826243

Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено: 120979 (21) 2813928/28-13с присоединением заявки М23) ПриоритетОпубликовано 300431. Бюллетень Йо 16 6 01 И 33/54 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий(53) УДК 663.14.039. , 37 (088,8) Дата опубликования описания 30,0481 Н.А. Константинова,В.В. Лаврентьев, Л.В, Ковальчуки Р.В. ПетровВторой Московский ордена Ленина государственнмедицинский институт имН.И, Пирогова(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯКОМПЛЕМЕНТА В КРОВИ Изобретение относится к областимедицины, а именно к иммунологии,Известен способ определения комплемента в крови путем помещениятерморезистора в среду, содержащуюантисыворотку с последующим пропусканием через него электрического.тока добавления исследуемой пробы,инкубации и измерения температурыреакционной среды 1,Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.Цель изобретения - повышение точности способа.Эта цель достигается тем, чтоспособ определения комплемента вкрови осуществляется путем помещения терморезистора в среду, содержащую антисыворотку с последующимпропусканием через него электрического тока, добавления исследуемойпробы, инкубации и измерения темпе=ратуры реакционной среды, при этомпропускают электрический ток силой0,5-0,01 мА и инкубацию ведут в течение 10 мин, а через 10 мин послеизмерения температуры среды черезтерморезистор повторно пропускаютэлектрический ток силой 10-0,1 мАтзатем через 10-15 мин измеряют температуру среды и по соотношению полученных показателей теплопровЬдности определяют наличие комплемента вкрови.П р и м е р 1Определение скорости связывания комплемента свежей сыворотки морской свинки с агрегированными иммуноглобулинами класса 1 уб.В термостатируемую кювету заливают 1 мл раствора, предварительноагрегированной антисыворотки класса196 в разведении 1 г 4000, помещаюттерморезистор и включают рабочий 15 ток 0,5 Ф 0,01 мА.Агрегирование антител стандартноймоноспецифической антисывороткикласса 1 у 6 проводят по классическойметодике при 63 С в течение 30 мин 20 в ультротермостате. Раствор агрегированных антител разливают по пробиркам Видаля и с помощью физиологического раствора приготавливают нужныеразведения (в данном случае разведе ние постоянно и равно 1:4000, чтосоответствует концентрации антител0,210 мг/мл), Для данной маркистандартных антисывороток возможноодноразовое проведение агрегации, 30 что позволяет провести до 4000 опы 82 б 243тов. Неиспользуемую агрегированнуюантисыворотку хранят в холодильнике,при +5 С до 1 г;Через 1-2 мин по достижениистационарного режима работы термореэистора, который характеризуетсяпостоянным значением сопротивленияравным Вр 205 б Ом (контрольное значение) добавляют 0,04 мл растворакомплемента в разведении 1:100 и.фиксируют на ленте самописца изменение сопротивления терморезисторасо временем. Установившийся режимработы достигается. спустя 2-3 минс момента добавления комплемента ихарактеризуется определенной скорость 0 изменения сопротивления терморезистора Й по времениСкорость изменения сопротивлениятермореэистора по времени характеризует интенсивность реакции связывания комплемента с агрегированными 20иммуноглобулинами.Увеличивают ток до 10+0,1 мА испустя 2-3 мин регистрируют кривуюизменения к от , Через 10-15 минполучают установившееся значение 25В д,= 1420 Ом. Строят зависимостьВ/В, от времени 1 для полногоцикла работы терморезистора (режим термометра и прямого подогрева), Чем больше изменение В/Е, повремени П, определяемое гангеноомугла наклона Пд с=тем активнее комплемент. В нашемслучае сс 4= 0 47П р и м е р 2. Реакция связывания комплемента данной агрегированной антисыворотки с инактированнойсывороткой морской свинки,Опыт проводят аналогично примЕру1, но только вместо активированнойсыворотки добавляют инактивированную сыворотку морской свинки, Дляполной инактивации комплементачасть комплементарной сыворотки проогревают в термостате при 55 С.в течение 20 мин по стандартной методике. 45В случае добавления к агрегированнойантисыворотке инактивированного комП лемента нри заданных концентрацияхреагента, значения сопротивления неменяется 1 у с= О, что указывает наотсутствие реакции,П р и м е р 3. Сравнение комплементарной активности свежих сывороток крови морской свинки, кроличьей"и человека со стандартизованной лиофилиэированной сывороткой морской свинки.Для каждого типа сыворотки опытпроводят аналогично примеру 1. Вовсех случаях разведение агрегированной антисыворотки 1:4000, разведение комплементарных сывороток 1:100,рабочий объем кюветы 1 мл.В таблице приведены значения скорости изменения сопротивления терморезисторз по времени Э(К/В,)/31=1 дс упри взаимодействии агрегированныхиммуноглобулинов с различными покомплементарной активности сыворотками крови,Тип сыворотки 9 с Лиофилизированнаясыворотка морскойс,винки О, 21 Свежая сывороткаморской свинки 0,47 Свежая сывороткакролика 0,17 Сыворотка крови.человека 0,24 Из таблицы следует, что комплементактивной сывороткой является свежая сыворотка крови морской свинки,далее сыворотка крови человека, лифилизированная сыворотка морскойсвинки и кроличья. Время проведенияопыта не превышает 20 минП р и м е р 4 Определение комплементарной активности сыворотки кровипо титрованию,Комплементарную активность сыворотки крови животных и человека оценивают по максимальному титру, прикотором еще наблюдается реакция связывания комплементарной сывороткии агрегированных иммуноглобулиновантисыворотки класса 1 ЧО. Опыт проводят аналогично примеру 1 для растворов лиофилизированной и свежейсывороток морской свинки, свежей сыворотки крови человека и кролика.При этом разведение антисывороткименяют от 1:10 до 1;10, а разведение исследуемых сывороток одинаковои равно 1:50. Реакции наблюдаютсяеще при разведениях; для растворалиофилизированной сыворотки кровиморской свинки - 5:10; для свежейсыворотки морской свинки - 1:10 а;для свежей сыворотки крови человека - 1:10; для свежей кроличьейсыворотки - 7:10, Отсюда следует,,.что .по комплементарной активностиисследуемые сыворотки располагаютсяв той же последовательности, что ив примере 3.ПреДлагаемый способ позволяет просто с чувствительностьюдо1:10 8 мг/мл и временем одного опыта не более 30 мин количественно охарактеризовать комплементарную активность исследуемых сыворотокеПредлагаемый способ может бытьиспользован в клинических лабораториях как экспресс-метод оценкиврожденных и приобретенных форм деФицита комплемента,026243 Формула изобретения Составитель С. МалютинаРедактор Е. Дичинская Техред Н.Майорош Корректор М. Коста Заказ 236 В/33 Тираж 907 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Филиал ППП фПатент, г.ужгород, ул.Проектная, 4 Способ определения комплемента в крови путем помещения терморезистора в среду, содержащую антисыворотку с последующим пропусканием через него электрического тока, добавления исследуемой пробы, инкубации и измерения температуры реакционной среды, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью. повышения точности способа, пропускают электрический ток силой 0,5-0,01 мА и инкубацию ведут в течение 10 мин, а через. 10 мин пос"ле измерения температуры среды черезтерморезистор повторно пропускаютэлектрический ток силой 10-0,1 мА,затем через 10-15 мин измеряют температуру среды и по соотношению полученных показателей теплопроводности определяют наличиекомплемента вкрови.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР9 376443, кл, С 12 К 1/00, 05.0473Ф