Способ определения активности жирорастворимых антиокислителей

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК 14151 С 01 М 718 ЕНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫ ИСАНИЕ ИЗОБРОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Институт физиологии растенийАН УССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИЖИРОРАСТВОРИМЫХ АНТИОКИСЛИТЕЛЕИ(57) Изобретение относится к биотехнологии и касается способов определения. Целью изобретения являетсяповьппение точности определения иуменьшение трудоемкости способа.Это достигается тем, что жирорастворимые антиокислители растворяют всубстрате, содержащем производныевысших жирных кислот, окисляютсубстрат с исследуемым веществом ибез него барботированием воздухомс отводом последнего, измеряют содержание продуктов окисления, строяткинетическую кривую, находят по нейпериод индукции и устанавлйвают позначению последнего активности антиоксиданта, причем измерение содержания продуктов окисления проводятв отводимом воздухе, а в качествепродуктов окисления исследуют углеводородный газ, причем, .если образуется несколько газов, определяют тот,содержание которого вьппе. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.Изобретение относится к биотехнологии н касается способов определения.Цель изобретения - повышение точ 5 ,ности определения и уменьшение трудоемкости способа.Способ осуществляют следующим образом.Раствор исследуемого вещества в субстрате и чистый субстрат, служащий контролем; помещают в герметичные камеры, сделанные из тефлона или другого инертного материала. Камеры подключают к обогатительному устройствуу. Обогатительное устройство включаетт в себя коммутирующие вентили и , обогатительные колонки. Коммутирующие. вентили имеют два положнения:"Сорбция" и "Десорбция"Воздух откомпрессора поступает в камеры, бар, ботирует образцы и поступает на соответствующее коммутирующее устрой ство. В положении коммутирующего . устройства "Сорбция" воздух попада- , 25 ет в обогатительную колонку, а в положении "Десорбция" через соответствующий ротаметр выходит в атмосферу. В положении "Десорбция" соответствующего коммутирующего устройст , ва через обогатительную колонку будет проходить азот, являющийся газом- носителем газового хроматографа. Для определения содержания углеводородных газов в воздухе, прошедшем через камеру, соответствующее коммутирующее устройство переводят в положение "Сорбция", одновременно соответствующую обогатительную колонку погружают в сосуд с жидким азотом. 0 При этом углеводородные газы, содержащиеся в воздухе, барботирующемокисляемые образцы,будут сорбироваться в соответствующей обогатительной колонке. Сорбция углеводород ных газов в обогатительных колонках, погруженных в жидкий азот, происходит вследствие того, что температура кипения углеводородных газов значи-, тельно выше температуры кипения азо 50 та, следовательно, углеводородные газы должны конденсироваться в обогатительной колонке. Продолжительность периода сорбции углеводородных газов выбирают произвольно в пределах 5-30 мин. Нижний предел55 длительности периода сорбции обусловлен временем, необходимым для установления равномерного тока воздуха в обогатительной колонке после еепогружения в жидкий азот, По окончании периода сорбции соответствующуюобогатительную колонку вынимают изсосуда с жидким азотом и переносятв специальную печку, придаваемую кобогатительному устройству. Одновременно, соответствующий коммутирующийвентиль переводят в положение "Десорбция". При нагреве обогатительных колонок углеводородные газы де"сорбируются и с током азота увлекаются в газовый хроматограф. Полученная при этом хроматограмма фиксируется на самописце, на ленте самописца отмечают время проведения сорбции и десорбции, По высоте пиков углеводородных газон можно судить оих содержании в воздухе, прошедшемчерез окисляемые образцы, в течениепериода сорбции. Для упрощения построения кинетической кривой окисления длительность периода сорбциивыбирают одну и ту же для всех образ"цов и используют в течение всегоанализа, Для построения кинетической кривой окисления данного образцапо оси ординат откладывают высотупика углеводородного газа, а по осиабсцисс - время, соответствующее се-.,редине периода сорбции, для которойбыла получена соответствующая хроматограмма. Определение периода ин 1дукции окисления и расчет значенияактивности антиокислителя проводятаналогично известному,П р и м е р. Для проверки адекватности предлагаемого способа определения АОА жирорастворимого вещества проводят параллельное измерение.АОА синтетического антиоксиданта нонола по предлагаемого способу и по известному. В качестве субстрата используют линетол, температура субстрата80 С. Скорость тока воздуха, барботирующегоокисляемые образцы, 100 мл/мин.Определение АОА проводят для трехконцентраций раствора ионола в линетоле: 5 10 И, 10М и 210 М. Вобразцах, где определение АОА прово-.дят по известному способу, начальныйобъем раствора составляет 5 мл, пробы для определения содержания гидроперекисей в субстрате отбирают двараза в час по 0,2 мл. В образцах,анализируемых по предлагаемому способу, объем раствора составляет1 мл, продсагаительность периода сорб 1415153ции 5 мин, частота проведения измерений один раз в 10 мин, Строят кинетические кривые окисления, полученные обоими способами. Кинетические кривые окисления, полученныедля растворов ионола различной концентрации по предлагаемому способупрактически совпадают с кривыми,полученньди по известному. Совпадение кинетических кривых окислениясвидетельствует об адекватности предлагаемого способа определения АОА.Значения периодов индукции для растворов ионола в различной концентрации и расчетные значение АОА ионолаприведены в таблице. Как видно из таблицы значенияАОА ионола, полученные обоими способами, практически совпадают. Приэтом средняя квадратичная ошибка определена АОА по предлагаемому способу меньше, а следовательно, точностьопределения больше. Большая точность 25достигается тем, что по предлагаемому способу при построении кинетической кривой окисления используетсябольшее число точек. В данном приме-.ре частота определения продуктов 30окисления при измерении АОА по предлагаемому способу в три раза выше,чем по известному способу. За счетувеличения частоты определения продуктов окисления уменьшается систе 35матичгская ошибка определения периода индукции, а следовательно, и ошибка определения АОА. Помимо этого,при определении продуктов окисленияпо содержанию углеводородных газовв воздухе, прошедшем через окисляемые образцы, происходит автоматическое усреднение результата определения. Это усреднение достигается засчет того, что измеренное содержаниеуглеводородных газов соответствуетцелому периоду сорбции,Кроме того, при определении АОАжирорастворимого вещества по предлагаемому способу уменьшен, по сравнению с известным, объем образца, Сле,довательно, при равной концентрацииисследуемого вещества в субстратепредлагаемый способ позволяет уменьшить количество необходимого дляопределения, вещества. Это особенноважно при определении АОА липидов,так как позволяет уменьшить объембиологического материала, из которого экстрагируются липиды. Очевидно, что уменьшение объема при определении АОА по предлагаемому способу достигается за счет того, что при определении содержания продуктов окисления по содержанию углеводородных газов в воздухе, прошедшем через окисляемые образцы, отпадает необходимость отбора проб из образца. Постоянный объем образца при определении АОА по предлагаемому способу уменьшает вероятность ошибки, возникающей при определении АОА по известному, за счет изменения парциального давления кислорода в уменьшенном, по сравнении с начальным, объеме образца.Кроме того, предлагаемый способ определения ЛОА менее трудоемок, так как несмотря на необходимость большого числа измерений, сами процедуры по измерению содержания углеводородных газов в воздухе, прошедшем через окисляемые образцы, очень просты и сводятся к переключению коммутирующих вентилей. При описленни субстрата может выделяться или , дцн. или несколько углеводородных газов В предлагаемом способе определение содержания углеводородов проводят с помощью газового хроматографа, поэтому по хроматограмме можно сразу определить, каке газы выделяются при окислении используемого субстрата, В приведенном примере в качестве субстрата использовали линетол (смесь этиловых эФиров жирных кислот). При окислении линетола выделялись этан и этилен, причем содержание этана значительно превышало содержание этилена, поэтому о содержании продуктов окисления в субстрате судили по содержанию этана. При использовании другого субстрата могут выделяться другие газы, причем при выделении нескольких газов определяют тот содержание которого вьпде.Предлагаемый способ позволяет повысить точность определения в 4- 5 раз и исключить операции многократного отбора аликвот, титрования гидроперекисей.Формула изобретения1. Способ определения активностижирорастворимьк антиокислителей,включающий растворение Их в субст1415153ИВВВааайваЮВ Способ определения АОА Концентрация ионола г М г/мл Р 10,Редактор Л.Зайцева Заказ 3869/41 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5рате, сбдержащем производные высшихжирных кислот, окисление субстратас исследуемым веществом и без негобарботированием воздухом с отводомпоследнего, измерение содержания продуктов окисления, построение кинетической кривой окисления, нахождение по ней периода индукции окисления и установление по значению последнего активности антиокснданта,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности определе" ния и уменьшения трудоемкости способа" измерение содержания продуктов окисления проводят в отводимом воздухе, а в качестве продуктов окисления исследуют углеводородный газ.2, Способ по п,1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что при образовании в процессе окисления нескольких углеводородных газов определяют тот, содержание которого выпее.