Способ определения дисперсного состава жировых эмульсий типа масловода

(19) 45 С 01 Я 15/ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНАВТОРСНОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(56) 1. Авторское свидетельство СССРУ 828025, кл, С 01 Н 15/04, 1979.2. Заявка Франции У 2202593,кл, С 01 И 15/00, опублик. 1974(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИСПЕРСНОГО СОСТАВА ЖИРОВЫХ ЭМУЛЬСИИТИПА МАСЛО/ВОДА, включающий помещение пробы эмульсии в консервирующую среду и ее оптическое микроскопирование,о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью расширениядиапазона измерений дисперсиогосостава, в качестве консервирующейсреды используют отмытые эритроцитычеловека, смешивают их с 203-нойэмульсией в соотношении (3-4)ф 1,после чего смесь наносят на предметное стекло, окрашивают суданомчерным Б и определяют дисперсныйсостав частиц эмульсии сопоставлением их размеров с известным размером эритроцитов.го Цель изобретения - расширение диапазона измерений дисперсного45состава.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения дисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода, включающему по О мещение пробы эмульсии в консервирующую среду и ее оптическое микроскопирование, в качестве консервирующей среды используют отмытые эритроциты человека, смешивают их с 20 -ной эмульсией в соотношении (3-4):1, после чего смесь наносят на предметное стекло, окрашивают Изобретение относится к исследованиям физико-химических свойстввеществ, а именно к определениюдисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода, и может бьггь 5использовано во всех случаях, когдачеобходимо оценить дисперсностьв эмульсиях с размером частиц менее7 мкм.Известен седиментационный способ 10определения дисперсного составаэмульсий Г 13Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ определения дисперсного 15состава жировых эмульсий типа масло/вода, включающий помещение пробыв консервирующую среду и оптическое микроскопирование 2,Недостатком известного способаявляется узкий диапазон измеренийдисперсного состава. Размер частицтаких жировых эмульсий типа масло/вода различен, но значительноболее 1 мкм. Известный способ замедляет движение частиц в консерванте (глицерине) и образец можно фо,тографировать,что позволяет установить размер частиц с минимальнымдиаметром 1-2 мкм (нижний предел). ЗоОднако несмотря на то, что движениечастиц эмульсии замедляется, такаяфиксация не является жесткой и мелкие частицы продолжают двигаться.Кроме того, способ не обеспечиваетникакого контрастирования бесцветных частиц эмульсии, в силу этогоопределение размеров мелких частицзатруднено, Используя этот способ,также невозможно создать в поле зрения микроскопа монослой частицэмульсии для изучения их дисперсногосостава. суданом черным Б и определяют дисперсный состав частиц эмульсии сопоставлением их размеров с известным размером эритроцитов.Установление размеров частиц эмульсии проводят следующим образом,Эмульсию е. 20%-ной концентрацией масляной фазы, размер частиц которой необходимо установить, приливают к отмытым эритроцитам человека, Подготовка отмьггых эритроцитов. Берут 2-3 мл консервированной донорской крови любой группы и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 мин. Плазму удаляют и полученные эритроциты трижды отмывают трехкратным объемом 0,9%-ного раствора хлористого натрия. Режим центрифугирования при отмывании также 1500 об/мин, продолжительность 15 мин. 0,35 мл плотного осадка отмытых эритроцитов разбавляют 0,15 мл плазмы, полученной при первом центрифугировании крови, и затем добавляют О, 1 мл испытуемой эмульсии. Смесь взбалтывают и из нее делают мазок на предметном стекле по общепринятой методике. Мазок фиксируют в парах формалина в течение 5 мин, окрашивают в течение 35-40 мин на липиды рабочим раствором судана черного Б. (Приготовление рабочего раствора судана черного Б, Смешивают 60 мл 0,3-ного спиртового раствора краски судана черного Б и 40 мл раствора, приготовленного следующим образом: 16 г кристаллического фенола растворяют в 30 мл абсолютного спирта и смешивают со 100 мл 0,3 -ного водного раствора двухзамещенного фосфорнокислого натрия). Мазок промь 1 вают в проточной воде в течение 3 мин и проводят докраску по Романовскому в течение 30 мин. (Эта операция не является обязательной. Азур - эозин окрашивает эритроциты в розовый цвет, делает мазок более контрастным,что облегчает его исследование и фотографирование). Готовый мазок анализируют с помощью оптического микроскопа МБИпод иммерсией с увеличением 1 х 675. Все частицы эмульсии окрашены в черный цвет и хорошо различимы на фоне бледно-розовых эритроцитов, которые в данном случае служат объектом сравнейия. Таким образом, сосчитав не1150520 Количество отмытых КоличестОписание мазка Выводы во эмульсии, мл эритроцитов, мл 0,2 0,1 Частицы эмульсии полностью закрывают эритроцит, соприкасаясьдруг с другом, образуют ложныеагломераты Анализ невозможен 0,25 0,1 На некоторых мазках наблюдаютсяложные агломераты частиц эмульсии Анализ невсегда достоверен 0,30 0,1 Эритроциты располагаются монослоем, не перекрывают друг друга.Окрашенные частицы эмульсии отчетливо видны на фоне клеток Соотношениеобеспечивает достижениецели 0,35 0,40 0,1 На некоторых мазках наблюдаетсяперекрывание границ клеток, чтомешает оценке размера частиц 0,45 0,1 Анализ недостоверен 0,50 0,1 Анализ невозможен Эритроциты полностью заполняют поле зрения, перекрывая другдруга, границы клеток расплыв- чаты обходимое число частиц на фоне зритроцитов и определив их размер относительно известного размера эритроцита (7 мкм), можно быстро,безсложного оборудования и достаточно точно определить дисперсионный состав эмульсии. Соотношение Таким образом, из анализа табличных данных было выбрано оптимальное соотношение: 0,30-0,40 млэритроцитов к О, 1 мл эмульсии . Оптимальное количество жировой эмульсии определяют из соображений расходования минимального количества образца эмульсии для приготовления мазка. Исходя из этого минимального (0,1 мл) количества эмульсии, проводили дальнейший подбор " соотношения объема эритроцитов к объему эмульсии. Причина выбора эритроцитов человека в качестве фона, подложки и объекта сравнения вызвана тем, что это очень удобный природный адсоробъемов отмытых эритроцитов ижировой эмульсии подобрано опытнымпутем. Обоснование интервалов подобранных соотношений приведено в таблице,1бент, который имеет точно установленный размер частиц (диаметр эритроцитов человека 7 мкм) и поэтомуможет служить объектом сравнения, 45 относительно которого расчитывается размео частиц эмульсии; эритроциты имеют средство к поверхностноактивной оболочке эмульсии и поэтому фиксируют на себе ее частицы.50 Это дает воэможность использоватьэритроциты в качестве подложки,накоторой окрашиваются частицы эмульсии, эритроцитная масса человекадоступный для любого медицинского 55 учреждения материал, тем более чтодля осуществления предлагаемого способа требуется минимальное ее количество.1150520 Составитель Е. КармановаТехред И.Асталош Корректор В. Бутяга Редактор С. Лисина Заказ 2133/32 Тираж 897 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г, ужгород, ул. Проектная,4 Предлагаемый способ необходим, например, в области медицины при изготовлении жировых эмульсий для внутривенного введения. Одним из важнейших критериев годности таких препаратов является размер частиц дисперсной фазы, который не должен превышать 1 мкм. Предлагаемый метод позволяет контролировать качество жировых эмульсий при их изготовлении, в процессе хранения. Кроме того, расширяется диапазон возможностей оптического микроскопирования, так как частицы эмульсии фиксируются, контрастируются с помощью окрашивания и одновременно определяется их размер в сравнении с размером эритроцитаеИспользование предлагаемого способа позволяет применять метод оптического микроскопирования дляопределения дисперсного состава мелкодисперсных жировых эмульсий, чтоневозможно при использовании метода, 5 указанного в прототипе; быстро определять дисперсный состав жировойэмульсии (в сравнении с методомэлектронного микроскопирования) безиспользования дорогостоящего оборудования;испольэовать предлагаемый метод в качестве экспресс-метода дляопределения дисперсности эмульсийв производстве, оценивать размерчастиц, сразу, так как объект срав кения - эритроцит находится в одномноле с объектом изучения - частейэмульсии, получать документированный в виде мазка образец эмульснии, не использую фотографиро вания.