Способ определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом

169876 БЛИН Я 33 48 ГОСУД АРСпо иэоб етЕПРИ ГКНТ СС ТВЕННЦЙ КОМИТЕТ НИЯМ И СЛНРЦтИН СКОМУ СВИДЕ"(21) 44906 (22) 03. 10 (46) 15.12 (71)Витебс (72) К.С.Аз (53) 616.00 (56) тапсе (54) СПОСО ЛИПОПРОТ НИХ ГЕПАТИ (57) Изобр 6/148991. Бюл. В 4кий медицинсаренок и Н.В3.215 (088.81970, В 2ОПРЕДЕЛЕНИЯЕИДА В СЫВОРОТ и ка аномаль крови б ретения ние спо посредс электроф присутс ини Тви центрации циала 1 6 инститлезняк р. 59-581, АНОМАЛЬНОГОКЕ КРОВИ БОЛЬМение относ ся к ме рощер т 6 мм друг ода в лунки ротки, а со(0,5-1%-ный ,твин,ированной во ПИСАНИЕ И Изобретение относится к медицинеи касается способов определения аномального липопротеида в сывороткекровй больных гепатитомЦелью изобретения является упние и ускорение способа.Пример конкретного осуществленияспособа.На стеклянную пластинку наливаютпрозрачный 17.-ный агар (фирма "Диф-ко") или 13-ный бактоагар (фирма "Феок"), приготовленный на натрий-ацеат-барбиталовом буфере рН 8, 1-8,6.Для приготовления 1.л буфера требуется 8,14 гр барбитала натрия (медикал), 6,48 г уксусно-кислого натрия,90 мл 0,1 мо нормального раствора соляной кислоты.После застывания агара в нем делают лунки на расстоянииот друга. Со стороны катпомещают испытуемые сывостороны анода детергентраствор тритон Хилиили сульфанола в дистиллдЕ), Затем стекло помещают в прибор ается способов определения ого липопротеида в сыворотке льных гепатитом. Целью изобявляется упрощение и ускореоба. Способ осуществляется вом проведения встречного ореза сыворотки больных в вии детергента тритона Х. а, или сульфанола в кон 0,5-17. в градиенте потен- -20 в/см в течение 50-60 мин. гдля электрофореза, В электродные сосуды наливают натрий-ацетат-барбиталовый буфер рН 8,1 - 8,6, разведенный 1:10 дистиллированной водой.Электрофорез проводят при силе тока 5-20 ма, напряжении 300-400 В и градиенте потенциала 15-20 ма, напряжении 3 в/см в течение 50-60 мин,Для учета результата пластинку просматривают в косом проходящем свете. При наличии аномального липопротеида в сыворотке крови между лунками обнаруживается, четкая полоса преципитации, не исчезающая после обработки пластины 107-ным раствором КС 1, эта полоса преципитации принадлежитаномальному лупопротеиду (АЛП),При изучении морфологических и физико-химических свойств миланского антигена было выявлено, что он является липопротеидом низкой плотности, плавучая плотность которого в градиенте сахарозы 1,06, не окрашивается суданом черным, но окрашивается жировым красным 7 В и нафталиновым черным, при электронной микроскопии1698763 Т а б л и ц а 1Частота обнаружения АЛП при различных заболеваниях Обсле- Продолжи- Часто"довано тельный та, 7.результат Пример Заболевания 1 Вирусный гепатит А 2 Вирусный гепатит В 77,4 48 10 55,5 3 Недиференццрованный вирусный гепатит1 г 3 1136 14 80315 25,0 1,23 1,87 4 Доноры5 Другие заболевания Достоверность различий: Р0,005 Р с 0,001 Р ( 0,00 Р С 0,05 Р ( 0,05 . Р (0,01 Р с 0,001 Р ( 0,001 представляет собой дископодобные частицы величиной 40-50 нм. Однако в сыворотке больных и перенесших гепатит А из-за его слабых антигенных свойств.5Таким образом при упрощении и ускорении способа обнаружена довольно высокая частота обнаружения АПП в сыворотках больных гепатитом.В табл. 1 и 2, 3 представлены дан О ные по частоте обнаружения АЛП при различных гепатитах в зависимости от тяжести заболевания, а также в зависимости от положительной реакции аланиновой амиотрансферазы,. Из представленных данных следует, что имеет-. ся положительная корреляция на обна- ружение АЛП и тяжестью заболевания, данные табл. 3 свидетельствуют о бо-, лее высокой чувствительности обнаружения АЛП по сравнению с тестом А и АТ. При этом упрощение способа дости гается эа счет исключения использова"ния специфической антисыворотки, также значительно ускоряется и времяпроведения реакции с 18-24 ч до 1 ч(вреиени,проведения встречного элект"рофореэа). ф о р м у л а и э о б р,е т е н и я Способ определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом путем исследования сыворотки больных в реакции преципитации, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, преципитацию осуществляют встречным электрофорезом в присутствии детер" гента тритона х"100.или твииа, или сульфанола в концентрации 0,5-1 Х, в градиенте потенциала 15"20 в/см в течение 50-60 мин.1698763 Таблица 2 1-5 еееВЬеее День желтухи Тяжесть Всего 16-20 20 и бо- лее 11-15 6-10 42/О 145/39ОХ 26,9 Х 19/ООХ 29/8 14/О27,6% 0% 41/31 75,6%,Легкая Среднетяжелая 6/5 13/8 8/5 11/1 56/33 83,3% 61,5%62,5% ,9,1 Х 58,9 Х 18/14 77,8% 2/2 3/3 2/1 5/5 15/14 100% 100% 50% 1 ООХ 93,3 Х 3/3100% Тяжелая 37/15 30/11 29/6 58/6 217/86 .40,5% 36,7% 20,7% 10,3% 39,8 Х 62/48 77,4% Всего АпП обнаружен49 ю Таблица 3 Частота обнаружения АЛП и повышенная активность АлАТ у детейоверит, интерв. при р 0,05 в Х 0-4,8 Х 0 0 0 Достоверность различийА-Б Р, ( 0,001 Составитель СМельникова Редактор В.Фельдман Техред К.дрык Корректор А.ОбручаРеееетеее еЗаказ 4391 Тираж; .ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по Изобретениям и открытиям при ГКНТ;СССР,113035, Москва, Ж-З 5, Раушская неб.д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина 101 А Учреждения, гденаблюдались случаи гепатита А/42/ 1 Дети (1041)2 Взрослые (145) Б Учреждения, гдегепатит А не наблюдался в течениегода (2) 1 Дети (50) 2 Взрослые (8)