Способ определения активности общих эстераз в биологическом материале

) Аз торы изобретен Королен омйтю природной среды Гидрохимический институт Го по гидрометеорологии и контр(71 Заявител 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ОБЩИХ ЭСТЕРАЗ В БИОЛОГИЧЕСКОН МАТЕРИАЛЕ разом.Пример ацетата раствор и пропитывают э тографическую б 5 х 5 см, хорошо и разрезают на 30 мг с"нафтилют в 1. мл хлороформ им раствором хромамагу площадью ысушивают носитель вадраты 5 х 5 мм . В ется тем ения акИзобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения активности ферментов, и может быть использовано в микробиологии, гидробиологии, энзимологии, а5 также при диагностике ряда заболеванйй человека и животных;Известен способ определения активности общих эстераз в биологическом .материале путем внесения в пробу субстрата красителя и буферного раствора с последующим инкубированием и фотометрированием полученного цветно" го комплекса 1.Недостатками известного способа яв 1 з ляются сложность определения, невысокая точность и неустойчивость окраски полученного раствора, что ограничивает возможности способа,Цель изобретения " ускорение спо соба и возможности осуществления его в полевых условиях.Поставленная цель достига1 что согласно способу определ А. 9. Гвоздаревб,11 с" 6( тивности общих эстераз в биологичес" ком материале путем внесения в пробу субстрата красителя и буферного раствора с последующим инкубированием и фотометрированвем полученного цвет" ного комплекса, в качестве субстрата используют с -нафтилацетат, а в качестве буфера - НС 1-оксиметиламинометан, предварительно нанесенные на носитель, а в качестве красителя ис" пользуют М-бензоиламин,5-диметокси" анилин, при этом окраску инкубацион ной смеси стабилизируют введением : трихлоруксусной кислоты и глицерина, а перед фотометрированием в смесь добавляют ацетон.Способ осуществляют следующим об"где А - активность фермента в микро- тилхолинэстераэы в с молях на 1 г ткани в минуту; ного мозга крыс раэ В - величина разведения исследу" в условиях 1 и ч 1 сго ф 171, 2,5 471-478. ВНИИПИ Заказ 8507/35 Тираж 887 Подписн филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 43 972399 таком виде субстрат может храниться в темной плотно закрытой склян" ке несяолько месяцев. Носитель с буфером готовят следующим образом: приготавливают раствор 0,5 И НС 1-оксиметиламинометана и пропитывают им хроматографическую бумагу площадью 5 х 5 см ,хорошо высушивают носитель е термостате при 40-50 С и разрезают" на квадраты 5 х 5 ммВ таком виде айбуфер может храниться несколько ме;сяцев.В пробирку вносят 1 квадратик носителя, пропитанного йафтилацетатом и добавляют 2 капли этаяола, через 2- 3 мин прибавляют 2 капли дистиллированной воды и хорошо перемешивают стеклянной палочкой для лучшего экстрагирования субстрата, Затем добавляют 1 квадратик носителя, пропитанного буфером, перемешивают смесь и приливают 0,2 мл исследуемой биологической жидкости, еще раэ тщательно пе. ремешивают смесь и инкубируют ее в широкогорлом термосе при условиях температурного и временного оптимумов инкубации исследуемых биологических объектов.После инкубации капельницей приливают 3 капли 0,1 мл) 0,2-ного раствора 4-бензоиламин,5-диметоксианилина, интенсивно встряхивают и через 3 мин приливают при помощи капельницы 6 капель (0,2 мл) раствора, содержащего 403 трихлоруксусной кислоты и 60 глицерина. В таком виде проба сохраняется до 5 сут. В лабораторных условиях приливают 3 мл ацетона и спектрофотометрируют в ин тервале длин волн 0,46-0,48 мкм против контрольной пробы, ко,орая отличается от опытной тем что биологическая жидкость добавляется после внесения смеси трихлоруксусной кислоты и глицерина.43Активность общих эстераз выражают в микромолях "нафтола, освобожденного в результате реакции 1 г ткани в минуту и рассчитывают по формулеС В ЯТ ф 4С - количество образовавшегосяс-нафтола в микромолях;Т - время инкубации в .минутах..Количество оС-нафтола рассчитывается по калибровочной кривой.Предлагаемый способ определенияактивности общих эстераз в биологи"ческом материале обладает высокойточностью определения активностифермента, облегчает выполнение работ за счет уменьшения числа приливаемых жидких реагентов с 7 до 2,стабильность субстрата увеличивается с 1-2 ч до 1-2 мес, а стабильность окрашенного комплекса повышается с 8-20 мин до 5- 10 сут, позво-.ляет количественно определять активность общих эстераз в полевых условиях.Простота выполненяя, высокая точность и отсутствие потребностив специально оборудованной стационарной лаборатории дают возможностьшироко использовать предлагаемый .способ определения активности общихэстераз для энзимодиагностики в токсикологии, генетике и медицине.Формула изобретенияСпособ определения активности о".щих эстераз в биологическом материале путем внесения в пробу субстратакрасителя и буферного раствора с последующим инкубированием и Фотометрированием полученного цветного аомплекса, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью ускорения способа и воэможности осуществления его в полевых условиях, в качестве субстратаиспользуют с-нафтилацетат, а в ка- .честве буфера - НС 1-оксиметиламинометан, предварительно нанесенные наноситель а в качестве красителя используют 4-бензоиламин,5-диметоксианилин, при этом окраску инкубационной смеси стабилизируют введениемтрихлоруксусной кислоты и глицерина,а перед Фотометрированием в смесьдобавляют ацетон,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Серова О. Л., Корочкина Л.И.Исследование синтеза РНК и белкаспектра.эстераз и активности аце;резах коры головличного возраста