Способ определения концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови

СООЭ СОВЕТСКИХСО 4 ЮЛИППНЕЮИКРЕСПУБЛИК З(51 А 61 К 39/00 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ СВИДЕТЕЛЬСТ АВТОРСКО ова,государ.Н. И. Пи.А 11 ег 0 5 О 1 Х 20 Средняя масса иммунных комплексоб Ф оеносигпельныл единицу массы приняли массу иммуноглобулина й ) инииахФи ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЮ:(71) 2-й Московский ордена ЛенЪственный медицинский институт имрогова(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, включающий их преципитирование полиэтиленгликолем с последующим определением величины светорассеяния, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, преципитирование проводят двукратно при концентрациях полиэтиленгликоля в пределах 3,45-3,55% и 3,95-4,05% с последующим определением концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови по приросту светорассеяния во второй пробе в сравнении с первой.Изобретение относится к медицине, преимущественно к способам определения им"мунных комплексов в биологических жид.костях организма, например в сывороткекрови и может быть использовано при выявлении иммунных комплексов при различных патологических состояниях,Известен способ определения концент-,рации иммунных комплексов в сывороткекрови, включающий их преципитированиеполиэтиленгликолем с последующим опре- Оделением величины светорассеяния 11.Однако. недостатком известного способаявляется его невысокая точность при определении концентрации иммунных комплексов в зависимости и с учетом молекулярноймассы последних.Цель изобретения - повышение точности способа.Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения концентрациюиммунных комплексов в сыворотке крови,включающему их преципитирование полиэтиленгликолем с последующим определением величины светорассеяния, преципитирование проводят двукратно при концентрациях полиэтиленгликоля в пределах 3,45-3,35 О/ои 3,95-4,05/О с последующим определениемконцентрации иммунных комплексов в сыворотке крови по приросту светорассеянияво второй пробе в сравнении с первой." Пример 1. В качестве калибровочнойсистемы взяли комплексы иммуноглобули- з,нов человека класса С, полученные стандартной тепловой агрегацией (6320 ). Агрегаты различных масс (от 7 до 25 масс иммуноглобулина С) получались при изменении концентрации иммуноглобулина С от Значения фоновых величин те же, чтои в примере 1. Определяют приросты свето- рассеяния во второй.и третьей пробах по отношению к первой и их отношение:55,3-39,5- (12,7-2,2) = 5,3;59,2-39,5- (13,4-2,2) =8,5; 8,5:5,3= 1,6.По графику (фиг. 1 определяют среднюю массу иммунных комплексов М = 25 массам иммуноглобулина С, а затем по графику (фиг. 2) находят концентрацию иммунных комплексов в сыворотке крови С= 0,1 мг/мл,35 сы агрегатов определялись нефелометрически. Для калибровки брали концентраци и агрегатов от 0,5 до 0,075м г/мл, В первой контрольной пробе к 0,5 мл раствора агрегатов известной средней массы и известной концентрации добавляли 0,5 мл 40 фосфатного буфера, во второй - 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 3,5 О/о, в третьей - 0,5 мл полиэтиленгли,коля конечной концентрации 4/о. После 1 ч инкубации при 22 С проводили изме рения величины светорассеяния проб на лазерном нефелометре, определяли приросты светорассеяния по отношению к соответствующим контрольным пробам и строили калибровочные графики.50Взяли сыворотку больного системной красной волчанкой. О, мл цельной сыворотки разводится фосфатным буфером в отношении 1:25. К 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл фосфатного55 буфера - контрольная проба, Во второи пробе к 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 3,5/о, в третьей - 0,5 мл. 0,5 до 5 мг/мл при тепловой агрегации. Масполиэтиленгликоля конечной кон центрации 4 О/о. После 1 ч инкубации при 22 С измеряется светорассеяние в этих трех пробах. Измерения проводились на лазерном нефелометре с цифровой индикацией: 1 проба - 49,0 усл. ед.; 2 проба - 62,7 усл. ед; 3 проба - 70,1 усл. ед.; буфер - 2,2 усл. ед.; полиэтиленгликоль 3,5 О/О - 1 2,7 усл, ед.; полиэтиленгликоль 4 О/О - 13,4 усл. ед,Определяют приросты светорассеяния во второй и третьей пробах по отношению к первой (с вычитанием фоновых значений полиэтиленгликоля и буфера) и их отношение:62,-49,0-( 1 2,7 4 2,2) = 3,2;70,1-49,0- (13,4+ 2,2) = 9,9; 9,9:3,2 = 3,09. Затем по графику (фиг. 1) находят среднюю массу иммунных комплексов Ммассам иммуноглобулина С, а затем по графику (фиг. 3) находят концентрацию С= 1,5 мг/мл (с учетом разведения сыворотки).Пример 2, Сыворотка донора 0,1 мл цельной сыворотки разводится фосфатным буфером в отношении 1;25. К 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл фосфатного буфера - первая контрольная проба. Во второй пробе к 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 3,5 О/о, в третьей - 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 4 О/о. После 1 ч инкубации при 22 С измеряется светорассеяние: 1 проба - 39,5 усл. ед; 2 проба - 55,3 усл. ед 3 проба -- 59,2 усл. ед. Пример 3. Сыворотка больного дискоидной красной волчанкой. 0,1 мл цельной сыворотки крови разводится фосфатным буфером в отношении 1:25. К 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл фосфатного буфера - первая проба. Во второй пробе к 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 3,5/О, в третьей 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 4"/о. После 1 ч инкубации при С производится измерение светорассеяния: 1 проба - 64,4 усл. ед.; 2 проба - 78,0 усл. ед; 3 проба - 82,5 усл. ед. Значения фоновых величин те же, что и впримере 1. Определяют приросты светораг1114425 иммунных комплексов в сыворотке крови С=0,25 мг/мл.Таким образом, предлагаемый способ позволяет ие только зафиксировать факт наличия иммунных комплексов, но и суще. ственно повысить точность и надежность их определения в сыворотке крови, поскольку определяется как концентрация, так и средняя масса иммунных комплексов. Концентрация иммунных комплексод со средней массог 5 относительных единиц, мг/млфиг.2 3 О ъ 3,5 ончентроция иммунных комалексоВых единиц, мг( мл сите среднеи массои 75 Фиг. 3 Составитель ПТехред И. ВересТираж 687ударственногоизобретенийЖ - 35, Рауент г Ужго оиарце илипенк Редактор И. ДербаЗаказ 6387/4В Го елам сква сПа КИИПИ по 13035, М илиал ПППкомитета и откры шская на род, ул,сеяния во второй и третьей пробах по отношению к первой и нх отношение: 78,0-64,4-(1 2,7-2,2) = 3,1;82,5-64,4-(3,4-2,2) = 6,9; 6,9:3,1 =- 2,2.Затем по графику (фиг. ) находят среднюю массу иммунных комплексов М =15 масс иммуноглобулина 6, а затем пографику (фиг. 3) находят концентрацию орректорПодписноеСССРийд. 4/5Проектная