Способ количественного определения хлорофоса

в 679869 Союз Советских Социалистицеских РеспубликОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯ К детОРСКОМЮ СВИДВтИДЬСтВЮ(22) Заявлено 30.01.76 (21) 2321815/2с присоединением заявки-6 01 М 31 14 осударстоенный коынтет ссср по делам нзооретеннй н отнрытнй(23) ритет Опубликовано 15.08.79. Бюллетень3 Дата опубликования описания 19,08,79 К 543 088.8)(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРОФОС области аналитичебам определения Изобретение относитсякой химии, а именно к сп ченно зы, у актив олин ожени мпе хлорофоса.Известен способ определения хлорофоса, заключающийся в обработке анализируемой пробы раствором о толидина в ацетоне.в присутствии перекиси водорода с последующим образованием оранжево- красного окрашивания 111.Недостатком способа является низкая чувст. вительность 1 10- мг/мл.Наиболее близким к описываемому изобрете. нию по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения хлорофоса, заключающийся в обработке анализируемой пробы холинэстеразой в присутствии ацетилхолина с последующей обработкой полученного раствора гидроксиламином в присутствии ионов Ее и фотометрированием полученного при этом раствора (2).Недостатком способа является низкая чувствительность 1 10- мг/мл и длительность определения 2 ч,Целью изобретения является повышение чувст. льности и сокращение времени определения Поставленная цель достигается описываемымспособом количественного определения хлорофоса, заключающимся в обработке анализируемойпробы холинэстеразой при рН среды 8,0-8,2 вприсутствии раствора 8-метилумбеллиферонаце.тата в этилцеллозольве с последующим измере.нием люминесценции полученного раствора.Отличительным признаком способа являетсяиспользование в качестве субстрата раствора11-метилумбеллиферонацетата в этилцеллоэольвепроведением обработки при рН среды 8,0-8,2и по следующее измерение люминесценции полу. о раствора. орофос, являясь ингибитором холинэстеранетает ее активность, Процент угнетения ности определяется по замедлению нараста юминесцентного свечения гидролизуюшегоминесцентного субстрата 8-метилумбелли. ацетата. Измерение степени угнетения эстеразы производится по скорости разя р-метилумбеллиферонацетата концент. (2-2,5) 10- мг/мл в этилцеллозольве, меряется время, за которое стрелка микрометра люминесцентного прибора достигнет1 О 3значения 100 ед. (тк ) при разложении субстрата Р-метилумбеллиферонацетата холинэстеразой,и такое же время, но при работе холинэстеразыв смеси с хлорофосом вробе (т ), По увеличению топпо сравнению с тк судят о наличии 5хлорофоса в пробе воды,т, и тизмеряют в минутах. Это времяпротекания реакции, которое фиксируют в тотмомент, когда стрелка микроамперметра люминесцентного прибора достигает 100 ед; замерможно проводить на любом друтом участкешкалы. В данном случае интенсивность 100 ед.взята условно (можно взять 50, 70, 90 и т,д.).Эту величину можно взять произвольно, однакоее не следует брать при малой интенсивности 15люминесценции (например, 10 или 15 ед,), таккак при малой интенсивности еще не установился процесс гидролиза./т - это контрольное время, эа котороестрелка микроамперметра люминес.центного прибора достигает 100 условных единиц в холостой пробе,т - это опытное время, за которое стрелопка микроампдрметра люминесцентного приборадостигнет 100 условных 25единиц в присутствии хлорофоса впробе.- отношение времени протекания реак.ции в интервале 100 ед, при опреде.ленин хлорофоса в исследуемой про- З 0бе к контрольному времени, т.е. приопределении в отсутствие хлорофосав исследуемой пробе.П р и м е р 1. В кювету объемом 8 мл с4,9 мл фосфатного буфера (рН 8,15) и 1,9 млводы добавляют 0,39 мл холинэстераэы в фос.фатном буфере, Смесь тщательно перемешиваюти проверяют излучение люминесценции. Затем. прибавляют 0,030 мл раствора 8-метилумбеллиферонацетата в этилцеллозольве, Пробу тщатель 40но перемешивают и вводят в блок фотометрирования люминесцентного прибора, Отмечаетсявремя, эа которое стрелка микроамперметраприбора достигает значения 100 ед тк5 мин.т определяется аналогичным образом. В кювету с 50 мл буферного раствора холинэстеразытой же активности после тщательного перемешивания и 10-минутной инкубации прибавляют0,030 мл раствора р-метилумбеллиферонацетатат, 107,По увеличению т и по сравнению с тсудято наличии хлорофоса в пробе воды. Величинато зависит от концентрации хлорофоса в ана.лизируемой пробе.П р и м е р 2. В ковету объемом 8 мл с5 мл фосфатного буфера (рН 8,2) н 2 мл водыдобавляют 0,4 мл холинэстеразы в фосфатномбуфере, смесь тщательно перемешивают и про.веряют излучение люминесценции. Затем прн.4бавляют 0,035 мл раствора 5 метилумбеллифе.ронацетата в этилцеллоэольве, Пробу тщательноперемешивают, помещают в блок фотометрнро.вания люминесцентного прибора и отмечают вре.мя, за которое стрелка микроамперметра прибо=ра достигает значения 100 ед., т, = 5 мин, топределяется аналогичным образом, В кюветус 2 мл буферного раствора холинэстеразы той:0,035 мл раствора р-метилумбеллиферонацетата;т, =10,8 мин (при концентрации хлорофоса510- мг/мл). По увеличению т по сравнению.с т судят о наличии хлорофоса в пробеводы, Величина тзависит от концентрациихлорофоса в анализируемой пробе,П р и м е р 3. В кювету объемом 8 мл с5,1 мл фосфатного буфера (рН 8,00) и 2,1 мланализируемой воды добавляют 0,41 мл холин.эстеразы в фосфатном буфере, Смесь тщательноперемешивают и проверяют излучение люминесценции. Затем прибавляют 0,036 мл раствора5-метилумбеллиферонацетата в этилцеллозольве.Пробу тщательно перемешивают и помещают в. блок фотометрирования люминесцентного при- .,. бора, Отмечается время, за которое стрелкаемикроамперметра прибора достигает значения100 ед., т, " 4,9 мин, т, и определяется анало., раствора и 2,1 мл анализируемой. пробы водыс хлорофосом добавляют 0,41 мл раствора хо.линэстеразы той же акпвностии после тщательного перемешивания и 10-минутной инкубацииприбавляют 0,036 мл раствора Рметилумбеллиферонацетата; т, =10,9 - 11,0 мин (при концентрации хлорофоса 510-з мг/мл),По увеличению т и по сравнению с тсудято наличии хлорофоса в пробе воды. Величинат, зависит от концентрации хлорофоса в ана.лизируемой пробе.,О количестве хлорофоса в анализируемой про.бе судят по отношениюь В таблице приведены данные по зависимости времени протекания реакции от содержания хлорофоса в анализируемой пробе. Концентрация хло. .рофоса, мгмл,т, .мин тс, мин трт 510- 510- 510-э 9,3 1,87 10,0 2,0 10,8 2,16 Чувствительность определения настоящегоспособа 510- мгмл, что дает возможность оп.ределять предельно допустимую концентрациюхлорофоса. Время определения 15 мин.:Заказ 4780/38 Тираж 1090 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открьпий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород ул. Проектная, 4 Способ количественного определения хлоро.фоса путем обработки анализируемой пробыхолинэстеразой в присутствии субстрата, отли.чающийся тем, что, с целью повышения чувст.вительности определения и сокращения времениопределения, в качестве субстрата используютраствор 11-метнлумбеллиферонацетата в этил 6целлозольве и обработку ведут при рН среды8,0-8,2 с последующим измерением люминесцен.ции полученного раствора.Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе1. Швайкова М Д. Токсикологическая химия.М 1975, с. 273.2. Филов В, А, Определение ядохимикатов вбиологических субстратах. М. - Л., 1964, с, 16.21.