Способ получения сухого эритроцитарного диагностикума для выявления видоспецифических антиглобулинов

" т-н.тно- р,ро,О П И С А НЙИЗОБРЕТЕН ИЯ Й 455738 Соне Советскнх Соцналнотнчеокнх Реопублнк) Заявлено 25.12,72 (21) 1864243/31 с присоединением заявкиГооудоротвенный квинте Совета Мнннотров ССС оо делам нзобретеннйн открытнй 32) Приоритетпубликовано 05.0 3) УДК 615.372(088.8 5, Бюллетень1 ата опубликования описания 20.02.7 Авторыизобретения М, Колот(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИ АНТИГЛОБУЛИНОВИзобретение относится к методам медицинской диагностики,Известен способ получения сухих эритроцитарных диагностикумов путем иммунизации животных микробными антигенами с последующей сорбцией полученной иммунной сыворотки на эритроцитах, фиксированных акролеином и обработанных например, танином.Для повышения специфичности диагностикума предлагается на эритроцитах сорбировать взятые в зоне сенсибилизирующей активности иммуноглобулины, полученные при иммунизации животных гетерогенными эритроцитами.Способ приготовления сухого эритроцитарного диагностикума для выявления видоспецифических анти глобули нов осуществляют следующим образом. Кровь, эритроциты которой используют для иммунизации животного, забирают в необходимом количестве в стерильный флакон со стеклянными (металлическими) бусами и дефибринируют встряхиванием в течение 15 мин. Дефибринированную кровь отделяют от сгустка фибрина фильтрованием через три слоя марли и центрифугированием в течение 15 мин, разделяют на два слоя: верхний - сывороточный, который декантируется и выбрасывается, и нижний - форменные элементы крови (в основном, эритроциты) . Эритроцитарный осадок трижды промывают 10-кратными объемами физиологического раствора центрифугированием (при 2000 об/мин в течение 15 мин), а затем фиксируют акриловым альдегидом (акролеином) .Для этого к измеренному осадку эритроцитов добавляют фиксатор (акролеин на физиологическом растворе) в соотношении 1; 20, Концентрация акролеина при этом составляет для 10 эритроцитов млекопитающих (обезьяны, лошади, быка, барана, собаки, козы, кошки, кролика, морских свинок, белых крыс, белых мышей и др.) и человека - 0,4/о с экспозицией в 30 мин при комнатной температуре. Эритро циты птиц (кур, гусей, голубей) фиксируются0,3%-ным раствором акролеина в течение 20 мин при комнатной температуре.После фиксации эритроцитарный осадоктрижды отмывается от акролеина 10-кратными 20 растворами физиологического раствора (при2000 об/мин по 3 мин) .Зафиксированные и отмытые эритроцитымогут храниться в рефрижераторе (при температуре +4 С) в виде 10%-ной взвеси на 25 физиологическом растворе или подвергатьсялиофильному высушиванию.Иммунизацию животных, сывороточныеглобулины которых предполагается сорбировать на эритроцитах, проводят циклом, состо- ЗО ящим из трех инъекций с интервалом двое су455738 Пр едм ет изобретения Составитель С. МалютинаРедактор Т. Каранова Техред А, Камышникова Корректор Н. Лебедева Подписное Заказ 625/ Изд, Ме 275 Тираж 559ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытийМосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 ток, Доза осадка эритроцитов на одну инъекцию составляет 0,5 мл на 1 кг веса животного при внутривенном введении. Перед каждой инъекцией необходимое количество жидких (10/о) эритроцитов осаждается центрифугированием, а затем ресуспендируется в стерильном физиологическом растворе в соотношении 1: 3. При использовании для иммунизации сухих эритроцитов необходимое количество ампул разводят в таком же соотношении стерильным физиологическим раствором.На пятый - седьмой день после заключительной инъекции у животного забирают 2 - 3 мл крови, сыворотка которой титруется (двукратное разведение с 1: 20 до 1: 10240 в объеме 0,5 мл) 0,5/,-ной взвесью фиксированных (регидратированных сухих) одноименных с вводимыми эритроцитов (по 0,5 мл). При отсутствии таких эритроцитов они могут быть заменены эритроцитами другого вида животного или птицы. Величина гемагглютинирующего титра 1: 320 и выше является показателем достаточно высокой активности полученной сыворотки, Затем проводят массивный забор крови у этого животного, сыворотку крови разливают в стерильные ампулы по 0,5 - 1 мл и лиофильно высушивают по режиму сывороточных препаратов.Перед приготовлением эритроцитарного видоспецифического глобулинового диагностикума определяется гемагглютинирующий титр высушенной сыворотки с эритроцитами, которые составят клеточную основу будущего препарата. Рабочей дозой для сенсибилизации эритроцитов является следующие за гемагглютинирующим титром второе - третье разведения сыворотки, в которых эритроциты уже не агглютинируют, Готовят смесь, состоящую из необходимого количества эритроцитов в виде 2/,-ной взвеси их на физиологическом растворе и равного объема сыворотки, взятой в концентрации, соответствующей второму за гемагглютинирующим титром разве дению. Смесь выдерживают при температуре37 С в течение 30 мин, после чего эритроциты осаждают центрифугированием и один раз отмывают 10-кратным объемом физиологического раствора.10 Полученный осадок сенсибилизированныхглобулинами эритроцитов взвешивают в сахарозо-белковом наполнителе (сахарозы 15%, мясопептонного бульона или любого из испытанных стандартных белковых кровезамени телей - желатиноля, протеина, казеина30 /о на дистиллированной воде) до 50%-ной концентрации, и полученную взвесь разливают в 6-миллилитровые ампулы по 1 мл. Ампулы после энергичного встряхивания замора живают при температуре - 50 С, лиофильновысушивают по режиму сушки сывороточных препаратов и запаивают.Перед использованием ампулу с препаратом вскрывают, содержимое разводят в 10 мл 25 физиологического раствора с получением 0,57 орабочей взвеси диагностикума. 30 Способ получения сухого эритроцитарногодиагностикума для выявления видоспецифических антиглобулинов путем сорбции иммуноглобулинов на фиксированных акролеином эритроцитах с последующей лиофилизацией, 35 отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности диагностикума, на эритроцитах сорбируют взятые в зоне сенсибилизирующей активности иммуноглобулины, полученные при иммунизации животных гетеро генными эритроцитами.