Способ количественного определениявитамина a и -каротина

(53)М. Кл. С 01 Й ЗЗ/16 Веуауетееай катет СИР в авве зевретей втрытйДат опубликования описания 25,04,81 72) Автор изобретения В. А. Люпьева ый нвучно-исспедоватеп ьский ннстнгражданской авиации в народном хозяйствеЕН ИЯ ВИТАМИН Изобре ение относится к биоследования вешествживотных.н способ количественамина А и-кароиз биологических жтем проведения тонкографии 1.известный опособ неелить витамин А ик потери вешества попределении достигв химии и в.тканя ается исовека иИзвест ного опре-фина видкостей5оспойепения экстрактах и тканей п ной хроматОднако позволяет-карори копиют 30%. точно онре тин. так к эственном ия - повышение точноют 10-12 мп, Й а ОН, имеюоб есп еч ива етта рН 8,0-8,3а пластинки в добввпя творе 1,5, что и сорбе 15, что в сподепения витвосуществляемого йной хроматоеред нанесением т щелочью до тиг ветс нного опр каротина, ия тонкосп сорбентв Ъ рабатываю я тем носят ния пластинок в слое ивают слабо щелочную льном растворении сутого из тонкого слои еткое осущестоба. дано .конк аемого спо Бель изобрет; сти способа.Эта цель доссобе количествемина А. ипутем нроведенграфин, взвесь:на пластинку обрн 8,0-8,3.В примерахвпение предпаг П р и м е р 1 Проводят опыт по определению потерь-каротина и витамина А методом тонкоспойной хроматографии на эвшелаченных и неэашелаченных сорбентаЙпя этого силикагель КСК, двуокись кремния и окись апюминия, просеянные через сито 80-100 меш отмывают от примесей ацетоном до исчезновения поглощения в рабочем диапазоне спектра поглошения (328 и 460 нм). Ацетон удаляют высушиванием сначвпа при комнатной температуре в течение 2-3 ч, а затем при 60-70.С в течение 6-7. К 7 г сорбента0,03 Й водного расшего рн 11,0 - 1в полученной вэвесВзвесь сорбента навиде тонкого слоя.После высушивасорбента устанавлсреду, При контрохого сорбента, взя(7 и в 30 мп воды), величина рН составляет 7, 3-7,5.Известные количества-каротина (20,0-32,0 и 35,0 мкг) и витамина А (20,0-32,0 и 35,0 мкг) приносят на тонкий слой защеааченного сорбента и подвергают хроматографии.,Оля проявления используют очищенные от перекисей и дважды перегнанные растворителя.Бервый этап хроматографии закщочается в разделении нанесенной пробы с поморыо петропейного эфира (фракции 40 60 С), содержащего 20% ацегона. Фронт движения првюитеая доводит на 1,5- 2,0 см ниже верхнего краи хроматографической наастинки, После этого хроматограмму быстро помещают на несколько секунд в поток дпинновоановых упьтра - фиолетовых лучей (вьпде 360 нм) дпя обкапывания границ,пятна витамина А и( -каротина.На втором этапе пластинку повторно .епускают в проявитель, состоящий из этаиоаа, ацетона и петроаейвого эфира (фракции 40-60 С), взятых,в соотношении 2:3:5, и фронт движенияпроявителя доводят до верхней границы йятна, имею-"щего значение меньше 8. В этом случае - до верхней границы пятна витамина А .(Й "-0,75). В результате вытянутое в виде овала пятно витамина А становится круглым и компактным. После этого хроматограмму извлекают из ка.) 4048меры, в упьтрафиопетовых лучах отмечают новые границы пятна витамина А,сорбент с этого участка соскабпивают,взвешивают и заливают,.0,5 мп ацетона.Дефект тонкогослоя заполняют сухим сорбентом, взятым из свободного участкапластинки.На третьем этапе пластинку вновьопускают в проявитель, состоящий из пет ролейного эфира (фракции 40-60 С) иЬацетона в соотношении 1:1. Фронт движения проявителя доводят до верхней границы пятна-каротина, располагающего выше ( -0,95). Зто обеспечивает 1 компактность пятна-каротина. Дальнейшие действия аналогичны действиямна втором этапе хроматографии.При получении эпюатов с пятен учитывают навеску сорбента с адсорбированным20 исследуемым веществом и объем элюентаРавную навеску сорбента, взятого с чистого участка хроматограммы вблизи стартовой линии, запивают таким объемомэлюента, что и сорбент из пятен. Злюат,полученный из чистого сорбента, являетсяоптическим контролем. Измерен.ие оптической ппотностн проводят дня-каротина на воине 460 нм, а для витаминана А - на вопне 328 нм.В табл,1 представпены потерикаротина и витамина А при хроматогра-,фии на различных сорбентах: защелаченных и незащелаченных.Табл иц а 1Силиквгел 7 9 4,8 2 щелаченн 7,1 47,5 щелачеп Двуокись кремния защелвченный неэащелаченный 62,8 2,9 15,9 372 18 116 8 ь влю ннь эащ 83,0 О,О Иэ табл,2 видно, что хроматография на эащелвченных сорбентах: выявляет большие количества 3 -каротина и витамина А, чем нв незащелвченных.Точное определение количества 3 -каротина н витамина А в крови и тканях жйвотнык и человека способствует, точному контролю А - витаминной,обесцеченностж Это имеет большое значение в практике здравоохранения, животноводства, Кроме того; точное определение количества упомянутых веществ способствует улучшению биологического контроля витаминной полноценности продукцш пищевой промышленности. я ормула изо Способ количественного определениявитамина А а ф -каротина путем провдения тонкоспвйной хроматографии, о тл и ч в в ш а й с я тем, что, сцелповышения точноста способа, взвесь собента перед. нанесением на пластинкуобрабатывают щелочью до рН 8,0-8,3. ника информации,внимание при экспер при Вталь Э. ММир Хроматогрвфиа в 1965, с. 508. кихЗаказ 2098/63 Тираж 90 одписн НИИП ППП "Патеитф, г. Ужгород, ул. Проекщ ф 5 824048 . 6Иэ табл. 1 видно, что потери Р -кв-. ля етого подготовку сорбентов к хромаротина и витамина А при хроматографии тогрвфию на зашелвченных и неэащеейен нв эвшелаченных снликагеле КСК, окиси иых сорбзнтах проводят способом, алюминия и двуокиси кремния не превы- описанным в примере 1, В отличие от шают 4%. Хроматография этих соедине- з описанного примера на тонкий слой сорний в аналогичных условиях, но на сор- бентов нанося 1 нетролейно-эфирные экс 1 бентах, не подвергавшихся зашелвчиванию, ранты, 0,05 мл неомыляемой фракции, приводит к потерям до 20%. полученные из 0,5 мл ровн или 100,Омамткани печени.П р и м е р 2. Проводит опыт по.опре Е В табл.2 приведены данные количества делению количества ф -каротина и вита- Р -каротина и витамина А в плазме и пемина А в крови н печени кроликов мето- чени кролика методом тонкослойной хродом тонкослойной хроматографии нв звщв- матографии на сорбентах защелвченных лаченных и неэвщелаченных сорбентах. и незащелаченных.4 ФЧа ба ипа 2