Способ определения биологической активности стекла

СОЮЭ СОВЕТСНИХЩЯВЛНЩаеписРЕСПУБЛИН Я 0,1138740 4(5) О 01 М 33 48 ГОСУДАРСТВЕН ПО ДЕЛАМ ИЭ 44 6 мЮ сОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯй йасй сйййВЛьСТ.93+172.7(088.8) В. ф., Хрусталев Г. А арат для споласкивараторное делоф, с 50-51 (прототип),(53) ,(56) Шувал ния п 198 3500441/28-16,07.8207.02.85. БюлЛ. Н. ЛысеноВоронин, Г,А. Тиунов666.11.7+121, Парфеновов Н. П. Анпосуды.-"Лабо, т.16, В 1,(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ СТЕКЛА, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюупрощения способа, определяют трансэпителиальный потенциал фрагментакожи брюшка лягушки в растворе Рингердля амфибий, затем вводят в контакт скожей стекло в виде гранул, шариковили вытяжку, полученную при их кипя-.чении, и по величине падения трансэпителиального потенциала оцениваютбиологическую активность стекла.Изобретение относится к специальной медицинской технике, использующейстекло в биологических производствахпри культивировании различными способами клеточных тканевых культур и 5протезостроении (протезы глаз, зубов .и др.),Специфика эксплуатации в этой области материала заключается в его непосредственном контакте с тканями живого организма, биоактивными средами;клетками культур и ростовыми и питательными средами,В процессе контакта с живым объектом (минуты, часы) реализуется в той 15или иной степени специфическое свойство стекла - его биологическая активность " оказывать при его разрушении;целенаправленное воздействие на находящуюся с ним в контакте систему биообъектов.Известен способ определения биологической активности стеклянной лабора"торной посуды путем сравнения времениформирования на последующей подложкемонослоя культур куриных фибробластови диплоидных клеток человека, цитоморфологических характеристик культур ичувствительности культур к вирусу везикулярного стоматита 13. 30Недостатками известного способаявляются его трудоемкость и длительность.Целью изобретения является упрощение способа. 35указанная цель достигается тем,что согласно способу определения биологической активности стекла определяют трансэпителиальный потенциалФрагмента кожи брюшка лягушки в раст воре Рингера для амфибий, затем вводят в контакт с кожей стекло в видегранул, шариков или вытяжку, получен"ную при их кипячении, и по величинепадения трансэпителиального потенциа ла оценивают биологическую активностьстекла,П р и м е р, Объект исследования -синтезированное стекло составаЗЗИаО 67 8102, скорость разрушения 50которого в солевых растворах Рингерапредварительно оценена гравиметрическим способом при 40 и 100 С.Выбор для регистрации характерйстики биоактивности объекта значений ,55трансэпителиального потенциала кожилягушки обусловлен тем, что эта величина - интегральный показатель функциональной активности живой клетки, Высокое значение потенциала свидетельствует об активности ферментов, постоянстве протекания метаболических процессов и т,дустановка для измерения величины трансэпителиального потенциала состоит из измерительной ячейки, хлорсеребряного электрода в растворе КСГ, агаровых мостиков, приготовленных на 0,68 7-ном в растворе КСР, каломель- ного электрода, потенциометра, источника постоянного тока и микроампер- метра. Все конструктивные .элементы ячейки изготовлены из кварца, стекла "пирекс", Измерительная установка позволяет проводить определение разности потенциалов, характеризующей функциональное состояние клеток эпителия и зоны клеточных контактов, так как оно определяет электрическое сопротивление эпителиального слоя. Для измерения активного транспорта натрия определяется ток короткого замыкания при подключении источника противоположно направленного тока. Разность потенциалов снижается до О и эта величина практически соответствует количеству активно транспортируемых мембранами ионов натрия.Стекла оттягивают на спиртовой горелке ввиду их легкоплавкости в виде гранул с 1 = 2-3 мм. Отмытые дистиллированной водой, сухим этанолом, высу" шенные в сушильном шкафу шарики 50- 60 шт. хранились в бюксах до момента испытаниИ, Раствор Рингера для амфибийприготовляют, отвешивая на весах компоненты: МаСР 6,5, СаСР 0,3, КСР 0,25, ИаНСОЗ 0,2, глюкоза 1 и разбавляя в мерной колбе до 1 л дистиллированной водой.Лягушку Капа Сешрогатда обездвиживают разрушением спинного мозга, ножницами выделяют фрагмент кожи брюшной стенки размером 15 х 15 мм и споласкивают в стаканчике раствора Рингера для амфибий; подготовленный фрагмент кожи наружной поверхностью внутрь укрепляют на трубке внутри измерительной. ячейки, заполненной 30 мл приготовленного раствора Рингера для амфибий и термостатируют прио18-20 С, включают измерительный блок установки и устанавливают исходное значение трансэпителиального потенциала (Н), Вариации значения у исходного в зависимости от особи в пределах3 1138 80-110 мВ. После выхода значения П на постоянный параметр (20-25 мин) на перфорированную мембрану-подставку вблизи объекта в измерительную ячейку помещают шарики исследуемого стекла. В экспресс-методике аликвотная часть вытяжки, приготовленной 2-х часовым кипячением стекол исследуемого состава в 100 мл раствора Рингера для амфибий (2-5 мл), вводилась в измери О тельную ячейку в зону контакта с биообъектом. Автоматически ведут запись изменения значения трансэпителиального потенциала во времени под действием продуктов разрушения. 5В табл. 1 представлены значения величин трансэпителиального потенциала (0) и изменения потенциала(ьО),Из данных табл, 1 видно, 6 введение в ячейку шариков исследуемого стекла и аликвотной части вытяжки вызывает снижение значений трансэпи 40 ектом. Таблица 1,ремя от начала регистрации величины,ми ГУсловия 60 0 10 20 Стекло33 Иа 20 67 80250 шт. 9 = 2 мм 108 90 4 5 39 32 26 69 76 82 б мл (аликвота)00 мл раствора Ринге 62 8 3 30 18 3 50 68 62 Фоновое значение 2 84 82 2 82 84 24 124 123 124 24 123 123 12 2аствор Рингератекло отсутствует 3 12 114 112 1 Воздействие при 10002 ч на 50 глобул стекла 92 мм (масса ==0,5 г) телиального потенциала во времени.Величина тока короткого замыканиятакже снижается при введении в контакт с биообъектом аликвотной части вытяжки.В табл. 2 представлены сравнительные данные по влиянию состава стекла на величину ь 11 (изменение трансэпителиального потенциала через 10 мин после введения в контакт с биообъектом продуктов разрушения стекла),Предлагаемый способ позволяет упростить определение биологической активности стекла и сократить время определения при получении количественной характеристики биологической активности стекла. Способ дает возможность оценить биоактивность стекла для нужд биотехнологии и физико-хими-. ческой биологии, а также обосновать выбор стекла для эксплуатации в длительном контакте с биологическим .объ 12 112 112 114 1141138740 Продолжение табл. 1 Потенциал 120 140 300 10 10 24 1 98 84 90 9 Ринге еа 0 стекса1 832124ет 3 112 Фоновоезначение 2 2 аствор Рингера текло отсутств 0 при соблюдении услов ч неизменным. В предел ий без воздействия про ачени 48"5измен 1 Фоно эксперимента сохраняется 3 в течени приборов наблюдал ах погрешности регистри уктов разрушения стекл ь. Таблица(мВ 15 НаО 85 81033 БаО 67 81022 Еп (В 02)ЗНАЛО929 ДГ(пром.состав 0 2 г 2 108 87 110 11,щ .-исходная величина трансэпителиального поте ВКЮШИ Заказ 0681/35 Тираж 897 Подпи ала ое фвщвг ППП Стекло33 ф"а 0 67 5 О, 50 шт, ф 2 мм 2 млаликвота) 100 мл раствора ра Воздействие при 2 ч на 50 глобу ла Ф 2 мм (ма 0,5 г) ремя от начала регистрации величины,мин ффПатеатф, г.Ужгород, ул.Проектная,