Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата

(7 ) Заявитель Всесоюзный научно-нсслецовательский технологический ин антибиотиков и ферментов медицинского назначения(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЛОКОСВЕРТЫВАВ 1 цЕГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТАИзобретение относится к медицинской промышленности, в частности к производству ферментов медицинского назначения, н касается повышения активности продуцента молокосвертывающего фермента руделина.5 По основному авт.св. Иф 522230 известен способ получения молокосвертывающего фер. ментного препарата, используемого дяя получения молокосвертывающего препарата "РуссуЮ лин", который может заменить ферментный препарат аналогичного действия "Репнин" животного происхождения. Этог способ характериэу. ется тем, что в качестве продуцентов фермента используют базидальные грибы вида ВцаацЬ% десоогаоа, а именно штамм йиаыа десоЬгэца штамм 2, культивирование которого ведут на питательной среде, содержащей необходимые источники для роста продуцента при 25-26 С до достижения максимальной активности в куль туральной жидкости, После чего мицелнй отде. ляют, фильтрат охлаждают, осаждают белки охлажденным этиловым спиртом, смесь выдерживают сутки при -15 С, декантируют надосадочную жидкость, осадок отделяют и высушивают. Активность препарата 500000 ед, 11.Однако данный способ не позволяет получить фермент, обладающий активностью, выше ука. занной в известном способе.Цель изобретения . - повышение активности и выхода целевого продукта фермента.Поставленная цель достигается тем, что культуральную жидкость на б - 7 сутки культивирования в период максимальной активности продуцента подвергают тепловой обработке в субэкстремальном интервале температур 37,5 . - 38,5 С в течение 30 - 75 мин.Сущность способа состоит в том, что для осуществления этого процесса колбы, содержащие культуру в период максимальной продукции фермента, т.е, на 6 - 7 сутки ферментации в обычных условиях, подвергали воздействию повышенной температуры 37,5 - 38,5 С в тече. ние различного времени для определения тех сроков, в которые, происходит максимальный вьвод фермента. Опыты с интервалами в 15 мин показали, что имеет место фазный характер увеличения выхода фермента: в частиос54983 4ординат - активность куя ьтуральиой жидкости.соответствующая количеству фсрмснга и ней(в процентах к контролю, на оси абцнссвремя прогревания.5В таблице приведены рсзульиты статистической обработки полученных данных. нриопределении зависимости молокосверывающейактивности культуральной жидкости от температурной обработки в интсрвале субэкстрс.мальной температуры. Время экспозиции,минАктивность (средняя арифметическая), Я 2030 118 33,6 30 123 7930 6,9 03 3510 17,9 60 113 4190 7,3 133 2490 22,3 90 6360 4 24,1 8080 105 28,4 105 120 2400 13,1 109 14,4 2290 135 112 2 7570 150 109 9320 30,5 165 123 3670 16,2 180 107 3860 19,7 105 195 2910 16,3 210 29,8 5660 225 100 115 21,4 6420 240 П р и м е р. Ферментацию проводят в качалочных колбах емкостью 750 мл (со 100 мл питательной среды) на качалках при 140 об/мин при 26 С в течение 7 сут, В результате перио дической проверки молокосвертывающей активности культуральной жидкости (контроль) и той же жидкости после очередной температурной обработки (опыт) отмечено значитель. ное (в среднем, на 33%) пЬвышение уровня активности культуральной жидкости через 1 ч 15 мин выдержки в термостате при 38 С (данные ряда опьпов суммированы в таблице 3 8ти, наиболее высокое значение наблюдаетсяв сроки 30 мин и 1 ч 15 мин. Последний срокявляется оптимал 1 дым в больщенстве опытов и при этом в среднем активность превьппает активность культуральной жидкости в контроле на 33%. Активность культуральной жидкости без температурной обработки (контроль) не меняется на протяжении 24 ч.На чертеже представлен график результатов проведенных экспериментов, причем на оси Лисперсия Среднее квадрати(сумма квадратов) ческос отклонение и на графике). Молокосвертывающая активность культуральной жидкости, достигнутая в конце ферментации, служит контролем для дальнейшего эксперимента. Колбы с культуральной жидкостью помещают в ультратермостат, обеспечивающий быстрый нагрев и дальнейшее поддержание температуры на уровне 38 С. Каждые 15 мин в течение 4-х часов проводят очередную проверку молокосвертываюшей активности культуральных. жидкостей. Определение активности фермента проводят по следующей методике: в 100.мг молока вносят- Рр Составитель И. ПривалоТехред С, Мигунова Реаактор М. Келемещ Корректор С. Шомак Тираж 528 ВНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений и открытии 113035, Москва, Ж - 35, Раущская иабаказ 6831/35 ПодписноСР д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 1 мл 15 Я.ного раствора СаС 1,2, берут О млв пробирку, нагревают цо 35 С и вносят1 мл активной культуральной жидкости, Вмомент внесения культуральной жидкости включают секундомер и активность фермента определяют по времени образования плотногосгустка. реимущества предлагаемого способа заключаются в том, что кратковрсменная тепловая О обработка позволяет существенно увеличить выход и активность фермента, а также экономический эффект при промышленном получении указанного продукта. Формула изобретенияСпособ получения молокосвертывающего ферментного препарата по авт.св. Нф 522230, . о т л и ч а ю щ и Й с я тем, что, с целью повьннения активности и выхода целевого продукта, культуральную жидкость на 6-7 сутки культивирования в период максимальной активности продуцента подвергают тепловой обработке в субэкстремальном интервале температур 37,5 - 38,5 С в течение 30-75 мин.Источники информации.принятьс во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР 1 е 522230, кл. С 12 О 13/10, 1972.