Способ получения лимфоцитарныхсуспензий из лимфоузлов крупногорогатого ckota
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
Союз Советских Социалистических Республик(45) Дата опубликования описания 07.03,81 К, зС 12 М 7/00б 01 М 33/54 Государственный комитет СССРпо делам изобретении н открытий/Трудового Красного Знаменимия имени К, И. Скрябина 2) Авторы изобретен А. Московская ордена ветеринарная акаде Заявител 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИМФОЦИТАРНЬСУСПЕНЗИй ИЗ ЛИМФОУЗЛОВ КРУПНОГОРОГАТОГО СКОТА при 200 д в те крови получаю пензии лейкоци сорбции 20 мл5 используют 200 ной абсорбции крови. 3 1000 мл плотной сускратной абтисыворотки ля трехкратло 10000 мл ение 10 мин. И Около 3 мл тов. Для Одно иммунной а 0 мл крови, ад требуется ок1Изобретение относится к биологии, а именно к разделу генетики - иммуногенетике (генетический полиморфизм по фор. менным элементам крови). Оно может быть использовано при получении моно- специфических сывороток - реагснтов, необходимых для идентификации антигенов гистосовместимости, т. е. трансплантационных антигенов крупного рогатого скота (система В 01. - А, Ьоипе 1 ед 1 осфе ап 1 щепез),Известны методы абсорбции антилейкоцитарных сывороток сельскохозяйственных животных (крупного рогатого скота, свиней) суспензией лейкоцитов, выделенной из цитратной крови животных 111.Из описанных в литературе способов получения суспензий лимфоцитов, используемых для изготовления моноспецифических иммунных антилейкоцитарных сывороток крупного рогатого скота, наиболее близким к изобретению является способ 121, который проходит по следующей схеме,Кровь берут с 0,1 М этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) при рН 7,0, центрифу. гируют при 1500 об/мин в течение 20 мин, затем добавляют 6 ч дистиллированной воды на 1 ч. центрифугата для лизиса эритроцитов. Суспензию белых клеток крови дважды отмывают 0,15 М раствором Указанный способ абсорбции связан свзятием большого количества крови у жи вотных (2000 мл - для однократной абсорбции, 10000 мл - для трехкратной абсорбции 20 мл антисыворотки), что отрицательно сказывается на состоянии животных-доноров. Кроме того, при использовании дистиллированной воды для лизиса эритроцитов в суспензии лейкоцитов оказывается большое количество мертвых клеток (20 - 30%), что делает невозмож.ным проводить целенаправленнуто абсорб р цию сырых сывороток позитивными лейкоцитами, так, как реакция микроцитотоксического теста, необходимая для подбора абсорбентов перед проведением абсорбции, основана на использовании живых клеток (количество мертвых клеток не должно превышать 5 - 10%). Цель изобретения - повышение жизнеспособности клеток и предотвращение и 30 склеивания.810814 Составитель А, МакаровТехред А, Камышникова Редактор Л, Волкова Корректор О. Тюрина Заказ 2146 Изд, Мз 234 Тираж 530 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская иаб., д. 4/5Подписное Загорская типография Упрполиграфиздата Мособлисполкома 3Для достижения указанной цели после начесывания суспензию клеток наслаивают ех 1 егпроге по градиенту плотности фиколла и центрифугируют 30 - 40 мин, а в качестве буферного раствора использу. ют смесь следующего состава при р 11 7,2 - 7,4:0,0001 - 0,0002 н. раствор МдСз 0,1 - 0,2 мл 0,1 - 0,2 н. раствор,МаС до 1 л.Пример. При центрифугировании сус. пензии лимфоцитов, полученной из брыжеечных лимфоузлов, при 400 д (1800 об/мин) используют буфер следующего состава: 0,85%-ный раствор ЫаС 1 при рН 7,2, обогащенный Мд (из расчета по 0,2 мл 5/, МЫС, на 1000 мл 0,85 -ного раствора ХаС 1).Суспензию лимфоцитов центрифутируют при 1800 об/мин в буфере следующего состава:0,1 мл 4%-ного хлористого магния на 1000 мл 0,85/о-ного раствора ИаС.0,1 мл 5/о-ного хлористого магния на 1000 мл 0,85 -ного раствора БаС.0,1 мл бо/о-ного хлористого магния на 1000 мл 0,85/о-ного раствора ИаС 1,0,2 мл 4/о-ного хлористого магния на 1000 мл 0,85/,-ного раствора чаС.0,2 мл 5%-ного хлористого магния па 1000 мл 0,85%-ного раствора ИаС.0,2 мл 6 -ного хлористого магния на 1000 мл 0,85/о-ного раствора ХаС 1,При конечных и средних значениях буфера не происходит склеивания лимфоцитов и полученная суспензия лимфоцитов содержит необходимое для абсорбции количество клеток (50 - 7010 клеток в 1 мл суспензии).Время, затраченное на получение брыжеечных лимфоузлов при убое крупного рогатого скота и на выделение чистых лимфоцитов, доведено до минимума (30 - 40 мин). Это дает возможность повысить жизнеспособность лимфоцитов до 90 - 95%. При этом клетки выделяют из лимфоузлов в следующем порядке: поочередно начесывают лимфоузлы от каждого животного, немедленно наслаивают суспензию клеток на градиент плотности (9 фиколл+33/о верографин), центрифугируют 30 - 40 мин 4при 400 д и только после этого приступают к обработке лимфоузлов следующего животного,Таким образом, во время получения 5 чистых лимфоцитов клетки постоянно находятся в благоприятной среде (в градиенте плотности или в самом лимфоузле), котсрая максимально сохраняет их жизнеспособность.10 Жизнеспособность лимфоцитов проверяют после центрифугирования с помощью 1 % -ного раствора трипановой сини по Кззгпеуег-%езоп. Красят в течение 10 - 15 мин и под микроскопом устанавливают 15 жизнеспособность клеток. Полученныепредлагаемым способом суспензии лимфоцитов содержат не более 5 - 10/, мертвых клеток, что вполне пригодно для дальнейшей работы.20Формула изобретения Способ получения лимфоцитарных суспензий из лимфоузлов крупного рогатого 25 скота, включающий механическое начесывание клеток в буферный раствор, центрифугирование в градиенте плотности фиколла, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности клеток и 30 предотвращения их склеивания, после начесывания суспензию клеток наслаивают ех 1 етроге по градиенту плотности фиколла и центрифугируют 30 - 40 мин, а в качестве буферного раствора используют 35 смесь следующего состава при рН 7,2 - - 7,4:0,0001 - 0,0002 н. раствор МдСз0,1 - 0,2 млЛ. 0,1 - 0,2 н. раствор ХаС до 1 40 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. М. Ъаппап е 1 а Те Я. - А Нз 1 осоп ра 1 ЫИу зуз 1 егп 1 и йе ЯЯ ЯСКОРА ЯРЕС 1 ЕЯ, 1, ТгапзраптаБоп, 1972, ч. 14, 5. 2. К. 1 Яроопег е 1 а 1, ЕгЫепсе 1 ог роззЫе гпаог ЫзосогпраБи 1 у согпр 1 ех50 (В 1.А) и саШе, 1, . 1 гптцподепе 1 с, 1978,
СмотретьЗаявка
2779296, 18.06.1979
МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГОЗНАМЕНИ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯИМ. K. И. СКРЯБИНА
СЛЕПЧЕНКО АЛЛА РУВИМОВНА, ШИШКОВ ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ, ИТКИН БОМА ЗАХАРОВИЧ
МПК / Метки
МПК: C12N 7/00
Метки: ckota, крупногорогатого, лимфоузлов, лимфоцитарныхсуспензий
Опубликовано: 07.03.1981
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-810814-sposob-polucheniya-limfocitarnykhsuspenzijj-iz-limfouzlov-krupnogorogatogo-ckota.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения лимфоцитарныхсуспензий из лимфоузлов крупногорогатого ckota</a>
Предыдущий патент: Среда для поддержания культурыинфузорий
Следующий патент: Способ иммобилизации транскортина
Случайный патент: Функциональный преобразователь в. и. турченкова