Способ определения внутрисосудистого свертывания крови

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 01 М 33/4 ЫЙ НОМИТЕТ СССР ОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИОСУДАРСТ ПО ДЕЛАМ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ(71) Алтайский госудцинский институт им рственныи мед Ленинского ко(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ(57) Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию крови, и может быть использовано при лабораторной диагностике внутрисосудистого свертывания крови. Цель изобретения - повышение чувствительности способа диагностики внутрисосудистого свертывания крови за счет отделения и количественного определения пов режденных (мацерированных) эритроцитов. Стабилизированную и разведенную физиологическим раствором кровь ис,801288608 д 1 следуемого больного наслаивают на раствор верографина и фиколла с плотностью 1,077. После центрифугирования содержимое пробирки разделяется на 3 слоя: верхний - разведенная физиологическим раствором плазма, лишенная клеток, средний слой - раствор фиколла - верографина, содержащийклетки крови, плотность которых меньше 1,077, нижний слой - клетки крови, имеющие плотность выше 1,077. Между верхним и средним слоем образуется видимое кольцо из всплывших клеток с плотностью менее 1,077. У здоровых доноров клеточное кольцо состоит пре/имущественно из лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов. У больных с внутрисо- фф судистым свертыванием крови в клеточном кольце в большом количестве об- С наруживаются поврежденные эритроциты, которые отделяются и подсчитываются в камере Горяева. При внутрисосудистом свертывании крови регистрируется значительное увеличение количества . у) поврежденных эритроцитов (в 10 и более раз) по сравнению с контролем.Изобретение относится к медицине,в частности к исследованию крови,и может быть использовано при лабораторной диагностике внутрисосудистого свертывания крОви. 5Цель изобретения - повышение чувствительности способа диагностикивнутрисосудистого свертывания кровиза счет отделения и количественногоопределения поврежденных (мацерированных) эритроцитов,Способ осуществляется следующимобразом,Предварительно готовят 36 173-ный15раствор верографина и 97-ныйраствор Фиколла. Смешивают 10 частейраствора верографина с 24 частямираствора Фиколла. Полученный растворимеет плотность 1,077.Из зоны исследуемого силиконированной иглой берут кровь и смешивают ее в силиконированной пробиркес 3,87.-ным раствором цитрата натрияв соотношении 9;1. 2 мл стабилизированной крови разводят 6 мл Физиологического раствора хлорида натрия.В силиконированную пробирку набирают 3 мл раствора фиколла-верографина, сверху, при наклонном положениипробирки (под углом 30-35 ), пипеткой осторожно наслаивают 8 мл разведенной крови. Затем пробирку центриФугируют в течение 40 мин при 400После центрифугирования содержимоепробирки разделяется на 3 слоя: верхний - разведенная физиологическимраствором плазма, лишенная клеток,средний слой - раствор Фиколла-верографина, содержащий клетки крови,плотность которых меньше 1,077;нижний слой - клетки крови, имеющиеплотность выше 1,0/7. Между верхними средним, слоями образуется видимоекольцо из всплывших клеток с плотностью менее 1,077. У здоровых доноров клеточное кольцо состоит, преимущественно, из лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов. У больных с внутрисосудистым свертыванием крови вклеточном кольце.в большом количестве обнаруживаются поврежденныеэритроциты,Средний слой вместе с клеточнымкольцом переносят пипеткой в другуюпробирку и отмывают 6-кратным объемом Физиологического раствора хлорида натрия 2 раза, затем центрифугируют в течение 10 мин при 400 Осадок ресуспендируют в 2 мл Физиологического раствора хлорида натрия.Подсчет количества эритроцитов в осадке производят в камере Горяева. Для этого 0,1 мл осадка разводят 1,9 мл физиологического раствора хлорида натрия, заполняют полученным разведением камеру Горяева и подсчитывают эритроциты в 100 средних квадратах. Полученная цифра умножается на 5010 . Результат соот 6ветствует концентрации эритроцитов в 1 л раствора. Так как объем физиологического раствора, взятого для разведения осадка, равен объему первоначально взятой крови (2 мл). то и полученное количество эритро- цитов среднего слоя в растворе равно их количеству в цельной крови.У здоровых доноров плотность эритроцитов крови колеблется в интервале 1,070-1,090, но большинство эритроцитов имеет плотность 1,085+0,0025. Количество эритроцитов, имеющих плотность меньше 1,077 и выделяющихся при центрифугировании в среднем слое и клеточном кольце, не превышает у здоровых доноров 4 10 /л крови.8У больных с внутрисосудистым свертыванием крови повреждение мембраны эритроцитов приводит к частичной потере вещества и снижению их плотности. При этом количество поврежденных эритроцитов в среднем слое и клеточном кольце возрастает и превышает этот показатель у здоровых людей в 10-100 раз.П р и м е р 1. Больная Д., 22 года. На фоне раннего излития околоплодных вод и длительного безводного периода наступила частичная отслойка плаценты с последующим проФуэным маточным кровотечением, кровоизлияниями в местах инъекций, острой почечной и дыхательной недостаточностью. При исследовании системы гемостаза выявлены глубокая .гипокоагуляция, снижение всех Факторов свертывания, антитромбина-Ш, плазминогена, положительные тесты паракоагуляции, тромбоцитопения. На основании всех перечисленных данных был диагностирован острый акушерский ДВС-синдром, фаза гипокоагуляции. Проведено определение Фрагментированных эритроцитов известным и предлагаемым способами. Известным способом обнаружено 105 10 /л фрагментированных81288608 4Результаты обследования больныхс диссеминированным внутрисосудистымсвертыванием приведены в таблице. эритроцитов, а предлагаемым - 387 х х 10 /л.П р и м е р 2, Больной С., 62 года. После произведенной аденомэктомии у больного наступила анурия, 5 11/ затем кровотечение из дренажа, операционного шва и .из мест инъекций. При исследовании системы гемостаза выявлены гипокоагуляция, положительные тесты паракоагуляции, гипофибриногенемия, тромбоцитопения и повышение уровня продуктов деградации фибрина. При определении Фрагментированных эритроцитов обоими способами выявле 3 но: предлагаемым способом 44 10 /л 15 фрагментированных эритроцитов, известным способом фрагментация эритроцитов не выявлена. На основании клинико-лабораторных данных у больного диагностирован острый послеопера6 ционный ДВС-синдром, фаза гипокоагуляции. Содержание эритроцитов,х .10 /л, при определениипо способу известному предлагаемому 30,6 0 21,0 30,0 67,0 70,0 115,0 0 44,0 0 14,0 0 33,9 2,9 105,0 387,0 33,92,5 18,4 17,1 66,3 020,0 1 ф 7 0 3,8 0 О 42,311,2 20,0 79,4 0 О 8,026,1 Из таблицы видно, что при ис пользовании известного способа повышенная Фрагментация эритроцитов обнаружена лишь у 7 из 24 больных (29 Е), а в предлагаемом способе - у 20 больных (83 Е). При этом выяснилось, что известный способ выявляет повьппенную фрагментацию лишь при очень высоком числе поврежденных эритроцитов, выявляемых предлагаемым способом (более 60 10 /л) . 1020,0 225023 2968,0 38,5 0 24 80,0 135,0 55 Средняяарифметическая 56,04 173,74 Использование предлагаемого способа позволяет повысить чувствитель0 ность диагностики внутрисосудистогосвертывания крови за счет выделенияи подсчета поврежденных эритроцитов.При внутрисосудистом свертывании 10 0 крови снижается деформобильность 30 11 0 эритроцитов и повреждается их мембрана Фибрином отложившимся в микро 0 сосудах. Это приводит к частичнойпотере вещества эритроцитов и снижению их плотности. При осуществлении 35 14предлагаемого способа поврежденныеэритроциты отделяются от, обшей массы 15 0 эритроцитов и выделяются в отдельноеклеточное кольцо, что облегчает их 16выявление и подсчет. В крови здоровых людей (контроль) количество эритроцитов в этом слое колеблется в 18пределах (1-4) 10 /л. При внутрисо 8судистом свертывании крови регистрируется значительное увеличение ихколичества в выделяемом слое (в 10 201288608Составитель Л.ШилинаТехред В.Кадар Корректор А.Зимокосов Редактор О.Бугир Заказ 7802/43 Тираж 799 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Иосква Ж, Раушская наб., д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие г.ужгород, ул. 11 роектная, 4 Формула изобретения Способ определения виутрисосудистого свертывания крови путем биохимического исследования крови под микроскопом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повыпения чувствительности способа, пробу крови разводят физиологическим раствором и центрифугируют в градиенте плотности фиколл-верографина, отделяют слой, имеющий плотность 1,077, подсчитыва ют в нем число эритроцитов и при увеличении его относительно нормы определяют внутрисосудистое свертывание крови.