равна 1500 сДостоверность опыта 85% погрешность5,5%, В контроле погрешность 12,5%(таблица),П р и м е р 4. Обработку биомассы бактерий ВСБ-ЦИ 1 М-Впроводят как в примере 2, однако соотношение биомасса:вода составило 1:6, а экстракт:биомасса 5:1. Достоверность опыта 95%, погрешность 2,9%. В контроле погрешность 11,6%. Формула изобретения Способ определения токсичности кормового продукта, включающий отбор навески образца, его водную экстракцию с последующим разделением на твердую и жидкую Фазы и введением последней животному, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности при определении малотоксичных продуктов, экстракцию проводят при 65-95 ОС в течение 20- 60 мин при соотношении навеска:вода (1-3):(10-8), а перед введением животному к полученной жидкой Фазе добавляют вторую навеску образца в соотношении 1:(3-6), после чего обрабатывают в псевдоожиженном слое и гомогенизируют.1 Продукт токсичен, В экспериментевыявлена гибель 1 жив. и изменения в органах у остальных гиперемия, геморрегическое воспалениеслизистой желудка и тонкого кишечника, 8=5,0%Продукт слаботоксичен, у животныхвыявлены воспалительные явленияв слизистой желудка и кишечника5=12%1651206 Ацетоновые экстракты Биомасса дрожжейВСБ(пример 2),К=0,95То же Пр ест,па гаемый Известный Ацетоновый экстракт Ацетоновый экстракт Предлагаемый Известный фи Ацетоновый экстракт Й 4 дролизные дрожПредлагаемый Известный То же Ацетоновый экстрактПредлагаемый Биомасса дрожжейВСБ-ЦМПМ-д(пример 3), 0=0,95 10 10 То же Известный Дрожжевая биомасса Предлагаемыйиз гидролиэатовдревесины Дрожжевая биомасса Известныйиз гидролиэатовдревесиныТо же Дрожжевая биомассаиз гидролизатовдревесиныТо же Биомасса дрожжей Ацетоновый экст- ВСБ-ЦИПИ - дракт(пример 3), ОБ=Э, 95 Продолжение таблицы Продукт слаботоксичен, выявленывоспалительные явления в органахжелудочно-кишечного тракта, Я= 15%Продукт слаботоксичен, у большинства животных выявлены воспалениявнутренних органов, дегенеративныеизменения в печени, 8=5,1% 6%Продукт не токсичен, измененияобнаруживаются у 1-2 животных,3=13%Продукт не токсичен, изменениянаблюдаются у 2-3 животных изгруппы, В=10%Продукт токсичен, выявлен падежвсех животных, на вскрытии вздутия органов желудочно-кишечноготракта, отмечены клинические признаки интоксикации небелковымазотомПродукт токсичен, падеж 1 животного, у всех мышей клиническаяинтоксикация небелковым азотомПродукт токсичен, падеж 2 животных, клинические признаки интоксикации у всех животныхПродукт токсичен, выявлен падежвсех животных, клинические признаки интоксикации у всех животныхПродукт токсичен, падеж 2 животных, клинические признаки интоксикации у всех животныхПродукт токсичен, падеж 2 мышей,у остальных - клинические признаки интоксикацииПродукт токсичен, выявлен падеж1 животного, у остальных животныхдегенеративные изменения в печении почкахПродукт слаботоксичен, падежа нет,у 3-4 животных выявлены измененияПродукт слаботоксичен, падежа нет,у 3-4 животных выявлены измененияПродукт слаботоксичен, у 4-5 животных выявлены в печени и почках изменения дегенеративные, падежанет, 3=5,5%Продукт не токсичен, падежа и иэменений в органах не выявлено,8=12,5%. 10 Продукт слаботоксичен, у 4 животных выявлены дегенеративные изменения в печени и почках,8=12,0%) з Ацетоновый экстракт П р и м е ч а н и е. П- число повторностей; количество животных в группе 5-10; 0 - надежность,Составитель С.ПыповаТехред И.Иоргентал Корректор Н,Ревская,Редактор Н.Яцола Заказ 1604 Тираж 421 ПодписноеВНКП 1 И Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Иосква, Ж, Раушская наб д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 Биомасса бактерий, ПредлагаемыйВСВ-1 ЖПИ-В 1743 (пример 4),