Способ моделирования инфекционного процесса после трансплантации

(5)5 ИТЕТКРЫТИЯМ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ИПРИ ГКНТ СССР АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ тои хир нов, ов и 1, ч,90,АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1(56) Зего 1 а А, . е 1 а.-Яогдегу, 198Й 1, р. 35-40, Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и трансплантологии.Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа.Способ осуществляют следующим обра. зом,За сутки до операции суточную патогенную культуру золотистого стафилококка (штамм 489) суспендируют. в 5 мл физиологического раствора, инкубируют при 37 С в течение 3 ч на шутеле.Выбор штамма 489 условен, так как может быть использован и любой другой другой штамм с высокой степенью патогенности, Однако на протяжении всех этапов экспериметальных исследований необходимо использовать определенный штамм для чистоты эксперимента.После инкубации центрифугируют в течение 10 мин при 7000 об/мин, затем надосадочную жидкость сливают, осадок ресуспендируют в 5 мл стерильного физиологического раствора и вновь центрифугируют(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к .хирургии и трансплантологии. Цель - повышение воспроизводимости способа. Бактериальный агент вводят непосребдственно в трансплантат в степени 10 - 10 клеток и через 2 - 3 ч трансплантиру 7ют сосудистый трансплантат экспериментальному животному, Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели инфекционного процесса в сосудистом трансплантате 30/, по сравнению с прототипом,10 мин при 7000 об/мин для получения высокой концентрации. Степень мутности со ставляет 10" клеток (по стандарту мутности).В пробирку с 5 мл данной культуры помещают синтетический сосудистый гофрированный протез длиной 3 см и инкубируют его в течение суток при 4 С (в холодильни-. ке), Диаметр трансплантата подбирают в соответствии с диаметром аорты экспериментального животного (0,6 - 1 см),За 2 - 3 ч до операции протез перемещают в стеоильную чашку Петри до полного высйхания при комнатной температуре.Операцию проводят в условиях стерильной операционной под интубационным наркозом после премедикации дроперидолом и калипсолом, иньецированными внутримышечно в одном шприце за 30 мин до операции, для интубации используют 2;-ный раствор гексенала, разведенный 50 мл физиологического раствора, который иньецируют внутривенно струйно через катетер в периферическую вену передней лапы подконтролем роговичного рефлекса, После интубации наркоз поддерживают внутривенным капельным введением фентанила по 2 г через 20 - 30 мин на физиологическом растворе (20.0.мл) После обработки операционного поля иодом производят разрез по средней линии живота, вскрытие брюшной полости и обкладывание ее пеленками, выделяют брюшную аорту после рассечения париентальной 10 брюшины, аорту пережимают на двух зажимах, наложенных ниже почечных артерий и выше бифуркации аорты. После пересечения аорты производят ее протезирование синтетическим гофрированным протезом(длина 3 см, диаметр соответствует диаметру аорты), поскольку протез был заранее инфицирован патогенной культурой. производят отграничение свободной брюшной 20 полости и забрюшинной клетчатки стерильПосле тщательного гемостаза ушивают брюшину непрерывным кетгутовым швом. Рану, передней брюшной стенки наглухо ушивают послойно шелковыми швами.П р и м е р 1, Беспородная собака муж 30 ского пола весом 16 кг.За сутки до операции суточную патогенную культуру золотистого. стафилококка (штамм 489) суспендировали в 5 мл физиологического раствора, инкубировали при 37 С в течение 3 ч в шутеле. Затем центрифугировали в течение 10 мин при 7000 об/мин надосадочную жидкость сливали, осадок ресуспендировали в 5 мл . стерильного фи 40 зиологического раствора и вновь центрифугировали 10 мин при 7000 об./мин, для получения высокой концентрации. Степеньмутности в данном случае составила 10клеток (по стандарту мутности), . В пробирку с 5 мл данной культуры помещали синтетический сосудистый гофрированный протез длиной 3 см и диаметром 1 см и инкубировали его в течение суток при 4 С(в холодильнике),После инкубации протез перемещали в стерильную чашку Петри и после полноговысыхания его через 2 ч начинали операцию.Операцию проводили в условиях стерильной операционной под интубационным наркозом, за 30 мин до операции произвели премедикацию дроперидолом и калипсолом по 3 г, инъецированными внутримышечно в одном шприце, Для полного расслабления дыхательной мускулатуры в 50 55 ными пеленками для предотвращения распространения бактериального агента. После окончания протезирования снимают . дистальный, а затем проксимальный зажимы с аорты и восстанавливают кроваток. 25 момент интубации использовали 20-ный раствор.гексенала, разведенный 50 мл физиологического раствора, которым инъецировали внутривенно струйно через катетерв периферическую вену передней лапы под контролем роговичного рефлекса. После интубации наркоз поддерживали внутривенным капельным введением фентанила по 2 г через 20 - 30 мин (в зависимости от роговичного рефлекса) на 200 мл физиологического раствора.После интубации и подключения интубационной трубки к аппарату искусственной вентиляции легких брили переднюю брюшную стенку лежащего на спине и фиксированного за лапы животного. Операционное поле на всем протяжении передней боюшной стенки обрабатывали. йодом, затем производили разрез по средней линии живота на протяжении 25 см,.вскрывали брюшную полость и обкладывали ее пеленками, После рассечения париентальной брюшины выделяли брюшную аорту (инфраренальный отдел). Аорту пережимали на. двух зажимах, наложенных ниже почечных артерий (на 0.5 см) и выше бифуркации аорты на 1 см, после пересечения аорты производили ее протезирование синтетическим гофрированным протезом длиной 3 см, заранее инфицированным золотистым стэфилококком со степенью 10 клеток. Диаметры аорты и протеза одинаковы - 1 см. До протезирования аорты и начала манипулирования в брюшной полости инфицированным протезом обкладывали стерильными пеленками свободную брюшную полость и забрюшинную клетчатку, отграничив их тем самым от возможного инфицирования во время операции. После окончания протезирования снимали дистальный, а затем проксимальный зажимы и восстанавливали кроваток, Время пережатия аорты составило 24 мин, кровопотеря - около 60 мл. После тщательного гемостаза протез реперитонизировали, ушив брюшину непрерывным кетгутовым швом. Рану передней брюшной стенки ушили послойно наглухо шелковыми швами, Пробуждение собаки от наркоза наступило через 1 ч 40 мин.Достоверность инфицирования трансплантата в зоне протезирования аорты была подтверждена сцинтиграфией с 99 М Тс-лейкоцитами через 2 ч после операции (после ,полного пробуждения животного). При -сцинтиграфии протез четко визуализировался на персистеноскопе гамма-камеры,что свидетельствовало о миграции в зону протезирования меченых лейкоцитов, а значит, наличии в этой зоне инфекции. Контрольная сцинтиграфия через 8 сут после10 40 50 операции также подтвердила наличие инфекционного процесса в зоне протеза, так как инфицированный трансплантат четко визуализировался, Кроме того, полученные результаты подтверждены при аутопсии, проведенной на 11-е сутки после операции(в день смерти собаки). На аутопсии обнаружено около 900 мл крови в брюшной полости вследствие прорезывания двух швов проксимального анастомоза и аррозионного кровотечения, что безусловно явилось результатом развития в зоне реконструкции аорты инфекционного процесса. Кроме того, бактериологическое исследование резецированного во время аутопсии протеза идентифицировало рост патогенной. культуре золотистого стафилококка (штамм 489), что свидетельствует. о прогрессировании инфекционного процесса и достоверно подтверждает практическую значимость воспроизведенной модели инфицированного трансплантата.П р и м е р 2. Беспородная собака,жен. ского пола массой 15,5 кг,За сутки до операции суточную патоген :ную культуру золотистого стафилококка (штамм 489).суспендировали в 5 мл. физиоло- . гическогораствора, инкубировали при 37 С в течение 3 ч на шу 1 еле. Затем центрифугировали в течение 10 мин при 7000 об/мин. На досадочную жидкость сливали, осадок ресуспейдировали 5 мл стерильного раствора и вновь центрифуги ровали 10 мин при 7000 об./мин, для получения высокой концентрации. Степень мутности в данном слу чае составила 10 клеток (по стандарту мутностй).В пробирку с данной культурой помещали синтетический сосудистый гофрированный протез длиной 3 см, диаметром 0,9 см и инкубировали его в течение суток при 4 ОС , (в холодильнике).После инкубации протез перемещали встерильную чашку Петри и после полного высыхания его через 3 ч начали операцию Операцию производили в стерильных условиях (как и во всех случаях) под интубационным наркозом, за 30 мин до операции производили премедикацию дропередолом и калипсолом по 3 г, иньецированными внутримышечно в одном шприце, Для полного расслабления дыхательной мускулатуры в момент интубации использовали 2-ный раствор гексенала, разведенный50 мл физиологического раствора, который ,55 иньецировали внутривенно струйно через катетер в периферическую вену передней лапы под контролем роговичного рефлекса. После интубации наркоз поддерживали внутривенным, капельным введением фентанила по 2 г через 20-30 мин (в зависимости от роговичного рефлекса) на 200 мл физиологического раствора.Укладывали собаку на операционный стол на спину и фиксировали к столу вытянутые лапы, Подключали к аппарату искусственной вентиляции легких интубационную трубку. Брили переднюю брюшную стенку, а затем обрабатывали йодом ее на всем протяжении. После обработки операционного поля производили разрез по средней линии живота на протяжении 25 см, вскрывали брюшную полость и обкладывали ее пеленками. После рассечения париетальной брюшины выделяли брюшную аорту (инфраренальный отдел). После выделения аорты обкладывали свободную брюшную иолость, а также забрюшинную область пеленками, отграничив от попадания инфекции. Аорту пережимали на двух зажимах, наложенных ниже почечных артерий (на 0,5 см) и выше бифуркации аорты на 1 см. После пересечения аорты производили ее протезирование синтетическим гофрированным протезом длиной 3 см, диаметром 0,9 см (как и аорта), заранее инфи цированным золотистым стафиликокком (штамм 489) со степенью 10 клеток, после окончания протезирования снимали дистальный, а затем проксимальный зажимы и восстанавливали кровообращение. Время пережатия аорты составило 29 мин, кровопотеря - около 70 мл. После тщательного гемостаза протез реперитонизировали, ушив брюшину непрерывным кетгутовым .швом. Рану передней брюшной стенки уши-ли послойно наглухо шелковыми швами, пробуждение собаки от наркоза наступило через 1 ч 55 мин.Достоверность инфицирования трансплантата в зоне протезирования аорты была подтверждена сцинтиграфией с 99 М Тс-лейкоцитами через 2,5 ч после операции(после полного пробуждения). При сцинтиграфии протез четко визуализировался на персистеноскопе гаммы-камеры, что свидетельствовало о миграции в зону инфекции меченых лейкоцитов, Собака умерла на 7-е сутки после операции от аррозионного кровотечения из зоны протезирования вследствие прорезывания 6 швов проксимального анастомоза, что было выявлено при аутопсии. В брюшной полости было около 1 л крови. Бактериологическое исследование протеза идентифицировало рост культуры золотистого стафилококка (штамм 489). Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели инфекционного процесса в сосудистомЗаказ 1150 Тираж 298 ПодписноеВНИИПИ Государственного ком 1 тета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4(5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 трансплантате на 30; по сравнению с прототипом,Формула изобретения Способ моделирования инфекционного процесса после трансплантации путем введения экспериментальному животному патогенной культуры, о т л и ч а ю щ и й с я, тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа, бактериальный агент вводят непосредственно в трансплантат в степени 5 10 - 10 клеток и через 2-3 ч трансплантиру 6 7ют сосудистый трансплантат животному.