Способ деполимеризации гепарина, сульфомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия

(51) 5 С 08 В 37/10 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЙИ 3911 ИО;: , . ц .д 13 ф,РщК ПАТЕНТУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТпО изОБРетениям и ОТКРытиямПРИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ДЕПОЛИМЕРИЗАЦИИ ГЕПАРИНА,СУЛЬФОМУКОПОЛИСАХАРИДА ИЛИ ДЕОКСИРИБОНУКЛЕИНАТА НАТРИЯ(57) Изобретение относится к химии Изобретение относится к химии полисахаридов, конкретно к способу деполимеризации гепарина, сульФомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия, которые обладают противотромбозным эАФектом.Целью изобретения является упрощение процесса и обеспечение возможностиуправления степенью деструкции при сохранении целевым продуктом строенияисходного,Согласно предлагаемому способу вкачестве деполимеризующего агента используют перекись водорода в присутствиикаталитических количеств сульФата железа (11) и процесс проводят при рН 4-6,3,температуре 50-80 С при соотношении исходный продукт (мас.): ЗОЕ-ная пере.801639432 А 3 2полисахаридов, в частности к деполимериэации гепарина, сульАомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия, которые обладают противотромбоэным эдхЬектом. Цель изобретения - упрощение процесса, возможность управления степеньв деструкции при сохранении целевым продуктом строения исходного. Деполимеризацию ведут обработкой перекисью водорода в присутствии каталитических количеств сульФата Ре(2+) при рН 4-6,3, температуре 50- 80 С и в водной среде. Процесс ведут при соотношении исходный продукт (мас.): ЗОУ,-ная перекись водорода (объемн.), равном 5: 1, с прекращением процесса в нужное время обработкой этанолом при рН 7. 4 табл . кись водорода (объемн.), равном 5:1, с прекращением процесса в нужное время обработкой этанолом при рН 7.П р и м е р 1. 20 г (1,666 ммоль) гепарина натрия (Американской Аармакопеи) растворяют в 100 мл воды (МВ= =12000), 4 г катионыой смолы (АшЬег 1 хйе 1 Е - 120, Н Форма) добавляюткк раствору при перемешивании. Как только рН раствора уменьшается до 4,0-4,5, смолу отфильтровывают и Аильтрат собирают в колбу с круглым днищем. В процессе нагрева с обратным холодильником его подогревают при 80 С в водяной бане и затем к раствоору добавляют при перемеиивании 4,2 мп реагента, полученного путем смешения 4,0 мп ЗОХ-ного ВО и 0,2 мл раство 1639432 4(в пересчете на Б), %Определение: ра Ре(1) (раствор А=1,5 г Ре 804 7 Н Ов 100 мл воды),Раствор поддерживают при 80 С ификсируют значения рН. В заранееопределенные моменты времени из колбы отбирают по 20 мп пробы. В каждуюпробу быстро вводят с одновременнымперемеииванием несколько капель 0,1 ММаОН для того, чтобы повысить рН до7,0, 5 мл 0,5 М раствора ИаС 1, 25 мпэтанола капельным методом, 3,3 мп20%-ного раствора ИаС 1. Осадок собирают, промывают в этаноле, а затемв ацетоне. С вечера до утра его высу шивают в вакуумной печи при 50-60 Си пробы подвергают контролю с помощьювискоэиметрии на определение молекулярного веса (ЦВ) и концентрации(крепости),20Результаты представлены в табл.1.П р и м е р 2, 20 г гепарина натрия растворяют в 100 мп воды при естественном рН=5,6. Раствор нагреваютодо 50 С с обратным холодильником в 25водяной бане, затем к нему добавляют4,6 мл реагента, полученного путемсмещения 4,0 мп 30%-ного Н О и0,6 мп раствора А (см. пример 1).Реакционную смесь выдерживают при50 С и Аиксируют его значение рН.В заданные периоды времени из колботбирают по 20 мл пробы. Пробы затем подвергают обработке., аналогичной примеру 1.35Результаты сведены в табл. 2.П р и м е р 3. 20 г существующейв природе смеси сульфомукополисахарида следующего состава, %:Кондроитинсульйат (КС) 20ДерматансульФат (ДС) 50Гепарансульфат (ГС) 30,имеющей следующие характеристики:Удельное оптическое 45вращение, градГексуроновые кислотыпосле гидролиэа+п-диметиламинобензальдегид), % 30 Компоненты (электройорез на ацетилцеллюлозе, 0,04 М ацетат бария, рН 5,0), %Хондроитинсульат 20 ДерматансульАат 50 Гепар анс ул ьфат 30 подвергают обработке, описанной в примере 1. Пробы отбирают и фиксируют их значения рН, оценивают истинную вязкость и электройорез.Результаты приведены в табл. 3. П р и м е р 4, 20 г деоксирибонуклеината натрия мпекопитающего растворяют в 100 мп воды при естественном рН=6,3, Растворяют, нагревают с обратным холодильником, после этого осуществляют процедуру, описанную в примере 1. В заданные периоды времени из колбы отбирают пробы. По каждой пробе фиксируют рН, остаточный НО и точку опалесценции (добавляя по капле этанол в количестве, необходимом для постоянной опалесценции раствора), Затем к осадку деполимернзованных нуклеинатов добавляют два объема этанола.Результаты представлены в табл.4.Таким образом, предлагаемый способ позволяет получать молекулы точно такого же строения, что и исходные, и отличающиеся только МВ, благодаря че,му появляется воэможность изучения изменений их биологических и фармакологических свойств в зависимости только от МВ; позволяет получать целевой продукт с довольно низким содержанием токсичных тяжелых металлов, такихкак медь, при использовании его отпадает необходимость обработки токсичными хелатными реагентами для удаления загрязнений. Так как реакцию можно легко прекратить в любой заданный момент времени, с помощью предлагаемого способа можно получать однородный хорошо идентифицируемый продукт.Согласно предлагаемому способу можно получать олигомеры, отличающиеся от исходной молекулы только МВ, которые не обладают характерными для исходных продуктов побочными токсичными э 4 ектамиКроме того, основные побочные эАФекты, вызываемые исходными молекулами, такие как кровотечение, анайилактические реакции, торможение агрегации кровяных пластинок, могут быть исключены путем уменьшения МВ с помощью предлагаемого способа без,4 0 аблиц Электр сборе э Истинная вязкость,Г К 30/10 30/85 0,459 2 0,365 1 30 60 120 4,9 4,7 4,5 4,4 3,8 80 00 30/75 15/35 изменения при этом терапевтических ифармакологических свойств. Формула изобретения Способ деполимеризации гепарина, сульФомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия обработкой деполимеризующим агентом, содержащим перекись водорода и соль двухвалентного металла, при повышенной температуре в водной среде, о т л и ч ающ и й с я тем, что, с целью упроще 9432 6ния процесса и обеспечения воэможнос 1ти управления степенью деструкции при сохранении целевым продуктом строения исходного, в качестве деполимеризующего агента используют перекись водорода в присутствии каталитических количеств сульФата железа (Т 1) и процесс проводят при рН 4-6,3, температуре 50-80 С при соотнощении исходный продукт (мас.): ЗОХ-ная перекись водорода (объемн.), равном 5: 1 с прекращением процесса в нужное время обработкой этанолом при рН 7,1639432 Точка опалесценции, об(об Время, ч рН ОстаточныйНОСоставитель Н.НарышковаРедактор Л.Веселовская Техред Д.Олийнык Корректор Н.Ренская Наказ 935 Тираж 314 ПодписноеВН 61 ПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, 3-35, Раушская наб д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 0 1 2 3 .4 5,9 6,5 6,5 6,5 6,5 100 65 59 50 42 0,500 0,550 0,630 0,680 О, 680