Индуктор интерферона

(51) м, 1(Л,2 А 61 К 45/04 с присоединением заявки Ко Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(23) Приоритет(.Опубликовано 150380, Бюллетень МЯ 10 Ю) УД 576 8 097 ,4 (088.8) Дата опубликования описания 1503,80 А.С. Садыков, Ф,И. Ершов, Х.А, АслановА.С. Новохатский, А.И. ИсмаилЬв, С,А. Ауелбеков,Л. Биктимиров.и Н.И. Барам(71) Заявители Институт вирусологии им, Д,И. Ивановского АИН СССР и Институт бисоваганической химии АН Узбекской ССР(5 4 ) ИНДУККОР ИНКЕРФЕРОНА Предложенное соединение известнов качестве иммунодепрессора 2).Целью изобретения является расширение арсенала индукторов, 5 Ма 0- фбНгбн,МН - НС ОкО НО ОН Сн НС СНСНН на.генную 20лсере клеток в пи-ьтуристе37 Сваюткуби- альание ин Изобретение относится к области медицины, а именно вирусологии.Известными индукторави интерферо на являются синтетические полинуклеотиды и вирусы 1).Однако эти препараты дорогостоящие и обладают антигенной активнос" тью.,в качестве индуктора интерферо П р и м е р 1. Интерфероноактивность госсипод-,Ь -амнноэти нокислый натрий ГСН на культур определяют, добавляя препарат тательную среду 48-часовых кул фибробластов эмбрионов кур. По.чении 24-часового контакта при клетки тщательно отмывают, зали свежей питательной средой и ин руют еще 24 ч. Затем в культур ной жидкости определяют содержЭта цель достигается тем, что при.меняют госсипол-,Ь -гминоэтилсернокислый натрий формулыОН К 1-МК-СН- бН 2 ОЗМО терфуона методом титрования по подавлению бляшкообразования тест-вируса на гомологичных культурах. Специфичность интерферона подтверждают определением термостабильности, прогреванием при 560 С в течение 1 ч, а также определением чувствительности к обработке трипсииом (0,2 мл 0,25 ного раствора трипсина в течение 30 мин при 37 С),Результаты эксперимента представлены в таблице.3 721103 Индукции интерферона ГСП в культурах фибробдастов эмбрионов кУР ы интерферона БОЕ 0 р Контроль,31 мкг/мп ГСН62 мкг/мл ГСН125 мкг/мл ГСН 0 210 0 50 мкг/мл ГС 6 Препарат интерферона, полученный при обработке клеток 250 мкг/мл ГСН, прогретый при 56 С в течение 1 ч 40 ат инт Рферона, по- обработке клемл ГСН, подвергтвию трипсина оли ИЦ в присутмкг/мл ДЭАЗ-деклученный при ток 250 мкг/ нутый воздей 10 1-10 мкг/млствии 70-100страна 4-128512 Вирус Синдбис ирус везикулярного стоматита 320 Формула изобретени П)им е"р 2. для ойределенияпротивовирусной активности ГСН накультуре клеток берут 2-3-суточныекультуры фибробластов эмбрионов кури заражают вирусом везикулярного стоматита (ВВС) с множественностьюййфекции 10 БОЕ на клетку. После330-минутной адсорбции при 37 С вируссодержащую жидкость отсасывают,клеткиотмывают раствором Хэнкса изаливают свежей пйтательной средой,содержащей препарат. Через 24 ч,когда в контроле наблюдают выражен-,ное цитопатическое действие вируса,культуральную жидкость сливают и инфекцйойность вируса определяют методом титрования по бляшкам под агаровым покрытием. Так, если в контроле титр вируса достигает 9,2 Ц БОЕ/млв обработанных 120 мкг/мл ГСН культурах продукция вируса составляет5,0 БОЕ/мл. Степень подавления раз-.множения вируса превышает 4 БОЕ/мл, 5т.е. продукция вируса снижается в10000 раз.П р; и м е р 3, Иышиный сывороточный интерферон получают введением ьжшам 500 мкг/мышь ГСН интраперитонеально. Препарат вводят 2 раза спромежутком 24 ч, КонтроЛьным мышам вводятцлацебодистиллироЪанную воду. Через,24 ч и 48 ч после последнего введе" йия препарата из .подключичной.артериизабирают кровь, получают сывороткуи -титруют в йей содержание-интерферона-методом подавленияцитопатйческого действия тест вируса (ВВС) на;мьааиных клетках Ь 929 . При отсутствиивирусингибирующей активности в конт-6 рольных сыворотках титры интерферонапри введении 500 мкг/мышь препаратасоставляют через 24 ч 320 ИЕа( ,череа 48 ч 160 ИЕо/млП р и м е р 4, Противовируснуюактивность,ГСН на экспериментальныхживотных (мыши 16-18 г) определяютвведением (интрапери 1 онеальцо) 500мкг/мышь (25 мг/кг). Через 24 ч повторно вводят ту же дозу ГСН исразуже после этого заражают мышей интрацеребрально 1 000 - 10 000 БОЕ вируса Синдбис в объеме 0,03 мп. Через24 ч после заражения мыщей забивают,извлекают мозг и готовят 10-нуюмозговую суспензию, которую титруютметодом бляшек под агаровым покрыти 5 ем на фибробластах эмбрионов кур.П р и м е р 5. О токсичности ГСН,В культуру клеток куриных фибробластов добавляют различные концентрацииГСН и определяют цитотоксическую доО зу препарата,При экспериментах на животныхмышам (16-18 г) вводят интраперитонеально различные дозы препарата и втечение 6 сут наблюдают за животнымиВ концентрации до 2500 мкг/мышь(125 мкг/кг) ГСН не оказывает видимого токсического действия.Индуктор интерферона позволяет повысить титры интерферона и обладаетшироким спектром прогивовирусногодействия. Применение госсипол-Я -аминоэтил 5 сернокислого натрия формулыПодписноеСССР дф филиал ППППатент ф ; г, Ужгород, ул, Проектная, г стве индуктора ийтерферона. Источники информации;тые во внимание при зксрщтизе/5 Тираж 673 ЦНИИПИ Государственного по делам изобретений и 3035, Москва, Ж, Раув