Способ получения свободных пептидов

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИ ВИЛЬСПЗУ Союз Советских Социалистических Республик(51) М. Кл, С 07 С 103/52 с присоединением заявкиГасударственный камнтет Сааатв Мнннатраа СССР па дель нзааратаннй н аткрытнй(45) Дата опубликования описания 11,0576(72) АвтоРы М. И, Титов, В. Н, Калихевнч н Ж, Д. Беспалова изобретения Ленинградский ордена Ленина н. ордена Трудового Красного Знамени Росударственный университет им. А. А, Жданова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СВОБОДНЫХ ПЕПТИДОВ 1Изобретение относятся к способу полу-чення свободных пептидов путем кислотного расшепления метнловых нлн этнловыхэфиров аминокислот н пептидов.Известен способ получения свободныхпептидов взаимодействием метиловых илнэтиловых эфиров карбобензоксн-пептндов сбромистым водородом в уксусной кислоте.Однако известный способ сложен, длнтелен и приводит к получению ннзкомолекулярных пептидов с довольно низким выходом.С целью увеличения выхода целевыхпродуктов, упрощення процесса н расширения сырьевой базы предлагается проводитьреакцию в растворе бромнстого водородас добавлением 4-8 об,% воды,Строение продуктов кислотного расщепления доказано аналитическими данными,методом хроматография (электрофореза) нвстречным синтезом. Все использованныеамннокислоты имеют 1. -конфигурацию.П р н м е р 1, Гнсгнднл-лейцнн.3,7 г метнлового эфира карбобензокси-гнстиднл лейцина растворяют в 25 мл 4 н. 2раствора бромнстого водорода в уксусной кислоте, добавляют 1,5 мл воды, выдерживают два дня прн комнатной темлерагуре, разбавляют эфиром, отфильтровывают осадок, обрабатывают его нонообменной смолой в ОН-форме и получают 2,0 г (83 а) продукта. Найдено, Ъ М 53,3; Н 7,7; й 20,7,ю С, НвоИ 40Вычислено,%: С 53,7; Н 7,5; й 20,9.Амннокнслотный состав: гистндин 0,95(12 лейцин 1,00 (1),П р н м е р 2, Сернл лейцни.1 ф . Из 1,8 г метилового эфира карбобензоксн серил-лейцнна, 18 мл 4 н, раствора бромнстого водорода в уксусной кислоте и1,4 мл воды, как в примере 1, получают0,85 г (92%) продукта.Найдено,%; С 49,3; Н 8,+; Ь 12,5.СдН 1 айа ОаВычислено,Ъ; С 49,5; Н 8,3; И 12,8.Аминокнслотный состав: серин 0,92(1),М лейцнн 1,00 (1).513026 3 Ь404 б5 О,3П р и и е р 3, Гироэил-дейцид-еадидЙ -ацетамидометил-цистеинил глицин.1,7 г метилового эфира карбобензокси-О-бенэил-тироэид-пейцил-валил- б -ацетамидометил-цистеииид-глицина растворяютв 4,7 мл 4 и. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте, добавляют 0,31 млводы, выдерживают два дня при комнатнойтемпературе, разбавляют эфиром, отфильтровывают осадок, растворяют в воде, нейтрализуют 25%ным аммиаком, отфильтровывают осадок, сушат и получают 0,98 г(1), лейцин 1,00 (1), валин 1,01 (1),цистеин 0,80 (1), глицин 0,98 1).П р и м е р 4. Бис-(тирозид-лейцнл-ввлил)-цистинил-бис-глицин,К раствору 5,0 г метидового афирвбис-(карбобенэокси-О-бензил-тироэил-дейцнл-валил)-цистинил-бис-глицина в 40 мл4 н. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте добавляют 2,5 мл воды ипроводят те же операции, что и в примере 3Получают 2,9 г (84%) продукта,Аминокислотный состав; тироэнн 0,95(1), лейцин 1,00 (1), валин 0,97 (1),цистеин 0,91 (1), глицин 1,02 (1),П р и м е р 5. Бис-аспарагинил-глутамнннл-гистиднл-лейцнл)-цистинид-бис-глндин,К раствору 2,5 г бис-карбобензоксивспарагинил-глутаминил-гистидил-лейцил)цистинил-бис-гдицинв диметилового эфирав 8 мл 4 н, раствора бромистого водородав уксусной кислоте добавляют 0,5 мл воды, выдерживают 3 дня при комнатной температуре, разбавляют эфиром, отфильтрсвывают кристаллы, растворяют их в воде,обрабатывают раствор ионообмениой смолой ИРАв ОН-форме, упариввют, отфильтровывают кристаллы, промывают ихэфиром, сушат и получают 1,81 г (90%)продукта,Амннокислотный состав: вспврвгиноваякислота 0,97 (1), глутамнновая кислота1, ОО 1 ), гнстидин 1, 05 (1 ), лейцин 0,99(1) цистнн 0,90 (1), глицин 1,10 (1).П р и м е р 6, А-цепь инсулина человека,К раствору 3,5 г метилового афирвкарбобензокси-О-бензил-тироэид-глутамнннд -дейцнл- Г -трет-бутид-гдутамил-аспарвгинил-тироэил- З -ацетамидометид"цистеинил-вспврагнна в 10 мл 4,9 н, раствора бромистого водорода в уксуснойкислоте добавляют 0,5 мд воды, выдерживают три дня при комнатной температуре, разбавляют афир,м, отфильтров ввют осадок, растворяют его в воде, обрвбатьсвают ионообменной смолой в ОН-форме и получают 2,25 г (90%) тнрозип 5-глутаминил-дейцид-глутвмил-аспарагинндтироэид -вцетамидометид-цистеиннл(77 Б ш 17Вычислено,%: С 53,2; Н 6,4; Й 13,7Аминокислотный состав: вспарагиновая кислота 1,86 2), глутаминовая кислота 2,00 (2), серин 0,9 (1), цистнн 0,93 (1), изолейцин 0,94 (1), лейцин 2,00 (2)тирозин 1,70 (2),Из 1,5 г синтезированного продуктаи 1,0 г гндразида карбобензокси-глицил-,изолейцидвалил- Г -трет-бутил-глутамилгдутаминид-цикло-цистинил-треонид-серинаазидным методом получают защищенныйпептид, который обрабатывают последовательно йодом в диметнлформвмиде и бромистым водородом в трифторуксусной кислоте, подвергают окислительному сульфитолизу, фильтруют через колонку с Сефадексом ДЭАЭ н получают 1,95 г (89%)тетрасульфонатв А-цепи инсулина человека,М 1 -92 о (С=О 1 вода),Амннокислотный состав: вспарвгиноввякислота 1,92 (2), треонин 0,93 (1), серин 1,81 (2), глутвминоввя кислота 4,00(4), глицин 1,00 (1), цистин 1,92 (2),валин 0,96 (1), изолейцин 1,91 (2), лейцин 2,03 (2), тирозин 1,81 (2),Полученный продукт - индивидуальное вещество по данным алектрофореза, при атом его подвижность точно совпадает с55подвижностью тетрасудьфонатв А-цепи, выделенного из природного инсулина. ф ормудв изобретения Способ получения свободных ептидбв взаимодействием метидовых нпи атнпоннх51 ЭО 6 Составитель В. Волкова Редактор Т, Шарганова Техред О. Луговая Корректор А Гу н, Заказ 275/7 Тираж 576 Подписное Ш 1 Ю 1 ь Государственного комитета Совет Министров СССР цо делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская набд, 4/5илиад П 111 1 з 1:нт", г, Ужгород, ул. Гагарин,01 эфиров карбобензокси-пептидов с бромистым водородом в уксусной кислоте, о т -личаюшийся тем,что,сцельюупрощения процесса, увеличения выхода целевого продукта и расщпрепп, сы 1 и л Оибазы реакцию проводят в растворе бр.п 1 стого водорода с добавлением 4-ь об,воды,