Способ определения псоралена

(19) (11) А М 51) б 01 й 33 481 б 01 М 21/78 ГОСУД АРСГЮ ДЕЛА ТЕН САНИЕ ИДЕТЕЛЬСТВУСООЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПИЙ(71) Курский государственный мцинский институт и Харьковскийнаучно-исследовательский химикофармацевтический институт(54)(57) СПО НА, включают мой пробы хи ,последукцим и кнх параметр о т л и ч а с целью повн) и селективно руемую пробу с иртовцми р о иси аммон н ем Фцуоре ОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПСОРАй обработку анализирумическим реагентом сзмерением физико-химичесв получейной смеси,ю щ и й с я тем, что,ения чувствительностити способа, анализиобрабатывают водностворами брома и гидрос последующим измереенцив полученной смеси.Изобретение относится к клинической биохимии,а именно к способу определения псоралена, и может. быть применено для анализа этого вещества в различных материаЛах для клинических, Фармацевтических, санитарных и токсикологических исследований,Известен способ определения псора-, лена методом нейтрализации после взаимодействия его с 0,5 н.спиртовым раствором гидроокиси калия с порошкомО окиси цинка и нагревании с последую" щим титрованием 0,1 н. раствором серной кислоты в присутствии индикатора фенолового красного Ц .Недостатками способа являются его 15 низкая чувствительность, так как для определения берут навеску 0,3 г,и неизбирательность, поскольку многйе органические соединения определяются методом нейтрализации, 20Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения псоралена, включающий обработку анализируемой. 25 пробы химическим реагентом с последующим измерением физико-химических параметров полученной смеси 2 .Недостатки способа состоят в его низкой избирательности, так как аналогичным образом реагируют Фенолы, флавоноиды, оксикоричные кислоты и другие природные соединения,и невысокой точностиотносительная сшиб" ка составляет +4). Чувствительность способа, позволяющего олределять псорален в чистом виде и только.после хроматографирования в растительном сырье, составляет 20 мкг/мл.Целью изобретения является повь- шение чувствительности и селектив ности способа.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу опреде ления псоралена, заключающемуся в обработке анализируемой пробы хи мическим реагентом с последующим измерением физико-химических параметров полученной смеси, анализируе" мую пробу обрабатывают водно-спиртовыми растворами брома и гидроокиси 50 аммония с последующим измерением флуоресценции полученной смеси.Способ осуществляют следующим образом.Точную навеску или исследуемый 55 раствор обрабатывают этиловым спиртом доводят этиловым спиртом до метки 100 мп в мерной колбе, аликвоту данного Раствора обрабатывают водным раствором брома и гидроокиси 60 аююния и исследуемый раствор флуорйметрируют по отношению к стандартно-" му раствору. Подобной реакции не дают близкие по структуре соединения: кумарин, ксантотоксин, 7-оксикумарин,65 келлин, карбокромен, ксантотоксоли иэопимпинеллин.Спектр возбуждения флуоресценцииполученного раствора находится в об,ласти от 320 до 420 нм с максимумом383 нм, а спектр излучения Флуоресценции от 400 до 540 нм с максимумом462 нм. Прямолинейная зависимостьмежду интенсивностью Флуоресценциии концентрацией псоралена лежит от0,01 до 10 мкг/мл (табл,1.),Зависимость интенсивности Флуоресценции псоралена (С=10 мкг/мл) от количества раствора брома и гидроокисиаммония показана в табл,2 и 3, Результаты флуориметрического определения.псоралена в таблетках по 10 мгпредставлены в табл,4,Интенсивность флуоресценции псоралена после взаимодействия его с бромоми гидроокисью аммония не изменяется2 ч . Чувствительность предлагаемогоспособа составляет 0,01 мкг/мл.П р и м е р 1. Определение псоралена в таблетках по 0,01 г.Точную навеску (0,05 г) порошкаМелко измельченных таблеток переносят в мерную колбу на 100 .мл прибавляют 80-90 мл этилового спирта и энергично встряхивают 3 минЗатем добавляют этилового спирта до метки.К 1 мл раствора прибавляют 8,8 млдистиллированной воды, 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают и добавляют 0,1 мл 25-ногораствора гидроокиси аммония, перемешивают. Флуориметрируют исследуемыерастворы по отношению к стандартномураствору с содержанием 5 мкг/мл, длячего к 1 мл стандартного раствора,содержащего 50 мкг/мл псоралена, прибавляют 8,8 мл дистиллированной воды,0,1 мл насыщенного водного раствораброма, перемешивают и прибавляют0,1 мл 25-ного раствора гидроокисиаммония. ФЛуориметрирование проводятодновременно с растворами исследуемых образцов,П р и м е р 2Определение псоралена в 0,1-ном растворе псоралена,Переносят 0,5 мл исследуемого раствора в мерную колбу на 100 мя,прибавляют дистиллированной воды до метки. К 9,8 мл раствора прибавляют 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают, прибавляют 0,1 мл 25-ного раствора гидроокиси аммония, перемешивают и Флуориметрируют одновременно против стандартного раствора, содержащего 5 мкг/мл псоралена, для чего к 1 мп стандартного раствора, содержащего 50 мкг/мл псоралена, прибавляют 8,8 мл дистиллированной воды, 0,1 мл насыщенного водного раствора брома и 0,1 мл 25-ного раствора гидроокиси аммония, перемешивают1049809 и флуориметрируют одновременно с общ, раэцами испытуемых растворов.Результаты флуориметрического определения псоралена в 0,1-ном растворе на определение взято 0,5.мл 0,1-.ного:раствора псоралена представлены в табл.5 П р и м е р 3. Определение псора-, лена в лекарственном растении псоралее;Мелко измельченные плоды псоралеи ,(2 г) экстрагируют со 100 мл смеси этилового спирта и хлороформа (3:7), Этот раствор (0,1 ил) наносят на хроматограмму в тонком слое закрепленном) силикагеля марки сСб 5/40 р 15 +13 гипса. Пластинку с нанесенной пробой высушивают на воздухе в течение 10 мин помещают в камеру с системой растворителей диэтиловый эфир - петролейный эфир - этилаце тат (9:9:1) и хроматографируют восходящим методом. После высушивания Концентрация мкг/мл гОтносительная интенсивность флуоресценций3 0,1 0,2 0,3, 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 10 17 23 10 16 23 30 29 36 42 49 3.5 41 47 53 55 61 0,9 1,0 674 ее юю Количество насыщенного раствора . Относительная интенсивность флуоресценции брома, мп бб 85 85 82 Оф 05 0,10 0,15 0,20 0,25 80 табл и 80 80 78 0,1 0,2 О,01 Ою 02 0,03 0,04 Ою 05 Оф 06 Оф 07 0,08. Оф 09 0,10 1 10 216 3 . 22 4 .28 5 . 34 6 40 7 47 8 54 9 60 10 67 хроматограмм в течение 5 мин на воздухе, в ультрафиолетовом свете устанавливают локализацию пятна псоралена. Пятно с Й =0,56, отмеченное по стандарту псоралена, количественно переносят в пробирку, прибавляют 9,8 мп дистиллированной воды, встряхивают и прибавляют 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают и добавляют 0,1 ил 25-ного раствора гидроокиси аммония. Флуориметрируют исследуемые образцы по отношению к стандартному раствору с содержанием 0,10,5,1,0 и 5,0 мкг/мл псоралена, для чего к 9,8 мл стандартного раствора прибавляют 0,1 мл насьпценного,водного раствора брома, перемешивают и прибавляют 6,1 мл 25-ного раствора гидроокиси аммо-. ния.Флуориметрирование проводят одновременно с растворами исследуемых образцовтаблица 11049809 Продолжение табл. 3 0,25 0,30 66 63 Таблица 4ЗДЮ Навеска из измельченных Найдено псоралена, Иетрологические характеристикитаблеток, мг мг 10,130 10,120,92 ,83 ,41 А=+1,70 49 49,3 48,6 48,2 9,820 9,970 Таблица 5е5 аВ ава 5Е шИетрологические характеристик ю е а х=99,8510 айдено псоралена, г Ю М 101, 99,5 О = 99,85+1,36А=1,36 98,5 Составитель В. КузьмичевРедактор Н; Бобкова Техред Л. Пилипенко Корректор А.Зимокосо Заказ 8407/41Тираж 873По ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открцтий 113035, Иосква, Ж, Рауыская наб., д