Способ количественного определения свободных фенольных кислот в почве

(5)М. Кл. С, 01 Я 33/24 с присоединением заявки Лф -вЬвударстввнный камнтвт СССР( 54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕ ННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯСВОБОДНЫХ ФЕНОЛЬНЫХ КИСЛОТ, (чВ ПОЧВЕ-".:",:" 3;тйЛЯ,1 2 Изобретение относится к анализампочв и может быть использовано приизучении возцействия фенольных кислотна растения,Известен способ количественного определения фенольных кислот в раститель- фном материале 11,Данный способ применен цля растительного неразложившегося и разложившегосяматериала с послецующим анализом методом газо-жидкостной хроматографии.Этот способ не может быть использован цля определения фенольных кислот,содержащихся в почве, по следующимпричинам: значительно более низкое со 1держание фенольных кислот в почве, чемв растительном материале; присутствиев почве ряца соединений, несвойственныхдля растительного материала, которые,выходя в вытяжку в значительных количествах, затруцнянт или делают невозможным анализ препарата, а также могутподвергаться химическим изменениям впроцессе обработки экстракта, особеннопри нагревании в присутствии кислорода воздуха, с вовлечением в эти процессы фенольных кислот.Известен также способ количественного определения свободных фенольных кислот в почве, включающий экстрагирование образца почвы с встряхиванием, центрифугирование вытяжки, сгущение под вакуумом, цоведение рН до 1,8, экстрагирование эфиром, упаривание эфирного экстракта и количественное определение методом хроматографии свободных фенольных кислот 2.Экстрагирование образца пооводят в спирте 95%-ном, поцщелоченном до рН 11 ЙаОН или К а 2 СО,. Для очистки экстракта применяют ионообменную смолу.Однако такой способ не точен, Применение ионообменных смол цля очистки препаратов нецелесообразно при малых количествах фенольных кислот, содержащихся в почве, так как послецние необратимо задерживают на себе значительные количества этих соединений, Кроме того,711213 ц 1 ел очная среда цри:-кстрагировации из -меняет химическую природу фецольцыхкислот, легко встуциоц 1 ик в окислительцо-восстацовительцые реакции, а такжевозможно новообразование их из некоторых органических веществ, переходя цихв экстракт одновременно с ними,Цель изобретения - повышение точцости определения,Поставленная пель достигается тем,что экстрагирование образца почвы проводят нейтральной смесью этацол - водав соотношении 7;3 при соотношении почвык смеси 1;2, после цецтрифугированиявытяжку фильтруют через мембранныйфиль-р, сгушецце под вакуумом осущестОвляют при 38-40 С до водного остатка,перед экстрагировацием эфиром повторнофильтруют через мембранный фильтр, причем экстрагировацие эфиром проводят прирН 7, а после упаривания эфирного экстракта его фильтруют. 1 О 15 20 В основу способа положено экстрагирование образца почвы смесью этанол;во 25ца - 7:3 без применения щелочной среды,так как при высоких рН (особенно в при 1 сутствии кислорода воздуха) фенольныекислоты могут трансформироваться, атакже вступать в реакции с присутствую 30шими в экстракте органическими веществами и продуктами их гидролиза,Способ включает в себя приготовление вытяжки почвы (100-200 г) сосмесью этанол;вода = 7:3 при соотно 35шепни почва;смесь = 1:2 путем встряхивания на качалке 30 мин, центрифугирование 10 мцн при 3500 об/мин и температуре 20 С, фильтрование через мемОбранный фильтр "Сынпор" М 7 для осво 40бождения от тонкодисперсных почвенныхчастиц, замер объема экстракта, сгущение его под вакуумом при 38-40 ОС доводного остатка объемом около 50 мл,что позволяет избежать действия повыО 45шенных температур (выше 50 С), которое неизбежно при упаривании на водянойбане и сочетается с непосрецственнымвоздействием кислорода воздуха; фильтрование через мембранный фильтр М 750для освобождения от органических веществ, нерастворимых в воцном остатке;экстрагирование пятикратно равным объемом очищенного от перекисей диэтилового эфира (во избежание реакций их с фенольными кислотами) при рН 7 для очистки от высокомолекулярных соединений,мешаюпик анализу препаратов; цоведениедо рН 1,8 концентрированной НС 0 по Я4рН-метру; фильтрование через меморацный фильтр )Ф 7 для освобождения от коагулирующих в кислой среде гумусовых веществ, мешающих анализу; экстрагирование фенольных кислот пятикратно равным объемом свободного от перекисей эфира; сгущение эфирного экстракта без кипения на водяной бане до объема около 3 мл; количественный перенос сгущенного эфирного экстракта в тарированную посуду; упаривание последнего до объема около О, 2 мл на воцяной бане без кипения, а затем досуха - на воздухе без нагревания; растворение препарата в смеси этанол-вода - 1; 1; нанесение преп а ра т а на т он косл о йную крома т ог рам му для качественного анализа фенольнык кислот; нанесение на бумажную хроматограмму для количественного определения их. П р и м е р 1, К 173 г дерновоподзолйстой легкосуглинистой почвы в воздушно-суком состоянии прилили 346 мл смеси спирт;вода =7:3 и встряхивали в качалке 30 мин; вытяжку отцентрифугировали 1 0 мин, примерили объем, сгустили под вакуумом при 38 О40 С до водного остатка объемом около 50 мл, отфильтровали через мембранный фильтр % 7, проэкстрагировали пятикратно равным объемом свободного от перекисей диэтилового эфира при рН 7, довели до рН 1,8 концентрированной НС 0 по рН-метру, профильтровали через мембранный фильтр М 7, фенольные кислоты проэкстрагировали пятикратно равным объемом свободного от перекисей эфира, эфирный экстракт сгустили на водяной бане до объема около 3 мл, избегая кипения последнего, перенесли количественно в тарированную посуду, упарили на водяной бане без кипения цо объема около 0,2 мл, затем - досуха на воздухе без нагревания, остаток растворили в смеси этанол;вода -1:1; определили качественный состав кислот метоцом тонкослойной хроматографии и количественное содержание - методом бумажной хроматографии. Результаты анализа представлены далее.Соцержание фенольных кислот в дерново-поцзолистой легкосуглинистой глеевой почве под лесом, мкг/100 г;Протокатеховая 10 Ванилиновая 6 П -оксибензойная 5 Ферул овая следыП р и м е р 2, Проверку полнотыизвлечения фенольнык кислот проводилиследующим образом,К 200 г свежей почвы добавили по20 мкг/100 г кислот, встречаюшиксяв почве чаще всего и в наибольших количествах; непосредственно зв этим прилили к почве 400 мл смеси этвнол;воцв -7;3 и встряхивали нв качалке 30 мин;вытяжку отцентрифугировали при3500 об/мин и 20 С, отфильтроввли чеОрез мембранный фильтр Хц 7, сгустилипод вакуумом при 38-40 С, водный осОтаток объемом около 50 мл отфильтровали через мембранный фильтр % 7;проэкстрвгироввли пятикратно равнымобъемом свободного от перекисей эфира; довели цо рН 1,8 концентрированной НСГ по рН-метру; профильтроваличерез мембранный фильтр Мц 7, проэкстрагировали пятикратно равным объемомсвободного от перекисей эфира; эфирныйэкстракт сгустили до объема около 3 млна водяной бане без кипения последнегоперенесли количественно в тарированнуюпосуду, упарили нв водяной бане без кипения цо объема около 0,2 мл, затем -досуха на воздухе без нагревания; растворили остаток в смеси этанол:вода -1:1,опрецелили качественный состав кислотметодом тонкослойной хроматографии иколичественное содержание ик - метоцомбумажной хроматографии. Параллельнотаким же образом анализировали образецпочвы без добавления фенольнык кислот,По разности определили процент выходакислот, цобввленнык в почву.Выход фенольнык кислот, цобавленныкв почву, 7 о:ПредложенныйПрототип способб-оксибензойнвя 60 84 Ванилиновая 68 79 О -кума ровая 12 72 48С ирен еввяферулова я следыУПочка освоенная, дерновопоцзолистаясрецнесуглиниствя.5Предложенный способ обеспечивает более полный выкоц фенольнык кислот, нвкоцящикся в почве в свободном состоянии, по сравнению с прототипом.1 Оформула изобретенияСпособ количественного опрецеления1свободных фенольнык кислот в почве,включающий экстра гирование образца п очвы с встряхиванием, центрифугированиемвытяжки, сгушение под вакуумом, цоведение цо рН 1,8, экстрвгирование эфиром,упвривание эфирного экстракта и количест 20овенное опрецеление метоцом хроматографии свободнык фенольнык кислот, о т -л и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности определения, экстрагирование образца почвы проводят нейт 25ральной смесью этанол - вода в соотношении 7:3 при соотношении почвы к смеси 1:2, после центрифугирования вытяжку фильтруют через мембранный фильтр,сгущение поц вакуумом осуществляют30при темепературе 38-40 С до водногоОостатка, перед экстрагироввнием эфиромповторно фильтруют через мембранныйфильтр, причем экстрагирование эфиромпроводят при рН 7, в после упариванияэфирного экстракта его фильтруют,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1.Кцаа 1 ао 3(а 5. и 5 Ыпдо Н. 5 с 1,аа РОс 1 М йи 1 г. 197 ЪЛ.19.Ка 1 Ъ.2.;т,ь.с.щапда 711 е,кеп с,апЯа,Гпе-Тапф СЬыапЯ а.во 3 рЬепобсаслс 3 ь св рРапВ д 1 оаСЬ лпЬ 811 Огь,ВоО, Ьс 1 епсе, 40 Э 743, 1967,фа 239-24 Ь.. Составитель Т. РоденковаРецактор Т. Кузьмина Текред И.Аствлощ Корректор М. ДемчикЗаказ 10143/43 Тираж 1019 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по целам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., ц. 4/5 филиал ППП "Г 1 атент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4