Способ дифференциальной диагностики первичной пищевой аллергии от вторичной

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ЯО 1242 61 К 49/02(51)4 С 01 М 33 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ТЕЛЬСТ К АВТОРСКОМ 10 мл 0)012-носывороточногоизотопомрут пробы дуодПробы центрифупернатант подв матографии наванной с монос) 7 ед ми противколонку отмьЗлюируют смеченые анбуфером. Пность) соо ьныеперено ргия,иг одсч РЕНЦИАЛЬНОЙ ПИЩЕВОЙ АЛЛЕРГИИГНО мате иост лонк во н шего Выражаюасщеплен я к медициотнос ния - за сч нтиген овыщени нии получличества исполь субстр льному от к ма лМ ностируют первичную пищевую аллергию1 табл. ОСУДАРСТВЕКНЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Институт питания АМН(54) СПОСОБ ДИФФТИКИ ПЕРВИЧНОЙВТОРИЧНОЙ(57) Изобретениене, Цель изобретточности способавания в качествебелка), меченного го водного раствора альбумина, меченного Через 110-120 мин бенального содержимого. ируют. Полученный сургают колоночной хроефарозе, конъюгироецифическими антитела- нного белка, Затем т фосфатным буфером, шиеся с антителами ы 0,1 М глицин-НС итывают их радиоактивт ее с радиоактива, нанесенного на кон процентах количестого белка, сохранив- специфичность. При нного показателя 1-2 Х веденного белка диаг 1242823Изобретение относится к медицине,и может быть использовано при диаг"ностике заболеваний же,пудочно-кишечного траКта.Цель изобретения - повышение точности за счет использования в качестве маркера и субстрата белка, меченного Л,Для получения моноспецифических антител к данному антигену человеческого сывороточного альбумина (Веапа 1, ВНР) готовят антисыворотку путем подкожной иммунизации кроликов с неполным адьювантом Фрейнда (МГ- со, США). Моноспецифические антитела к человеческому сывороточному альбумину выделяют на соответствующем иммуносорбенте (ЧСА, иммобилизованный на ВгСМ - активированной сефароэе 4 В, ГЬагшаса, Швеция), Затем антитела адсорбируют на протеин-А сефароэе (РЬаппасха, Швеция) спедующим образом: на колонку с протеин-А сефарозой (объем геля 1,0 мл) наносят О, мл 17-ного раствора антител в 0,1 М фосфатном буфере рН 7,4, после чего проводят элюцию 10 мл этого же буфера до полного удаления антител, не связавшихся с протеин-А сефарозой. УделЪная емкость полученного иммуноСпособ осуществляется следующим образом.Больному натощак дают выпить 10 мл 0,017-ного водного раствора человеческого сывороточного альбуми 431йа, меченного изотопам 3 общей радиоактивностью 1,5 10 срм (имп. в минуту). С помощью зонда отбирают пробы дуоденального содержимого через 30, 60, 90 и 120 мин после введения белка. Определяют их радиоактивность, После этого проры центрифугируют. Полученный супернатант подвергают колоночной хроматографии на сефарозе, конъкгированной с моно- специфическими антителами против введенного белка. Затем колонку отмывают 0,1 Ы фосфатным буфером рН 7,4-7,5, элюируют связавшиеся с антителами меченые антигены 0,1 М глицин-НС 1 буфером рН 28-30, подсчитывают их радиоактивность, соотносят ее с радиоактивностью материала, нанесенного на колонку, и выражают количество нерасщепленного бел. ка, сохранившего антигснную специфичность, в процентах. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 сорбента составляет 5 мг ЧСА на 1 мл геля.П р и м е р 1. Больная Л-а Л.Е, 43 года, госпитализирована в связи с приступообразными болями в разных участках живота, склонностью к поносам, общей слабостью, Иэ анамнеза выяснено, что считает себя больной с 1969 г, после перенесенной пищевой интоксикации. Периодически отмечает ноющие боли по всему животу, перехо- . дящие по временам в сваткообраэные, жидкии стул 3-5 раз в день, прогрессирующую потерю в весе. Дифференциальный диагноз проводился между хроническим энтороколитом и дискинезией тонкого кишечника по гипермотррному типу, При пассаже по тонкой кишке рентгенологических признаков органического поражения кишечника не выявлено При холецистографии - функционирующий желчный пузырь. Копрологическое исследование: мышечные волокна, переваренные в умеренном коли" честве, крахмал - значительное количество, жирные кислоты - немного, нейтральный жир - незначительное количество Активность ферментов поджелудочной железы в сыворотке крови: трипсина 4,6 Мед, ингибитора трипси- на 466 Мер.липазы 27,7 ммоль/мл, амилаэы 315 ед, В дуоденальном содержимом: трипсина 346 Мед ингибитора трипсина 56 Мед, липаэы 473 ммоль/мл, амилазы 782 ед.Таким образом, применяемые в клинических условиях диагностические методы, характеризующие функциональное состояние кишечника, не давали указаний на органическое поражение тонкой кишки. Для уточнения диагнос-, тики с помощью выявления нарушений протеолитической активности желудочно-кишечного тракта применен предлагаемый способ.Для получения химуса из проксимальных отделов тощей кишки используют 4-канальный зонд с латексным баллоном, расположенным дистальнее эспирационного отверстия. Зонд вводится больному натощак под рентгенологическим контролем с таким расчетом, чтобы окклюэия кишки путем наполнения баллона. воздухом производилась на уровне 20-25 см ниже трейцевой связки. Как правило, для полного перекрытия кишки достаточно 20 мл воздуха, вводимогб в баллон спомощью шприца. Надежность окклюзии контролируется путем аспирации содержимого кишки ниже баллона, Послеустановления зонда на нужном уровне и раздувания баллона больному натощак перорально вводят человеческий сывороточный альбумин, меченный 3, в количестве 1 О мл 0,01 -ного водного раствора. Пробы кишечного содержимого получают через 30, 60, 90 и 1 О 120 мин после введения препарата.Для определенияЛ человеческого сывороточного альбумина, сохранившего специфичность в дуоденальном содержимом, применяют метод иммуно сорбции на колонках. В качестве иммуносорбента используют протеин-АВ сефарозу с иммобилизованными на ней антителами против человеческого сывороточного альбумина (см. методику 20 получения иммуносорбентов). Переднанесением образцов кишечного химуса на иммуносорбент в пробах, полученных через 30, 60, 90 и 120 мин, определяют радиоактивность на колодез . ном гамма-счетчике 02-138 .САММА (Венгрия). Затем пробы объединяют,.отбирают 10-15 мл и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. ф После этого 1,0 мл супернатанта наносят на колонку с иммуносорбентом (объем геля - 0,5 мл, удельная емкость 5 мг ЧСА на 1 мл геля), Колонку отмывают 20 мл О, 1 И фосфатного буфера рН 7,4-7,5, а затем элюируют. связавшиеся с антителами меченые антигены 5 мл 0,1 М глицин- НС 1 буфером рН 3,0. Радиоактивность элюантов определяют аналогично описанному.В химуее, полученном из прокси 40 мальных отделов тонкой кишки больной Л-ой Л.Е., обнаружено до 822 человеческого сывороточного альбумина с антигенной активностью исходного белка. При этом рН желудочного содер 45 жимого 7,8, протеолитическая активность желудочного сока 7,2 ед. Отсутствие у ббльной изменений ферментативной активности поджелудочной железы позволяет считать, что наруше 50 ние протеолиза обусловлено органическим поражением тонкой кишки и служит подтверждением диагноза хронического энтерита.55П р и м е р 2. Больная А-А Л.П, 41 год, поступила в клинику в связи с пищевой аллергией, проявляющейся рецидивирующей крапивницей, отекамиКв инке,Учитывая полиморфизм этиопатогенетических механизмов пищевой аллергии,требовалось уточнить их характер. Впервую очередь было необходимо оценить ферментативную активность желудочно-кишечного тракта. Наличие убольной ожирения Р степени какбудто бы исключало возможность фер.ментативной недостаточности. Действительно, при исследовании функции поджелудочной железы не выявлялось патологических сдвигов, Активность ферментов поджелудочной железы в сыворотке крови была представлена следую-.щими показателями: трипсина 3,8 Мед,ингибитора трипсина 484 Мед, липаэы15 ммоль/мл, амилазы 280 ед; в дуоденальном содержимом: трипсина392 Мед, ингибитора трипсина 484 Мед,липаэы 15 ммоль/мл, амилаэы 902 ед.По методике примера 1 проведеноколичественное определение степенигидролиза белкаВ полученных образцах дуоденального содержимого больной А-вой Л,П.было выявлено до 357 белка с исход"ной антигенной активностью. Обнаружение столь значительного количестваантигенного материала в просвететонкой кишки рассматривается как однаиз причин развития пищевой аллергиии позволяет провести целенаправленную коррекцию выявленных нарушенийпищеварения с помощью медикаментоз"ных средств (ферментных препаратов),П р и м е р 3. Больной 3-р Ф.М., 36 лет, поступил с жалобами на приступообраэные интенсивные опоясывающие боли в верхней половине живота, сопровождающиеся рвотой, расстройством стула (плохо оформленный стул 1-2 раза в день). Из анамнеза выяснено, что с 1980 г, у больного наблюдаются приступы абдоминальных болей описанного характера, При обследовании обнаружено резкое повьппение секреторной функции желудка, при рентгеноскопии желудка - выраженная деформация луковицы 12-перстной кишки (что позволило констатировать наличие язвенной болезни), при холецистографии - камни желчного пузыря, При неоднократном исследовании панкреатических ферментов определялось повышение их концентрации в крови и моче. Сканирование Яеселенметионином1242823 Продолжение таблицы,Пищевая аллергия ссопутствующими заболеваниями желудочно-кишечноготракта Хронический гастрит с секреторнойнедостаточностью Хронический панкреатит Хронический энтерит Контингент исследованных больныхи здоровых лиц Количество нерасщепленного ЮЗ-ЧСА, сохранившего антигенную специфичность, Е 50 Здоровые лица 1-2 Пищевая аллергиябез поражения желудочно-кишечноготракта 1,6"2,0 показало неравномерное снижение фиксации изотопа в поджелудочной железеНесмотря на констатируемую у больного нормальную активность ферментов поджелудочной железы в сыворотке крови, их нормальную концентрацию в дуоденальных образцах и наличие избыточной массы тела удалось выявить патологическое отклоне О ние в гндролизе белка пищеварительного тракта (количество нерасщепленного Ч 1:А в дуоденальном содержимом 177),Приведенные результаты обследования позволили установить диагноз 15 калькулезногохолецистита с реактивным панкреатитом, язвенной болезни 12-перстной кишки в фазе ремиссии. Из сопутствующих заболеваний у больного имелось ожирение 11-111 степе ни обменно-элиментарной формы.Как следует иэ приведенных примеров, исследования показателей протео" литической активности желудочно-кишечного тракта (активность пепсина, 25 трипсина, ингибитора трипсина, рН желудочного сока и др.) дают представление о нарушениях лишь в отдельных звеньях цепи переваривания белка. Предлагаемый способ является принци- ЗО пиально новым, поскольку дает интегральную оценку эффективности протеиназ в желудке и тонком кишечнике, основанную на анализе продуктов переваривания белка.35Результаты исследования с помощью предлагаемого метода больных с различной патологией желудочно-кишечного тракта пищевой аллергией и эдоровых лиц представлены в таблице,Проведенные исследования в клинических условиях продемонстрировали простоту предлагаемого метода, его доступность и относительную безопасность, поскольку общая радиоактивность вводимого белка не превышает количеств, допустимых санитарными нормами для клинических условий.Наиболее .сложным в предлагаемом методе является иммунологический анализ полученного материала. Однако до-. статочно высокая оснащенность современных клиник и диагностических лабораторий делает его, тем не менее, вполне доступным для практического здравоохранения. Формула изобретения Способ дифференциальной диагностики первичной пищевой аллергии от вторичной путем клинического исследования больного, о т л и ч а ю щ И йс я тем, что, с целью повышения точности способа, больному вводят человеческий сывороточный альбумин, меченный "О, через 110-120 мин после введения альбумина производят забор содержимого из проксимального отдела тонкого кишечника и определяют в нем содержание экзогенного альбумина соЭхранившего антигенные детерминанты, и при значении полученного показателя 1-27. от количества введенного белка диагностируют первичную пищевую аллергию.