Способ получения -инозиновой кислоты

( АВТОРСКОМУ СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИКГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству соединений, родственных нуклеиновым кислотам, и касается способа получения 5-инозиновой кислоты (5.-ИМФ) методом микробиологического синтеза.5-ИМФ является ценным реактивом, применяемым в разных областях экспериментальной биологии, служит исходным соединением для синтеза аномальных пуриноных производных, используемых как противоопухолевые препараты, а также находит применение в пищевой промышленности как высокоэффективная вкусовая приправа.Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта,Применяемый в предлагаемом способе штамм Вгеч 1 Ьассег 1 цт апипоп 1 адепез ВНИИгенетикаполучен из штамма Вг. апппоп 1 адепеэ ВНИИгенетика-5 направленным селекционным путем, Он отличаетсл от родительского штамма устойчивостью к меркаптопуринрибозиду и обладает повышенным уровнем биосинтеза 5-ИМФ.Кул ьтурал ьно-морф ологическая ха рактеристика штамма ВНИИгенетика-.107, Грамположительнал палочка, спор не образует, На агаризованной среде Хоттингера и мясопептонном агаре образует колонии круглой формы, гладкие, с ровным краем, бледно-желтого цвета, диаметром 1,0-1,5 мм, Штамм нуждается для роста в аденине. Применяемый в описываемом способе штамм депонирова в Центральном музее культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика и имеет регистрационный номер ЦМПМ-В.Питательная среда в предлагаемом способе содержит в качестве источника фосФора фосфорнокислый калий однозамещенный (КН 2 РО) вместо смеси фосфатов калия одно- и двузамещенного, что позволяет исключить дополнительную операцию - подкисление среды перед стерилизацией,В описываемом способе в оптимальных условиях ферментации уровень накопленил 5-ИМФ достигает 16,3-26,8 г/л за 144 ч ферментации по сравнению с 10,3 г/л в известном способе. При этом скорость накопления 5-ИМФ составляет 0,18 г/л.ч, а в прототипе 0,07 г/л.ч, экономический коэффициент использования глюкозы 19.10/. вместо 10,3 в прототипе. В связи с этим, несмотря на некоторое удорожание среды, связанное с повышением концентрации ее компонентов, преимущества предложенного способа не снижаются.45 50 55 Среду стерилизуют при 0,8 атм в течение ЗО мин. Мочевину стерилизуют отдельно в виде 400-ного раствора при 0,5 атм в течение ЗО мин, После стерилизации рН ферментационной среды доводят 5 н раствором КОН до 7,5 и добавляют раствор мочевины,Процесс ферментации осуществляют в колбах Эрленмейра емкостью 750 мл, содержащих ЗОъл среды, на качалке, делающей 350 об/мин, что при аэрации и перемешивании. соответствует скорости растворения кислорода 3,8 г О 2/лч при 356, После 144 ч ферментации в культу- ральной жидкости накапливается 26,8 г/л 5-ИМФ.Примеры осуществления способа при других параметрах, т,е. на средах другого Способ осуществляют следующим образом.Культуру штамма Вг, аваопадепев выращивают на агаризованной среде Хоттин гера.в течение 24 ч при 28 С, переносят вколбы с посевной средой и выращивают при постоянном перемешивании и аэрации в течение 18-24 ч при 28 - 30 С, Затем посевной материал передают в ферментационную 10 среду в количестве 10 об.0 ь, Процесс ферментации проводят при 32-350 С в колбах на качалке (240 - 350 об/мин) при аэрации и перемешивании, обеспечивающих скорость растворения кислорода 2,6 - 3,8 г 02 л ч. На- .15 копление 5-ИМФ в культуральной жидкости достигает 16,3 - 26,8 г/л эа 144 ч ферментации.П р и м е р 1. Культуру штамма Вг.агпгпоп 1 адепев ВНИИгенетикасо ско шенного агара Хоттингера переносят нажидкую посевную среду следующего состава, мас,ф:Техническая глюкоза 2,00Пептон 1,00Дрожжевой экстракт 1,001 чаС0,25Вода Остальное Посевной материал выращивают в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл, содер- ЗО жащих 75 мл среды, на качалке делающей240 об/мин, в течение 24 ч при 28-30 С.Инокулянт передают в количестве 10 об.в ферментационную питательную среду следующего состава, мас.:З 5 Техническая глюкоза 15,0Кукурузный экстракт (КЭ) 6,0264579 состава и при других режимах культивирования, приведены в таблицеНакопление ИМФ в зависимости от состава среды Как видно из таблицы, максимальный уровень накопления ИМФ 26,8 г/л достигается при использовании питательной среды, содержащей 15 глюкозы, 6 кукурузного экстракта и 0,84 мочевины. Уменьшение концентрации указанных компонентов приводит к значительному торможению накопления ИМФ. Увеличение концентрированности среды неэффективно и нерентабельно, поскольку это приводит к ее удорожанию и к уменьшению выхода целевого продукта. Формула изобретенияСПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-ИНОЗИНОВОЙ КИСЛО ГЫ, включающий культивирование микроорганизмов - продуцентов вида ВгечЬасегцв апппоп 1 ацепез на водной питательной среде, содержащей источник углерода, азота, минеральные соли и ростовые факторы в условиях аэрации, выделение .,и очистку, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве продуцента используют штамм Вгеч Ьастегцщ Максимальный выход ИМФ на среде оптимального состава достигается в условиях ,интенсивного снабжения среды кислородом и при определенном. довольно узком 5 интервале температур.На фиг.1 показана зависимость накопления ИМФ. от условий аэрации; на фиг.2 - зависимость накопления ИМФ от температуры культивирования10 Как видно иэ фиг.1, наибольший выходИМФ наблюдается при аэрации, соответствующей скорости растворения кислорода 2,6-3,8 г 02/л,ч, Увеличение степени аэрироваЙМя выше этого уровня не представля ется возможным по техническим причинам.Как видно из фиг.2 наиболее активноеобразование ИМФ происходит при 32- 35 ССнижение температуры до 28 С вызывает уменьшение выхода ИМФ. Повышение 20 температуры до 37 С резко ингибирует процесс биосинтеза,(56) Патент Франции М 1465166, кл, С 12 Р 19/30, опублик. 1970.5 Авторское свидетельство ССС М 615130, кл. С 12 Р 19/30, 1975,30 аевопа 9 епез ВНИИ генетика, а водная питательная среда содержит в качестве источника углерода техническую глюкозу в количестве 12 - 15 мас, , в качестве источника азота - мочевину в количе стае 0,72 - 0,84 мас, ф, в качествеисточника ростовых факторов - кукурузный экстракт в количестве 5 - 6 мас. при этом культивирование осуществляют при 32 - 35 С, а аэрацию проводят со скоростью растворения кислорода 2,6 - 3,8 г Оз / л ч. 0,05-0,5 мас. палладия.1264579 д 2/Ф,4:; ФЬ 1.2 Составитель Н.АфанасьеваТехред М.Моргентал ТОР Шекмар ИСНО 113035, М Гагарина. 101 тельский комбинат "П нт", Г. Уж Одстаенноактор Н.Корченко ТиражНПООСК Подпск" Роспатента35, Раушская наб 4/5