826244

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Сфеэ Сфветскик Сфциавистическик Реснублик(22) Заявлено 010679 (21) 2790689/28-13 (51) М с присоединением заявки йо(23) Приоритет Государственный комитет СССР но дмам изобретений и открытийДата опубликования описания 300481(72) Автор изобретения С.П. СяткинУйиверситет Дружбы народов им. Патриса Лумумбы(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА В ПРОБАХИзобретение относимся к биохимиии касается биохимических исследований.Известен способ количественногоопределения белка в пробах путем выделения его из пробы с последующейпоследовательной обработкой растворамй Ыа 2 СО, СиЯОЯ, цитратом натрияи реактивом Фолина (1 .10Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.Цель изобретения - повышениеточности способа,Эта цель достигается путем выделения белка из пробы с последующей 15последовательной обработкой растворй 4 и Ба 2 СО, Си 804, цитратом натрияи вактивом Фолина, при определенииконцентрации белка в тканях с повышенным содержанием липидов и палисахаридов, белок выделяют путем одновременной обработки пробы 13-нымраствором дезоксихолата и 1 н, раствором НаОН, взятых в соотношении1:825Способ осуществляют следующимобразом,К 0,1 мл анализируемой пробы прибавляют 0,8 мл 1 н. На 0 н, 0,1 мл 1-нбгодезоксихолата натрияи 4 мл реакти," 30 ва С. Смесь встряхивают и.после просветления добавляют 0,5 мл реактива Фолина-Чиокальте и немедленно перемешивают. Полученную смесь инкубируют при комнатной температуре 30.мин в темноте. Затем оптическую плотность окрашенного раствора измеряют на СФб при 750 .нм. Для построения калибровочной кривой используют кристаллический бычий альбумин.Способ используют для исследования концентраций белка в тканях сповышенной жировой инфильтрацией:злокачественные гепатомы, малигнизирующая и регенерирующая печень.П р и м е р . Частичную гепатоэктомию проводят по методу Нщд 1 пв и Апйегзоп. Малигнизацию печени крыс вызывают диэтилнитрозоамином (ДЭНА), который вводят внутрибрюшинно один раз в неделю в течение двух месяцев из расчета 100 мг/кг веса животного. Всего каждому животному вводят 154 мг канцерогена.Штамм гепатомы Г-. 27 пассируют на самцах беспородных крыс. Штаммы гепатом Га (солидный вариант), Г, Г, Г, Гпассируют на самцах мышей линии СЗНА, Животных забивают путем декапитации, Печень не.826244 Статистические показатели Количество животных Критерий Стъюдента ТканьМ+т(Г). 105,90+5,10 )0,05 Печень интактного животного (крысы) 88,50+2,34 10 Печень интактного животного (мыши) 100,40+5,08 Малигнизирующаяпечень 117,41+5,43 0,001 16 Печень контрольных животных 92,57+3,65 медленно извлекают, перфузируют нальду дистиллированной водой, промокают бумажными фильтрами, тщательноочищают от соединительной ткани ивзвешивают. Опухолевую тканЬ берутв логарифмической фазе роста, преимущественно с периферийных участков,исключая возможность попадания в пробу некротической ткани. В опытах используют 33-ный свежеприготовленныйгомогенат (из расчета 1:2 веса наобъем). Концентрацию белка в ткани выоражают в мг/г сырого веса. Результаты опытов подвергают статической обработке методом Монцевичюте-Эрингене с использованием фактора Монденгауэра. Различия между средними арифметическими (М) расценивают как достоверные при значении р (0,05. Данные опытов представлены в таблице )концентрация белка в ткани печени регенерирующей, малигнизирующей, интактных животных и в ткани злокачественных гепатом)..Г5 Количество живот- ных Ткань Регенерирующаяпечень 118( 0,001 101,27+3,65 Печень ложноопери"рованных животных 4 67,33+2,52 животное-опухоленоситель;генеральное среднее;среднее квадратичное отклонение;вероятность различий генераль-.ных средних для опытной (гепатома и печень ж.он.) и контрольной печени интактного животного групп биообъектов;вероятность различий генерального среднего для опытной (гепатома) и контрольной печени ж.он.групп биообъектов. Формула изобретения Составитель С. МалютинаРедактор Е. Дичинская Техред Н.Граб Корректор М. Коста Заказ 2368/33 Тираж 907 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д.4/5Филиал ППП Патент, г.Ужгород, ул.Проектная, 4 В таблице установлено высокодос- товерное увеличение содержания белка в ткани малигнизирующей и регенерирующей печени, а также в ткани всех исследованных злокачественным гепатом, кроме штамма .гепатомы Г, в сравнении с соответствующими кон- ЗО трольными тканями. Увеличенным также оказалось содержание белка в ткани печени животных-опухоленосителей со штаммами гепатом Г, Ги Г. Эти результаты показывают, что по вышенное содержание белка характерно для тканей с усиленной клеточной пролиферацией как в норме (регенерирующая печень), так и при патологий (малигнизирующая печень, злокаче О ственные гепатомы) .Предлагаемый способ позволяет существенно сократить время анализа (на 2-3 ч), делает его менее трудоемким и более точным, а также обусловливает его эффективное применение в исследовании проб с повышенным содержанием липидов и полисахаридов. Способ количественного определения белка в пробах путем выделения его из пробы с последующей последовательной обработкой растворами НаСО ; СцБО, цитратом натрия и реактивом Фолина, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, при определении концентрации белка в тканях с повышенным содержанием липидов и полисахаридов, белок выделяют путем одновременной.обработки пробы 1%-ным раствором деэоксихолата и 1 н. раствором МаОН, взятых в соотношении 1:8. Источники информации,принятые во внимайие при экспертизе 1, (.оцг 1 О.Н., Воаегае 9 Ь й,Гагг А.1 апд Вапда 11 й,1., Ргосе 1 пМеазцгевеп йЬгоц 9 Ь г,6 е Го 11 п Рйепо 1Йеа 9 епй)оцгпа 1 В 1 о 1 о 91 са 1 СЬев 1 йгу1951, Ч, 193, р 256-270.