Способ определения силы адгезии клеток

ОП ИСАНИЕ,ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(51) М, Кл. 6-01 Я 19/О присоединением явкиооударственнн)и комитетСовета Министров СССРоо делам изобретенийи открытий(088,8) 2) Авторыизобретения енков, А, Г, Мепикянц и А, М, Мелик аучно-исследов ат испытаниям хим ский институт по биологическимеских соединений(71) Заявитель ЛЫ АДГЕЗИИ КЛЕТО Изобретение относитс и медицины и может бь изу ения адгезии клеток к области б иолог) н ь использовано дгя тканевых системах. ожго опс.хся р о клетоктает Вымерений соб нозткднн в нон теи р-клеток( 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕ Известен спосоо определения силы адгезииклеток путем фиксации клеток с последующимих отрывом под действием центробежной силыи вычисления величины силы адгезии по числуотделившихся клеток ) .Однако известным способом невозможно определить силу адгезии клеток в животной тка- Они.Цель изобретения - определение силы адгезии в животной ткани при миничальной степени повреждения клеток,Эта цель достигается тем, что образец тканификсируют на плоскости, помешают ее в центрооъема с изогонической жидкостью параллельно оси врагцения и приводят во вращательноедвижение одновременно плоскость с образцоми сосуд с изотоническои жидкостью.Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Образец ткани, выделенный изживотного, фиксируют на плоскости и помецают в центр объема с изотонической жидкостью,после чего всю систему одновременно иснсподвижно закрепленный на плоскости образец) приводят во врацательное движение. с Вращение всей системы )иг)и образпд 1 осуществляют с помощью электродвигателя. При эгоч варианты закрепления образца на плоскости могут быть различны в зависимости от его геометрии. Напрчср, цилиндрическим стержнем можно здкрспить тонкую кишку, толстую кишку нлн пищевод.Адгезию оценивают по бсолктно н отно нтельной вели нндч ддгезни.Абсолютная величина ддгезпн чслепго рдв 1на тому усиляо ( Г - "-,. ), при котором етки толко начнают выделятьсятк;ниЙ системы. Относительную величину адгезни мнивдть по числу клеток, выдсляопификсированном усилии: Г= сопя. Числв суспензин можно оценивать, напрнммощью камеры Горяева. Способ обласокой чувствительностью. Ошибка изсоставляет 5 - 5/,. Предлагаемый споволяет производить отрыв клеток оточень мягких условиях, прн чинимальпени повреждения самих клеток,Изобретение поясняется с,)едуюшимерамн.При.ер 1. Опенка величины адгезитонкой кишки крыс.596865 1 2 3 5 6 53 51 52 53 51 50 7 6 5 о 7 5 Таблица 2 Колицество клеток, выделившихся после инкубации ткани,:1 ля опыта берут белых беспородных крыс- самцов весом 120 - 150 г. Вскрывают брюшную полость, выворачивают участок тонкой кишки ллиной 1 см и фиксируют. этот участок на цилинлрическом стержне, погруженном в стаканчик с нзотоническим раствором. Цилиндрический стержень вместе со стаканциком и раствором приводят во врашательное движение в течение определенного времени и затем подсчитывают число клеток, выделившихся в раствор при данном усилии с помошью микроскопа, Клетки начинают выделяться при усилии, равном 0,1 10 4 дин)см. Эта величина почти в 5 раз меньше средней величины сцепленности для паренхиматозных клеток печени крыс. Так как величина сцепленности клеток тонкой кишки неолинакова по высоте кишечных складок, и первыми лолжны выделяться слушиваюшиеся клетки, полученные результаты полностью согласук)тся с имеющимися представлениями о природе сил алгезии.Пример 2. Влияние рН на адгезию клеток 20 тонкой кишки крыс.Образцы тонкой кишки, приготовленные ана логичным образом, подвергают предварительной олноминутной инкубации в изотонической среде с различными рН. Затем произволят отрыв клеток способом, указанным в примере 1, при фиксированном усилии.Результаты проведенного эксперимента сведены в табл. 1.ТаблицаЧисло выделившихся клеток при рН 3 О пти 37,4 В таблицу занесены значения количества 50 клеток, найленных по всей площади камеры Горяева.Ошибка метода не превышает 10%. Полученные результаты показывают, что ЭДТЛ ослабляет адгезию клеток друг с другом. Преллагаемый способ отличается простотой, экономичностью, возможностью быстрого осушествления и болы.;:ой точностью измерения. Онозволяет оценить:млу алгезии клеток в животных тканях: может быть применен в мелицинской практике и в области биологии. Способ может быть также использован при В таблицу занесены количества клеток, подсчитанные по всей плошади камеры Горяева. Полученные данные показывают высокую чувствительность предлагаемого способа к би- огенным факторам. Ошибка метода составляет 5 - 15%.Пример 3. Оценка адгезии клеток тонкой кишки крыс. Лдгезия клеток в тканях в значительной степени зависит от содержания ионов кальция в межклеточной среде, поэтому для испытания способа был поставлен опыт по исследованию влияния хелатного агента этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТЛ) на алгезию клеток тонкой кишки крыс. Известно, что ЭДТЛ связывает двухвалентные ионы, особенно кальций. Сначала промывают и выворачивают участок тонкой кишки крыс, затем делят этот участок на две разные части и помешают первую часть в среду, содержашую ионы кальция, а вторую часть - в среду, солержашую ЭДТЛ. После инкубации в указанных средах образцы тканей фиксируют в заданном положении на плоскости. Для фиксации, образца применяют тонкий цилиндрический стержень, который вставляют внутрь отрезка тонкой кишки. При этом клетки располагаются на его цилиндрической поверхности. Затем цилиндрический стержень вместе с образцом приводят во врашательное движение с заданной скоростью внутри объема с неподвижной жидкостью, при этом с поверхности образца отделяются клетки,Оценку адгезии производят по величине, обратной числу выделившихся в объем клеток, подсчитывая количество клеток в объеме с помошью камеры Горяева.Результаты проведенного эксперимента свелены в табл. 2. оценке вида биологической активности химических соелинений. формула изобретенияСпособ определения силы адгезии клеток путем фиксации клеток с последуюгцим их отрывом под действием центробежной силы и вычисления величины силы адгезии по числу отделившихся клеток, отличающийся тем, что, с целью определения силы адгезии в животной ткани при минимальной степени повреждения клеток, образец ткани фиксируют на плоскости, помешают ее в центр объема с изотонической596865 Составитель С, МалютинаТехред О.Луговая Корректор Н. Тупица Тираж 1112 Подписное Редактор Н. ЛрванцеваЗаказ 1128(42 Ш 1 ИИПИ Государственного коинтета Совета Министров СССР по делам изобретений н открьггнй13035, Москва, Ж.35, Раушская наб., л. 4(5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4жидкостью параллельно оси вращения и приводят во вращение или одновременно вращаютплоскость с образцом и сосуд с изотоническойжидкостью. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1. Ехрог. Са 11 гезеагсй, 1960,19, с. 539 - 548.