Способ получения белковых компонентовкрови

Союз Советских Социалистических Республик(23) Приоритет- . (32) 25.07.77 А 61 К 37/14 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий.018.51 55088.8) Дата опубликования описания 23,0681 ИностранцыЖак Жан джозеф Деленти Ричар(72) Авторы изобретени Алэн Шэнд ИностраннаМонсанто(США) ирмапани" явите 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВЫХ КОМПОНЕНТО КРОВИ-алкил-аминоя группа - димеют следующим обПри этом динизшийнизшая Функциональнатиламинопропил.Способ осуществляразом.. Исходную плазму получают в свежезамороженном виде. До фракционнрования полиэлектролитом-сополимеромплазму оттаивают нагревом до 35 ОС.Соответствующий полиэлектролит-сополимер добавляют к плазме в концент-рации примерно 0,025-.0,1 В, предпочти-.тельно 0,035-0,05% при рН 7,5-8,5.Смесь перемешивают около 10 мин,5 в это время препарат, содержащий Фактор 1 Х, селективно адсорбируется полиэлектролитным сополимером. Остающаяся жидкая плазма содержит факторыО И Х и Х Нерастворяющиеся в воде.поперечно сшитые полиэлектролиты-сополимеры содержат этилен и ангидридмалеиновой кислоты с содержанием боковых функциональных динизших-алкил-амино-низших алкильных групп,лкоорб оли- ержай кисм це- логиозволяепени сновной со ангидрид получаю и ангидрид сутствии(АМК)ленав при Изобретение относится к меда именно к гематологии:Известен способ получения бвых компонентов крови путем адции крови на поперечно сшитыхэлектролитах - сополимерах, сощих этилен и ангидрид малеиновлоты, с последующим элюированилевого продукта с .помощью Физически приемлемой соли Г 11.Однако известный способ.неет пОлучить препарат высокой счистоты.Цель изобретения - повышенипени чистоты препарата. Поставленная цель достигается тем, что способ получения белковых компо- нентов крови осуществляют путем адсорбции крови на поперечно сшитых полиэлектролитах - сополимерах, содержащих этилен и ангидрид малеиновой кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приемлемой соли, жидкую плазму крови подвергают взаимодействию при рН 7,5-8,5 с полиэлектролитом в количестве 0,025-0,1 с содержанием боковых динизших-алкил-амино-ниэших-, .-алкильных функциональных групп. олимер, содержащий этималеиновой кислоты взаимодействием этна малеиновой кислоты ерекисного катализато 841572ра в соответствующем растворителе.Сополимер предпочтительно содержит, восновном, эквимолярные количества этиленового и ангидридного остатков,Основной сополимер типа АМК можноподвергать взаимодействию с низшим-алкил-амино-бис-низшим алкил-амином,содержащим две первичные аминогруппыс получением поп" -.чно сшитого сополимера типа АМК, блоковые функциональ)ные динизший-алкил-амино-низшие алкильные группы можно добавлять в поперечно сшитый сополимер путем взаимодействия динизшего-алкил-аминонизшего алкил-амина с частью всегоколичества остающихся ангидридныхгрупп полимера типа АМК,Предпочтительно полиэлектролитсополимер также переводят в сольхлористоводородной кислоты.Предпочтительной функциональнойдинизший-алкил-амино-низшей алкильной группой является диметиламинопропил, предпочтительным сшивающим агентом. - метилиминобиспропиламин.Предпочтительным полиэлектролитом-сополимером является такой, которыйсодержит около 5 метилиминобиспропиламиновых сшивающих групп и около 90боковых диметиламинопропиламиновыхфункциональных групп на 100 единицангидрйда малеиновой кислоты в полимере типа АМК,Могут быть использованы и другиесшивающие агенты, например дивинилбензол и этилендиамин, а также функциональные группы, например диметиламиноэтил и диэтиламинобутил. 45 Одной единицей фактора 1 Х считается количество этого фактора в 1 млсмешанной обыкновеннои цельной плаз-.мы, Индекс степени чистоты рассчитывается как соотношение общего количества белка в исходной плазме и общего количества белка в целом препарате, содержащем фактор 1 Х, умноженное на соотношение единиц фактора 1 Х,в целевом препарате на основе фактора.1 Х и единиц фактора 1 Х в исходнойплазме,П р и м е р 2. Применяют 0,4 г/млполиэлектролит-сополимера состава попримеру 1 для примешивания к обыкновенной человеческой плазме в течение60 20 мин при рН 7,4 для выделения препарата, содержащего фактор 1 Х, аналогично способу примера 1,В таблице приведенц результаты замеров адсорбции факторов в пересчете65 на исходную плазму,После адсорбции фактора 1 Х фактор У 11, оставшийся в плазме, может быть далее концентрирован и выделен известными способами. Адсорбированный препарат на основе фактора Х легко выделяется путем элюирования из поли- электролита-сополимера промывкой водным раствором хлористого натрия молярности приблизительно 1-3. Около 0,035 вес.Ъ полиэлектролитного сополимера, содержащего около 5 метилиминобиспропиламиновых сшивающих групп и около 90 диметиламинопропиламиновых функциональных групп на 100 единиц ангидрида малеиновой кислоты. в сополимере типа АМК применяют для селективной адсорбции препа- рата на основе фактора 1 Х при рН 8. Адсорбированный препарат на основе белковых компонентов крови элюируют из полиэлектролита-сополимера промывкой 1,7 М йаС при рН 6.Элюат затем диализируют против 0,1 М МаС при 4 С и для хранения сушат замораживанием.П р и м е р 1. Полиэлектролит-сополимер, состоящий из продукта взаимодействия, в основном, эквимолярных частей этилена и ангидрида малеи новой кислоты (АМК), пОперечно сшитого метилиминобиспропиламином(МИБПА), подвергают взаимодействиюс диметиламинопропиламйном (ДМАПА)с получением около 5 сшивающих 5групп - МИБПА и около 90 боковыхгрупп ДМЛПА на 100 едиНиц ангидридамалеиновой кислоты в сОполимере типаАМК с переводом затем в соль хлористоводородной кислоты,1 л обыкновенной плазмы человекас помощью одномолярной: гидроокисинатрия доводят до рН 8, добавляязатем 0,35 г полиэлектролита-сополимера, после чего смесь перемешивают200 мин, фильтруют, и получают фильт рат в виде обедненной фактором Хплазмы. Жмых промывают дистиллированной водой для удаления извлеченногоиз плазмы белка. Полиэлектролит-сополимер можно также подвергать взаимодействию с помощью дивинилбензола в качествесредства, образующего поперечные связи, и диметил-аминоэтиламина в качестве поставщика функциональных групп, 5 Можно также испольэовать этилендиамино- и диэтиламинобутиламин в названных количествах. Затем из полиэлектролитного сопо О лимера элюируют препарат на основефактора 1 Х, содержащего факторы 11,1 Х и Х, промывкой 25 мл 1,7 М хлористого натрия при рН б,0 (рН доводятдо этого значения 0,1 М лимонной кислотой) в течение 20 мин. Сополимерный шлам фильтруют, фильтрат собираютв качестве желаемого состава на основе фактора 1 Х. В серии семи повторныхпрогонов фракционирования по 1 л, сприменением предлагаеМого способа,получают в среднем 483 + 48 единицбелковых компонентов фактора 1 Х на1 л при степени чистоты с показателем 178 + 33.841572 Фактор Адсорбция, % 83 Формула изобретения с 6 Х Составитель С.МалютинаРедактор О,Черниченко Техред Н.Бабурка Корректор О. Билак Заказ 4871/84 Тираж 687 Подписное ВНИИПИ ГосударствЕнного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Эти результаты говорят о высокой селективности относительно адсорбции факторов , Х и Х при полном исключении факторов Ч и У в пересчете на соответствующие количества этих факторов в исходной плазме.П р и м е р 3, Согласно описанному в примере 1 способу, сополимер, содержащий этилен и ангидрид малеиновой кислоты (АМК) поперечно сшитый метилиминобиспропиламином (МИБПА) и затем подвергаемый взаимодействию с дибутиламинобутиламином (ДБАБА) вместо диметиламинопропилами на (ДМАПА) дает подобные результаты. Предлагаемый способ позволяет получить препарат высокой степени чистоты. 1. Способ получения белковых компонентов крови путем адсорбции кровина поперечно сшитых полиэлектролитах-сополимерах, содержащих этилен иангидрид малеиновой кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приемлемой соли,ф о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с.целью повышения чистоты15 препарата, жидкую плазму крови подвергают взаимодействию при рН 7,5-8,5с полиэлектролитом в количестве от0,025-0,1 с содержанием боковыхдинизших-алкил-амино-низших-алкиль ных функциональных групп.12. Способ по и, 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что динизшая-алкил-амино-низшая функциональная группадиметиламинопропил.25 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент СЫА Р 3455001,кл, 260-112, 1969.