Способ получения эритроцитарного диагностикума

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Сотов СоветскихСоциалистическихРесттублнн и 935108 К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(5 )М. Кл. А 61 К 39/385 с присоелинением заявки М Гоаударствснхых квнитет ССь" Р ао делам изабретенкк и открытийОпубликовано 15,06,82, Бюллетень ртЪ 22 Дата опубликования описания 15. 06. 82(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМАИзобретение относится к медицине,а именно к иммунологии,Известен способ получения эритроцитарного диагностикума путем смешения взвеси фиксированных эритроцитови антигена в присутствии конъюгиру 5ющего агента с последующим инкубированием смеси и отмыванием сенсибилизированных эритроцитов 1.Однако известный способ не обестопечивает высокои чувствительности гепатитного В и эхинококкового диагностикумов.Целью изобретения является повышение чувствительности гепатитного В15и эхинококкового диагностикумов.Эта цель достигается тем, что согласно способу получения эритроцитарного диагностикума путем смешения взвесификсированных эритроцитов и антигенав присутствии конъюгирующего агентас последующим инкубированием смесии отмыванием сенсибилизированных эритроцитов в качестве конъюгирующего агента используют фуксин основной в концентрации 0,01-0,1, компоненты смешивают в соотношении 2:1;1 и смесь инкубируют при 40-80 С в течение 30- 180 мин.При этом используют 3-12 Й-ную взвесь фиксированных эритроцитов.Способ поясняется следующими примерами.П р и м е р 1, Смешивают 1 мл 10-ной взвеси фиксированных формалином по Вайнбаху бараньих эритроцитов, 0,5 мл раствора НВАо (концентрация белка 20 мкг/мп) и 0,5 мл водного раствора 0,054-ного фуксина основного. Смесь выдерживают 180 мин при 60 С, встряхивая через каждые 15 мин, после чего сенсибилизированные эритроциты трижды отмывают 0,857.-ным раствором МаС 1, содержащим 0,11 желатины и 2 об. 1/15 М фосфатного буфера, рН 7,2. К осадку отмытых сенсибилизированных эритроцитов добавляют О мл такого же раствора, который используТаблица 1 Титр РПГА при сенсибилизации с помощью Дозаантигена,мкг/мл предлага-емого способа СгС 1 танина риванола 1 : 2 х 10 1 : 32 1 : 256000 1 : 1 х 10 224 1 : 128000 1 ; 1 х 106 1 : 2 х 10 1 : 16 112 1: 2 х 10Ь1: 2 х 101: 2 х 10 1: 1 х 10 56 1: 1 х 106 1: 1 х 10 28 14 П р и м е ч а н и е, Титр РПГА меньше: 8 (отрицательный результат) Т а б л и ц а 2 Доза эхи- нококкового антигена, мг/мл Титр РПГА при сенсибилизауии с помоцью предлагаемого способа СгС 1 танина риванола 1 : 96000 1 : 96000 1 : 96000 1 : 38400 1 : 28800 1 : 48000 1 : 24000 1 : 28800 1 : 48000 1 : 12000 1 : 24000 1 : 48000 Предлагаемый способ позволяет по- обладающие более высокой чувствительлучить эритроцитарные диагностикумы, ностью по сравнению с известными, так 3 93 ют для отмывания, содержащего дополнительно 0,13 азида натрия, Получают 0,5 Ф-ную взвесь стабильных сенсибилизированных эритроцитов, используемых в качестве эритроцитарного диагностикума.П р и м е р 2. Смешивают 1 мл 5 Ф"ной взвеси фиксированных формалином по Вайнбаху бараньих эритроцитов, 0,5 мл раствора эхинококкового анти- гена (концентрация 2000 мкг/мл) и 0,5 мл водного раствора 0,03 Ж-ного фуксина основного. Смесь выдерживают 120 мин при 50 С, встряхивая через каждые 15 мин, после чего сенсибилизированные эритроциты трижды отмывают 0,854-ным раствором йаС 1, содержа 5108 4щим нормальную лошадиную сывороткув разведении 1:200 и 2 об. 3 1/15 Мфосфатного буфера, рН 7,2, К осадкуотмытых сенсибилизированных эритроцитов добавляют 10 мл такого же раствора, который используют для отмывания эритроцитов, содержащего дополнительно О,1/ азида натрия. Получают0,53-ную взвесь эритроцитов, которые 1 о используют в качестве эритроцитарногодиагностикума.характеристика чуствительности испецифичности реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с эритроцитарнымидиагностикумами, полученными по известным и предлагаемому способам,представлена в табл. 1 и 2, 1Формула изобретения Составитель С, МалютинаРедактор О. Персиянцева Техред Е. Харитончик Корректор И, Демчик Заказ 4091/1 О Тираж 714 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж 35 Раушская наб., д, 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 5 9351 чувствительность гепатитного 8 диагностикума повышается в 2 раза и эхинококкового в 3,5-4 раза,1. Способ получения эритроцитарного диагностикума путем смешения взвеси фиксированных эритроцитов и анти О гена в присутствии конЪюгирующего агента с последующим инкубированием смеси и отмыванием сенсибилизированных эритроцитов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения чув 08 6ствительности гепатитного В и эхинококкового диагностикумов, в качествеконьюгирующего агента используют фуксин основной в концентрации 0,01-0,1 Ф,компоненты смешивают в соотношении2:1: 1 и смесь инкубируют при 40-80 Св течение 30-180 мин.2, Способ по и. 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что используют3- 12/-ную взвесь фиксированных эритроцитов.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРН 6347491 кл, А 61 К 39/00, 1977.