Способ получения фосфатидилхолинов

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ц 957908(22) Заявлено 251180 (21) 3210762/28-13с присоедииением заявки Йо(23) Приоритет -Опубликовано 15.09.82, Бюллетень Йо 34 РМ К з А 61 К 35/50 Государствеииый комитет СССРпо делам изобретений и открытий(3 УДК 615. 45: . 615. 34 (088. 8) Дата опубликования описания 15. 09. 82(72) Авторыиэобретения Т.К. Митрофанова и Р.П. Евстигне Московский ордена Тр тонкой химическо(54 ОСФАТИДИЛХОЛИНО ществляют методом лиофильной сушки при 1 от 0 до 50 оС, а очисткуполученного экстракта проводят поэтапной кристаллизацией.при температуре от -20 до ОоС с последующейхроматографией на колонке с окисьюалюминия.П р и м е р 1. Измельченный спин ной мозг крупного рогатого скота(10 кг ) в виде пасты намазывают напротвини слоем 10-12 см, замораживают и затем лиофильно высушивают притемпературе от -15 до -20 оС и давлении 0,1 мм рт. ст. Выход обезвоженного мозга 3,3 кгпв содержание влаги 1%.В производственных условиях сушка брюзга может быть проведена в суб лимационных установках различныхтипов при температуре от 0 до -50 оС.К 100,00 г лиофильно высушенного.мозга добавляют 300 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при20-25 С в течение часа. Ацетоновыйэкстракт отфильтровывают. К остатку приливают 250 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при 2025 С в течение часа. Таких экстракций проводят 5. Из объединенногоэкстракта после отгонки растворитеставышение его чи Изобретение относится к,химии природных соединений и касается тех нологии производства фосфолипидовИзвестен способ получения фосфатидилхолинов из спинного и головного мозгакрупного рогатого скота и свиней, включающий иэмельчение исходного сырья,его обеэвсживание последовательную экстракцию ацето-, .ном и этанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение це левого продукта Г 13Однако известный способ не обе печивает выделения продукта с дос точно высоким выходом 20) и чистотой.Цель изобретения - по выхода целевого продукта и стоты.Поставленная цель достигается тем, что в способе получения фосфатидилхолинов из спинного и головного мозга крупного рогатого скота и свиней, включающем измельчение исходного сырья, его обезвоживание, последовательную экстракцию ацетоном и этанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение целевого продуктаотличие состоит в том, что обезвоживание сырья осувого Красного Зкаехнологии им. М.В, Ломоносов957908 55 60 65 ля в вакууме (10 мм) и двухкратнойперекристаллизации из этанола выход холестерина 13,96 г (13,96)от сухого веса мозга). Жмых после извлечения холестерина сушат в вакууме(1 мм ), получают 75,4 г ( 75,4 отсухого веса мозга). Жмых 50,0 гэкстрагируют 150 мл 96-ного этано"ла в течение часа при 50 ОС. Экстракт отфильтровывают. Таких экст -ракций проводят четыре, объединенные экстракты охлаждают до 20 С ивыдерживают при этой температурев течение 10 ч. Выпавший в осадокконцентрат. сфинголипидов отфильтровывают и высушивают в вакууме (1 мм).Выход концентрата сфигнолипидов10,90 г (21,8 от веса жмыха,16,4от сухого веса мозга), содержание основного вещества 81,.0, и том числе цереброзидов 73,2,сульфатидов7,8. Маточный раствор охлаждаютдо ОС.и выдерживают при этой температуре 10 ч. Осадок отфильтровывают и высушивают в вакууме (1 мм).Выход концентрата фосфатидилэтаноламинов 5,53 г (11;1 от веса жмыха,8,4 от сухого веса мозга), содержание основного вещества 80,5. Изматочного раствора удаляют этанол ввакууме (10 мм ). Остаток растворяютв 600 мл смеси дихлорэтанэтанол,95:5. Раствор перемешивают с 200 г окиси алюминия ГИ степени активности по Брокману в течение часа .и декантируют. К адсорбенту приливают 600 мл дихлорэтан-этанол, 95:5 неремешивают в течение часа. Эту процедуру повторяют 4 раза. Объедичен, ный раствор перемешивают в течение часа со свежей порцией окиси алюминия (200 г), фильтруют. Адсорбент промывают этанолом 3 раза по 600 мл. Раствор декантируют, добавляют окись алюминияпосле второй обработки, перемешивают 15 мин. После де -кантации раствора адсорбент перемешивают с 300 мл этанола и фильтруютВсе спиртовые растворы объединяют,этанол отгоняют в вакууме (10 ж)Выход фосфатидилхолинов 2,9 г5,8 от веса жмыха, 4,4 от сухоговеса мозга ), содержание основноговещества 92,5, перекисное число 0,02,П р и м е р ,2. Измельченный с помощью мясорубки парной или дефростированный головной мозг крупного рогатого скота (3,0 кг) лиофильно высушивают при температуре от -10 Со до -15 ОС и давлении 0,1 мм рт. ст Выход обезвоженного мозга 0,9 кг; содержание воды 5,2. Лиофильно высушенный мозг (500,0 г) перемешивают с 1500 мл ацетона в течение 1 ч при 18-20 ОС. Таких экстракций проводят пять. Объединенный экстракт упаривают в вакууме досуха, остатокдважды перекристаллизовывают иэ95"ного этанола, иолучают 43,3 гхолестерина (9,1 от сухого весамозга, 86,0 от содержания холесте-.5 рина в головном мозге). Жмых послеизвлечения холестерийа сушат в вакууме (1 мм рт. ст,), получают393,0 г (83,2 от сухого веса мозга ) материала,50,0 г которого экст-1 О рагируют 300 мл 96-ного этанола втечение 1 ч при 50 ОС. Экстрактфильтруют через стеклянный пористыйфильтр Р 3 способом обратного фильтрования., Твердый остаток еще трижды15 экстрагируют указанным. методом. Всеполученные экстракты объединяют ивыдерживают 10 ч при 20 С. Выпавший осадок, представляющий собойконцентрат сфинголипидов, отфильтровывают в вакуумном эксикаторе надедким кали до постоянного веса, Выход концентрата сфинголипидов 8,3 г16,6 от веса жмыха, 13,8 от сухого веса мозга), содержание основного вещества 82,3. Маточный раствор выдерживают 12 ч при ООС, оса-док отфильтровывают на стеклянномФильтре Р 3 и сушат в вакуумном эксикаторе над едким кали, получают4,2 г концентрата фосфатидилэтанол 30 аминов (8,3 от веса жмыха, 6,3от сухого веса головного мозга),содержание основного вещества 79,9.Фильтрат упаривают в вакууме (10 мм)досуха, остаток растворяют в 200 мл35 смеси хлористый метил-этанол (95:5по объему), раствор помещают в хроматографическую колонку (50 х 4 см),заполненную 500.г окиси алюминия(нейтральная, активность Й ) в той40 же смеси растворителей. Колонкупромывают последовательно 1200 млуказанной смеси растворителей и2000 мп этанола, После упариванияспиртового алюата в вакууме полу 45 чают 4,9 г концентрата фосфатидилхолинов (9,8 от веса жмыха, 7,8от сухого веса мозга ), содержаниеосновного вещества 91,9, перекисное число 0,01),50 По аналогич ым методик м получают, концентраты Фосфатидилхолинов из спинного и головного мозгасвиней. Таким образом, по сравнению с известным способом содержание фосФатидилхолинов в целевом продукте увеличивается с 17-20 до 90-94. Уменьшается содержание токсичных и канцерогенных перекисей (перекисное число не выше 0,03). Предлагаемый способ представляет собой комплексную технологическую схему выделения органопрепаратов из нервных тканей сельскохозяйственных животных и позволяет с достаточно957908 Формула изобретения 15 20 Составитель В. БрусиловскаяРедактор Т. Парфенова ТехредМ.Надь. Корректор Е. Рошко Заказ 6652/7 Тираж 714 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное Филиал ППП "Патентф, г. ужгород, ул. Проектная, 4 высокими выходами получать нарядус фосфатиднлхолинами выход 4,34,5 от сухого веса мозга с достаточно высокими выходами получатьи 98-ный холестерин выход(13,313,8 ), 78,81-ный концентрат сфинголипидов выход(8,6-8,9), 802-ный концентрат фосфатидилэтаноламинов; (выход 5,9-6,2) и белковыйгидролизат, содержащий до 50 незаменимых амйнокислот выход 1718). Способ получения фосфатидилхолинов из спинного м головного мозга крупного рогатого скота и свиней, включающий измельчение исходного сырья, его обезвоживание, последовательную зкстракцию ацетоном иэтанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение целевого продукта, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта иего чистоты, обезвоживание сырьяосуществляют методом лиофильной .сушки приот 0 до 50 фС, а очисткуполученного экстракта проводятпоэтапной кристаллизацией при тем"пературе от -20 до ОфС с последующей хроматографией на колонке сокисью алюминия.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Гуров В.А., Иноземцев М.А.,Замиховский А.Б. Справочник по производству органопрепаратов. М., фПищевая промышленность", 1970,"с. 137-139.