Способ получения препарата для лечения угрей

7 всксоюанАрт О П И (:"ЖН И Ъ Союз Советских Социалистических РеспубликГааранратввнныв наантвтСоввта Мнннстров СССРна даава нваврвтвннйн атнрытнй 677. 2-41 р ковано 3413,.77 ФР 221 Бюллетень4(72) Авторизобретени Иностранец льмут Штик(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕ УГРЕЙгию СовЧтте Ьао.ти- фичесИзобретение касается способа полу чения лекарственного препарата.Известен способ получения препарата для лечения угрей путем выращивания культурыСаоцпвЬасевчиттт асде 8 в анаэробных условиях при рН,6,8-7, Т, инактивации, отделения от культураль" ной жидкости и высушивания заморажи- ванием выделенных бактерий (.1Однако препарат полученный Известньм способом, невозможно применять Рег оз,а иньекция его вызывает аллер. С целью обеспечения воэможности применения препаратарег аз по пред" лагаемому способу используют неток сигенную культуру СатцаеЬааСечитп асиент которую смешивают со вспо- могательным материалом.Используют штаммы Бека, Герата иФогеля в соответствии (1-3) : (1-3): (0,5-1,5) В качестве вспбмогателЬно го вещества применяют мочевину.Культура СоъцаеЬос 1 е (.мп асие 5 представляет собой граммположи- . тельные неподвижные палочки, не стойкие к кислоте, вырастающие иногда с односторонними или двусторонними булавооораэными утолщениями, иногда имеются признаки гранулирования. СсицоеЬасМт юг асае о типичноокрашивается по Нейссеру сине-фиолевым раствором (метиленовый синий -кристаллический фиолетовый). Полюсные тельца окрайиваются при этом темнее. 1 ипичным для Сот цйеЬас 1 евфйтттасеев является объединение в группы, где отдельные палочки, длинакоторых в 5-7 . раз превышает ширину,нередко располагаются под углом Ч -образно,Все три штамма Со цпеЬассеффвожасеев существенно различаются поморфологии. В чистых культурах, наря ду с палочкообразными элементами сполярными тельцами, встречается многококковидных элементов. В более старыхкультурах обнаруживается больше зернистых и коккоподобных скоплений ж бактерий, чем палочкообразньи..-,ЕКуртуральное определениеМчцтп дслез выявляется егопичным характером роста и специкой аглютинацией антисывороток.25 В отличие от основных представителей группы Соа(ие дифтерийных бактерий, бактерии схжЕЭ растут на кислотной сыворотке агара или в глицеринсодержащем питательном бульоне с рН 30 ,6,5. Они растворяют желатин и не.растворяют дифтерийцые бактерии. Бактерии скпез образуют каталаэы. В аэробных условиях рост незначителен, оптимальный рост - в ацазробных условиях культивирования.(штамм Фогель медленно раэмцожаетс в строго ацаэробных условиях, штамм Бек размножается быстро, в том числе при менее строгих анаэробцых условиях. Этот штамм растет в кислых средах и при добавке глицерина.Специфический антисерум штамма Бек приводит к агглютицации штаммов Герата и Фогеля, при этом обнаруживается высокий уровень антигецетического родства штаммов Бека и Герата, в то время как антигенетическое родство со штаммом Фогеля выражено слабее. 10 15 Сывороточцая агглютицация со спе цифическим антисерумом по отношению к штамму Бек,Сою)аеЬас 1 етз(ищ асеев составляет 1:256, по отношению к штамму Герат от 1:128 до 1:246, по отношению к штамму Фогель 1:68. 25Соотношение отдельных штаммовв препарате может колебаться в широких 3 чределах. Предпочтительно применять штаммы Бек, Герат и фогель в соотношении (1-3)ю(1-3) г(0,5-1,5), в част- З 0 ;ности 2:2:1. Доза на один курс лечения 5 х 10 микробных клеток. Очень ,хорошие результаты дают дозы 10-20, предпочтительно 15 млрд.микробных клеток.При готовляют штаммы СогцаеЬос 1 ежснп ааоез известными способами путем выращивания Совр 1 еЬас(.ефып оспе и ца питательной среде, например, на жидком мясо-пептоццом бульоне в нейтральяых условиях (РН 710,2)беэ доступа Воздуха, Инактивируют путем нагреваяия, реакции с фенолом ( 0,2) или Формалином ( 0,2-0,4), ацетоном на холоду с вйпадением осадка с последу ющей разбивкой скоплениЯ микробов с помощью ультразвуковой обработки.Полученные ицактивированные бактерии высушивают (после центрифугировация) вымораживанием и вводят в нихне-Еобходимую для повышения персорбции стенками %елудка и кишок гидрофильную добавку, например, мочевнну - для твердых препаратов или сахар и слизистыевещества - для жидких препаратов(эмульсий или сиропов).В качестве вспомогательного материала для высушивация замораживанием можно применять пептон. Предварительно Обработанный пептон содержит поверхно.-. стно-активные амины,а также десенсиби лизнрующее начало, Наличие поверхностно-активных аминов обеспечивает хорошее распределение антигенов лимФатическими Органами кишок. При приеме внутрь они цетокснчцы. 65 Чтобы предотвратить аллергию при приеме лекарства внутрь, в качестве десенсиб лизирующего компонента используют продукты обмена СорцпеЬасьегшю асиЕ 8 обеспечивающие десенсцбилиэацию беэ нарушения иммуниэирующего антигенного эффекта. Такой компонент получают из питательной сре ды культур астрея, предпочтительно используют антигенсодержащую фракцию этой среды.Введение корпускулярных антигенов, т.е. самих бактерий, обеспечивает иммунитет клеточной ткани и предотвращает аллергию при.приеме лекарст" ва внутрь.В качестве добавки предлагаемый препарат содержит мочевицу и поверхностно-активные биогеццые амины, используемые в качестве питательной среды пептоца. При использовании для предварительной обработки пептоца штамма Герата СотцлеЬас 1 еющ асде пОбОчных токсичных прОДуктов не образуется.П р и м е р 1. Получение культуры ОСУЖУ .Питательный раствор, содержащий 2000 мл мясо-пептонного бульона (рН 7,1) и 600 мл буферного раствора Соренсена (рН 7,1) стерилиэют в автоклаве при температуре 120 С. Затем добавляют 60 мл глицерина абсолютной чистоты, Смесь заливают в кол бы Эрленмейера обьемом .300 мл до узкого горлышка, добавляют жидкий парафин абсолютной чистоты, и колбы выдерживают 60 мин.в паровом сосуде при 100 С. Перед охлаждением питательной среды . закупоривают колбы воздухонепроницаемыми пробками, пропитанными горячим пчелиным воском или твердым парафином. Охлажденная доа35 С питательная среда практически свободна от адсорбированного кислорода. Прививку Сот циеЬас 1 еМю осмаев осуществляют через жидкий слой парафина при помощи пипетки Пастера,Прививку производят с запасных пластинок (питательный агар в плоскиМ чашках Фортнера с высотой краев 10 мм и добавкой 2 глицерина, анаэробно инкубированный по Фортнеру) и суспендируют в мясо"пептоином бульоне, Инкубация продолжается 10 суток прио30-32 С. Затем иэ колб берут пробы на проверку чистоты и добавляют 5-ный раствор фенола в соотношении фенол: :среда 1:10.После суточной реакции с фенолом препарат нагревают 2 ч при 60 С, охлаждают и для разбивки скоплений мик" робов в течение 30 с обрабатывают ультразвуком .с начальной мощностью 500 Вт. Для дальнейшего таблетирова-:582744 Формула изобретения. ЦНИИПИ Заказ 3645/713 Тираж 677 Подписное Филиал ППП фПатентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ния подсчитывают количество микробовв счетной камере,Чтобы убедиться в умервщлении всехмикробов, используют ко(трольные культуры. Если последние сохраняютстерильность в течение 10 суток, товсю массу микробов центрифугируют20,мин при 3500 об/мин, Состоящий изГозуюеьас 1 емию астев осадокразбавляют в зависимости от числамикробсв от 1/20 до 1/10,к объему среды культивирования. среду культивирования нместе о сохранившимся пептономиспользуют в качестве йспомогательносреды для сушки вымораживанием, онасодержит понерхностно-активные низкомолекулярные диалиэируемые амины,Не менее 30 мл вышеописаннойсреды иэ каждой колбы иньецируютвну.рибрюшинно трем морским свинкам(для исключения возможности загрязнения аназробными бутулиноными бациллами и ботулиновыми токсинами), такоеже количество среды нводят морскимсвинкам в желудок зондом. Срок наблюдения - 18 суток.Верхними слой культивируемо( сре-ды Сощуре Ьсис 1 ерюи штаммонГерата или Века подают на стерильные.диалиэные мембраны.и помещают в свежеразмороженный холодильник. За неделю,в результате вызываемого охлаждениемиспаренияколичестно среды сокращается до 1/4 первоначального объема -происходит сушка вымораживанием. Об-разуется беловатый рыхлый гигроскопический порошок, который добавляютв высушенные вымораживанием штаммыБека, Герата и Фогеля СоцпеЬлсМЧоеже и смешивают таким образом,чтобы общая концентрация первых двухштаммов (измеренная в сухом состояниине менее чем в 2 раза превышала концентрацию последнего (например "1 (Б),1 (Г), 1 (Ф) или обычно 2 (Б), 2 (Г),1. (ф).П Р и и-е р.: 2 Приготовление таблеток.В сухую массу таблеток вводят Соф 9 пвЬосМюшти . дсйезнезначитель-,ные количесТва культивируемой средывсех трех штаммон, дополнительно диализонанную культивируемую среду штамма Герат и в качествеиммунной добавки - мочевину. После прессования таблетки упаковЫвают по 25 штук во флаконы. Из последних отгоняют воздух иЭаолняют их используемым в качествеинертной среды аргоном.П р и м е р 3, Для испытания лечебных свойств противоугревого препарата лечению подвергли 27-летнюю женаину на лице(Г -ая стадия), безуспешно лечиншуюся в течение 9 лет мазями, ингибиторами онуляции (гормоны) и антибиотиками, В течение 5-ти суток она принимала по 5 таблеток 5 раэ н день.Первый прием утром эа 30 мин до еды.Каждый прием таблеток происходил без осложнений и каких-либо симптомов.Йа 5-ый день и при более поздния,проверках: трансминазы 860 Мр 6 РМ и моча 0,3. На 8-ой, а ещеболее отчетливо на 10-ый день после первого приема отмечается уменьшение покраснения и инфильтрации угревой сыпи. На 21-е сутки установлено отчетливое улучшение с общим отсутстви".ем и реэорпцией сыпи. Проверки через 4 и 15 месяцев установили излечение от угрей.В отличие от инъекции вакцин., применение препарата позволяет одновременно использовать больаие дозы трех различных штаммов СоумеЬас 1 егщ оспез при наилучшей переносимости. Вредной аллергии не возникаетНи каких вспышек массы угрей нет, отсутствует опланление массы угрей. Жараи опухания лимфатических узлов не обнаруживается. Препарат переноситсябез реакции,30 Предлагаемый способ обеспечиваетполучение препарата для леченияугрей, который является более эффективным по сравнению с известными. Способ получения препарата длялечения угрей путем выращивания куль 40 туры СоечтиЬссехиюа остен в аназробных услониях при рН 6,8-7,2, инакгивации, отделения от культуральной жидкости и высушивания замораживанием выделенных бактерий, о т л и ч а- Щ ю щ и й с я тем, что, с целью обеспе+чения возможности применения препарата рео оз , используют нетоксигенную культуру СаоцмеЬоИечоп сслез.которую смешивают со вспомогательным ( материалом. 2. Способ по п.1, о тл и ч а ю щ и й с я теи, что используют штаммы Бека, Герата и Фогеля в соотношении(1-3);(1-3):(0,5-1,5). 3. Способ по и. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве Вспомогательного вещества используют моченнну. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: Флеминг А. в ,1 асеЕ",1909, с. 10351038.