Способ определения резистентности организма

" 13 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИ(71) Запорожский институт усовершенствования врачей им. М, Горького(54) (57) 1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА, включающий инкубацию лейкоцитов крови с тест- микробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, взаимодействие лейкоцитов с тест-микробной взвесью осуществляют в присутствии аутосыворотки.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве тест-микробов используют В.11- зодес 11 сцз в количестве 80 клеток на 1 лейкоцит, а сыворотку добавляют в количестве 2,5 мл.40 45 50 55 Изобретение относится к медицине, преимущественно к лабораторной диагностике и может быть использовано при любых локализациях инфекционно-воспалительных процессов (в урологии, в хирургии, в гинекологии к т.д.).Известен способ определения резистентности организма, включающий инкубацию лейкоцитов крови с тест-микробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов 1) .Однако известный способ недостаточно точен, поскольку учи гывается только одна сторона иммунологического состояния - реакции клеточного иммунитета и не учитывается анткмикробная активность сыворотки.Цель изобретения - повышение точности определения резистентности организма.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения резистентности организма, включающему инкубацию лейкоцитов крови с тест-микробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов, взаимодействие лейкоцитов с тест-микробной взвесью осуществляют в присутствии аутосыворотки. В качестве тест-микробов используют В,11 зодес(1 сиз в количестве 80 клеток на 1 лейкоцит, а сыворотку добавляют в количестве 0,5 мл.Способ осуществляется следующим образом.Для получения 0,5 мл сыворотки у больных с инфекционно-воспалительными процессами в мочеполовых органах, в желчном пузыре, в легких и в других органах производят забор в пробирку около 2-3 мл венозной крови. Лейкоциты получают из надосадочного слоя цитратной крови больных. С этой целью в пробирку набирают 0,7 мл 3,8% раствора лимонно-кислого натрия к 3 мл венозной крови. Пробирки центрифугкруют прк 000 об/мин в течение 5 мин к вместе с надосадочной жидкостью отделяют лейкоциты от эритроцитов. Лейкоциты отмывают от цктрата 0,9% раствором хлористого натрия путем центрифугирсвания при 3 тыс. об/мин в течении 5 мин. При попадании в пробирку во время отделения лейкоцитов некоторого количества эритроцитов и тромбоцитов (мешающих учету бактерицидной активности), последние разрушают добавлением 3%-ного раствора уксусной кислоты. После разрушения эритроцитов лейко цкты сразу же отмывают путем центрифугирования от уксусной кислоты. К осадку от. мытых лейкоцитов добавляют 1,0 мл 0,9%- ного раствора хлористого натрия и смешивают их с 0,5 мл сыворотки крови. К приготовленной смеси добавляют одномиллиардную взвесь суточной культуры В.Ьодес 11 спз кз расчета до 80 микробных клеток на один лейкоцит, обычно это составляет 0,2 5 10 15 20 25 0,3 м микробной взвеси. Смыв В.1 Ьодес 11 спв и титрование культуры производят 09%-ным раствором МаС 1, Приготовленную смесь инкубируют в термостате в течении 3 ч при 37. По окончании срока инкубации пробирки центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течении 5 мкн, Надосадочную жидкость сливают, осадок встряхивают и из последнего готовят на стандартных стеклах мазки. После высушивания на воздухе мазки фиксируют в течении 5 мин в метиловом спирте или в смеси этилового спирта с формалином в соотношении 19:1. Фиксированные мазки окрашивают по методике Ьр 1 йпаде 1 в модификации В. Е. Пигаревского, т.е. в течении 15 мин зеленым прочным и в течении 30 с азуром А. При приготовлении растворов красителей (зеленого прочного и азура А) придерживаются рекомендаций В. В. Пигаревского. Так, рН раствора зеленого прочного составляет 8,1; готовят 0,25%-ный раствор азура А. При этом методе окраски живые микроорганизмы окрашиваются в сиреневый илк в темно-синий цвета, а неживые - в зеленый цвет или определяются в виде теней, а также сферопластов. Для учета активности антимикробных факторов лейкоцитов к сыворотки крови впервые использован метод полуколичественной оценки в виде среднего цитохимического коэффициента (СЦК) . С этой целью модифицирована формула Астальди и Берга: где а -.тени бактерий;Й - бактерииокрашенные в зеленыйцвет;ь - сферопласть;- бактерии, окрашенные в сиреневыйцвет;кообщее число подсчктанных микробных клеток.На основании полученных у различных групп больных данных впервые разработаны критерии оценки активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови, а следовательно, к резистентности организма к инфекции. При этом активность антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови расценивалась как высокая при СЦК 1,0 и выше; 0,6 - 0,9 - средняя; 0,3 - 0,5 - низкая и 0 - 0,2 - очень низкая.//ример 1. Больной Д. 56 лет находился на стационарном лечении в урологическом отделении областной клинической больницы.Диагноз: обострение хронического левостороннего пиелонефрита, хронический кростаткт.Клинические проявления заболевания: боля в поясничной областк слева, озноб с повышением температуры до 38-39 С, дизурические расстройства акта мочеиспускания. Указанные явления отмечались в течениичетырех дней. За это время больной наблюдался и лечился у врача в уроло поликлиники.Краткие данные анамнеза. Семейный анамнез не отягошен, В 1980 г. перенес лево- стороннюю уретеролитотомию, а в 1981 г - левостороннюю пиелолитотомию. Послеоперационный период протекал гладко. Рана зажила первичным натяжением, Пассаж мочи из левой почки восстановился, С 1981 г по март 1983 г перенес три атаки строго левостороннего пиелонефрита. Дважды находился на стационарном лечении в урологическом отделении областной больницы.По данным рентгеноурологического об"следовании рецидива камней в почках и в мочеточниках нет. Слева имеются признаки острого пиелонефрита. По данным изотопной регографии функция левой почки снижена в фазе секреции и экскреции. Проба Реберга-Тареева не изменена. Анализы при поступлении. Общий анализ крови 10.04.83 г. - Эритр. 3,910; гемоглобин 130 г/л; лейкоцитов - 3,910 (эозинофил. 1, палочки 10, сегмент 54, лимфоцит 25, моноцит 10), СОЭ мм/ч. Общий анализ мочи: белка 0,066 О/о, лейкоцитов на 1/2 поля зрения, соли - ураты. Из мочи высеян протей в титре до 100 тыс. в одном мл мочи. По данным коагулограммы имеет место гиперкоагуляция. Печеночные пробы и электролиты в норме. Общий белок 70 г/л, -глобулин 19 О/о.Иммунологические исследования при поступлении.Индуцированная активность лейкоцитарного лизоцима 0,0028 мкг/л.Бактерицидная активность лейкоцитов крови (СЦК) 0,5. Бактерицидная активность сыворотки крови (СЦК) 0,3. Суммарная бактерицидная активность лейкоцитов и сыворотки крови (СЦК) 1,0. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови (Зд) - Зд; Зд М 140 и ЗдА 80 МЕ/мл. Интенсивность фагоцитоза лейкоцитов крови (Иф) 48%, фагоцитоз незавершенный.Лечение больного.Антибактериальная терапия: биссептол 480 по 2 таблетки два раза в день, карбенициллин по 500 тыс. ед. внутримышечно четыре раза в сутки (1 курс), фуразолидон 0,05 гр четыре раза в сутки, эритромицин 0,25 гр три раза в день (11 курс).Для повышения активности антимикробных факторов организма использовали: метандростенолон 0,005 гр три раза в день внутрь; левомизол 150 мг один раз в три дня и витамин А по 500 тыс, МЕ три раза в день. Указанные препараты больному назначены с третьего дня после поступления на стационарное лечение. Курс лечения проведен в течении 15 дней.Кроме указанной терапии проводилось симптоматическое лечение и гальваногрязевые апликации на область предстательнойСЦК при раздельном определении активности антибактериальных факторов в лейкоцитах и в сыворотке крови здоровых людей составляет 1,0-0,06 и 0,8+0,01 соответственно. При суммировании данных раздельного исследования (1,0-0,8=1,8) видно, что эти показатели значительно ниже, чем 1 О 15 20 25 30 35 40 45 50 55 железы (в связи с хроническим простатитом). Диета - стол Мо 7, седативные препараты (родедорм) утром и вечером. Режим - полупостельный. Дважды внутривенно введено по 20 мл нативной плазмы и по 200 мл гемодеза.По окончании курса лечения состояние больного улучшилось. Болевой синдром и дизурические явления прекратились. В удовлетворительном состоянии выписан на амбулаторное лечение. Койко-день в стационаре - 17 дней. Больной после выписки из стационара приступил к труду.Исследования проведены у 102 больных с инфекционно-воспалительными процессами в почках 55 человек; в мочевом пузыре 10 человек, в предстательной железе 15 человек; в яичках 5 человек; в яичниках и в матке 12 человек и в желчном пузыре 10 человек. Кроме того, исследования также проведены у 20 здоровых людей (доноров). Наряду с одновременным изучением активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови у больных и у доноров, также изучали раздельную антибактериальную активность сыворотки крови и лейкоцитов. С этой целью к 0,5 мл сыворотки крови добавляли 0,2 мл миллиардной взвеси суточной культуры В.1 зодес 1 сиз. Живую суточную культуру В.1 зодес 1 сцз добавляли раздельно к отмытым лейкоцитам из расчета до 80 микробных клеток на один лейкоцит, Препараты с раздельным исследованием окрашивали зеленым прочным и азуром А по указанной методике. Живая суточная культура В.11 эодестсцз взята в качестве тест-микроба в связи с тем, что она в отличии от других тест-микробов (стафилококков, энтеробактерий, стрептококков и многих штаммов кишечной палочки) обладает высокой чувствительностью к сывороточным и лейкоцитарным защитным факторам, Кроме того, более крупные по сравнению с 209 лабораторным штаммом стафилококка размеры микробных клеток В.1 зойес 11 сиз позволяют более точно определить их состояние после взаимодействия с защитными факторами лейкоцитов и сыворотки крови.В результате проведенных исследований установлено, что у здоровых доноров средний цитохимический коэффициент (СЦК) при одновременном определении активности антибактериальных факторов в лейкоцитах и в сыворотке крови составляет 2, 1+0,2:20 30 35 40 50 Составитель Г. Крюкова Редактор Н. Воловик Техред И. Верес Корректор О. Луговая Заказ 7603/4 Тираж 587 Поди и сное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Рву шскай иаб., д. 4(5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4показатели, полученные при одновременном исследовании бактерицидной активности лейкоцитов и сыворотки крови (Р 0;001),У больных с острыми инфекционно-воспалительными процессами независимо от их локализации в различных органах (58 человек) СЦК при одновременном взаимодействии лейкоцитов и сыворотки крови больных с тест-микробной взвесью активность антибактериальных факторов составляет 0,8 - 0,02. В вариационном ряду эти показатели СЦК колеблются от 1,2 до 0,7. При этом более высокие цифры СЦК (1,2-1,0) отмечаются у больных, заболевших ост- рыми инфекционно-воспалительными процессами впервые. Низкие показатели СЦК(0,8-0,7) отмечаются у ослабленных больных с частыми обострениями инфекционно- воспалительных процессов. На основании сопоставительного анализа клинических проявлений острых инфекционно-воспалительных заболеваний, а также результатов лабораторных, биохимических и функциональных исследований указанная закономерность в изменениях СЦК при одновременном определении активности антимикробных факторов в лейкоцитах и в сывороткекрови отмечалась у 90% больных. При раздельном исследовании активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови у больных с острыми инфекционно-воспалительными процессами СЦК составляет 0,4+ 0,02 и 0,3 ф 0,01 ссютветственно. Однако в вариационном ряду эти результаты не однородны. Так, при проведении сопоставительного анализа данных раздельного определения активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови с клиническими проявлениями заболевания, а также с результатами лабораторных биохимических и функциональных исследований закономерность в изменениях СЦК в зависимости от тяжести течения инфекционно-воспалительных заболеваний выявлены лишь у 60-52% случаев соответственно, При этом довольно часто(у 30% случаев) у ослабленных больных с рецидивными острыми инфекционно-воспалительными процессами СЦК антибактериальной активности лейкоцитов крови оставался высоким (0,5 - 0,6), что явно не соответствовало клиническим проявлениям заболевапий, а также данным лабораторного биохимического и функционального исследований. Эти неточные данные могут ввести в заблуждение врача при решении вопроса о назначении больным препаратов, содержащих защитные факторы (нативную плазму, 7 -глобулин и другие), а также иммуностимуляторов.Следует отметить, что у шести больных с уросепсисом имело место повышение количества микроорганизмов после их раздельной инкубации с лейкоцитами или сывороткой крови. При одновременной инкубации в указанных больных микроорганизмов с лейкоцитами и сывороткой крови повышение количества микроорганизмов после окончания сроков инкубации не отмечалось, хотя СЦК бактерицидной активности у больных не превышал 0,1 и отмечалась выраженная декатионизация и дегрануляция лейкоцитов.У больных с хроническими инфекционно-воспалительными процессами (44 человека) СЦК активности антимикробных факторов при одновременной инкубации микроорганизмов с лейкоцитами и сывороткой крови в среднем составляет 1,5-0,03.СЦК активности антимнкробных факторов у больных с хроническими инфекционно-воспалительными процессами при раздельной инкубации микроорганизмов слейкоцитами и сывороткой крови составляет 0,6+ 0,03 и 0,5+0,02 соответственно.Одновременное определение активности антимикробиых факторов лейкоцитов и сыворотки крови (в отличие от ранее применяемых методов раздельного исследования) обосновано с физиологической и научной точки зрения. Так, в сыворотке крови имеется ряд защитных факторов (иммуноглобулины, комплемент, пропердин, В-лизины и другие), которые сами не обладают бактерицидной активностью, но при взаимодействии с микроорганизмами образуют комплексы, резко усиливающие активацию и выход из лейкоцитов неспецифических бактерицидных факторов (лизоцима, катионных белков, миелоперокскдазы, лактоферррина и других). Этим можно обьяснить более высокие уровни СЦК у больных с инфекционно-воспалительными процессами и у здоровых доноров при одновременной инкубации лейкоцитов и сыворотки крови с В. 115 одес 11 сцз.Таким образом одновременное воздействие на микроорганизмы антибактериальных факторов, содержащихся в лейкоцитах и в сыворотке крови дает не суммарный, а качественно новый эффект, который более точно отражает состояние антибактериальной активности организма и повышает точность определения резистентности организма на 30%.