Штамм микобактерий мyсовастеriuм снеlоnеi, используемый для аллергологической идентификации микроорганизмов

(5)5 САН К АВТО ветеринароны РСФСР хомирова, ,Г.Воробьеат 1 с Ьастег.,Е.1 оче ег 1 о 1 1980,рия, 1985,МУСОВАС ЬЗУЕМЫЙ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(54) ШТАММ МИКОБАКТЕРИЙТЕКОМ СНЕ ОМЕ 1, ИСПОЛ Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии, представляет собой новый штамм МусоЬастег 1 цв сЬе 1 опе 1, характеризующийся активным ростом на синтетической среде и туберкулиногенностью и может быть использовано для аллергологической идентификации микроорганизмов.Целью изобретения является штамм МусоЬастег 1 цв сЬеопе 1, характеризующийся активным ростом на синтетической среде и туберкулиногенностью.Штамм МусоЬас 1 егцв сЬе 1 опе В 409 выделен из лимфоузла положительно реагирующей на туберкулин коровы в 1986 году. Штамм МусоЬастегцв сЬеопе 1 1 Ф 409 депонирован в коллекции Научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А,Тарасевича под М 38,ДЛЯ АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИ ИМИ КРОО Р ГАН И 3 МО В(57) Использование: медицинская и ветеринарная микробиология, штамм микобактерий МусоЬастег 1 цв сЬе 1 опе 1 туберкулиногенность, аллергологическая идентификация микроорганизмов, Сущность. изобретения; штамм МусоЬастегцв сЬе 1 опе ГИСК М 409, обладающий туберкулиногенностью, выделен из лимфоузлэ коровы, положительно ре-. агировавшей на туберкулин. Накопление в среде туберкулина начинается с четырех-пятинедельного возраста, В одном литре культурального фильтрата содержится 0,820-1,100 г туберкулина (в среднем 0,920 г/л), Биологическая активность составляет 0,0003 мг в 10 ТЕ. 1 табл. Штамм МусоЬастегцв снеопе 1 М 409 характеризуется следующими свойствами,Морфологические свойства. Клетки имеют вид тонких палочек длиной 1,5 - 2,5 мкм. Окрашивается по Граму, по Цилю-Нильсену окрашивается в красный цвет.Кул ьтурал ьн ые свойства. На плотной яичной среде Левенштейна-Йенсена образует мелкие влажные блестящие колонии белого цвета. На среде Левенштейна-Йенсена при температуре 37 вырастает за 15 - 17 дней, Размножается при температуре 22 - 450 С; не растет при температуре 50 С. Оптимум роста отмечен при температуре 30 - 40 С, На жидких питательных средах растет на поверхности в виде тонкой влажной складчатой пленки, оставляя среду прозрачной. Через 4-6 недель роста среда окрашивается в светло-коричневый цвет, оставаясь прозрачной.Физиологические свойства, Растет наплотной питательной среде ЛевенштейнаЙенсена с добавлением 1 мг/мл салицинатанатрия, не растет при добавлении в среду5%-ного хлористого натрияне обладает 5ферментами: уреазой, /3 -галактозидазой,нитратредуктазой, не образует ниацина,Обладает активными пиразинамидазой, никотинамидазой, не гидролизует Твинза10 дней, 10Состав жирных кислот, определенныйметодом. сопиролитической газовой хроматографии, соответствует видовому составу.Штамм МусоЬастег 1 оп снеопе ч." 409агглютинируется кроличьей антисыворот- "5кой к серотипу 2 М.сЬе 1 опе 1, не агглютинируется антисыворотками к серотипами 1 и 3,что дает основание отнести его к серотопу 2М.снеопе 1,После заражения двух морских свинок 20бактериальной массой в количестве 1.0 - 1,5мг у одного животного в печени обнаруженыдва мелких туберкулезных очага, в селезенке незначительно увеличена.Туберкулиногенные свойства. В процессе роста штамма М,сйе 1 опе 1 М 409 нажидкой среде, начиная с четырех-пятинедельного возраста, происходит накоплениев среде туберкулина,сенситина); Максимальноее количество туберкулина в среде образуется через Б - 8 недель роста. Выходсухой бактериальной массы составляет 0,8 -1,0 г на 1 л среды. Туберкулин (сенситин);полученный из культурального фильтратаметодом осаждения трихлоруксуной кислотой с последующей очисткой ацетоном, этиловым спиртом и эфиром, представляетсобой порошок светло-серого цвета, в состав которого входят белок (75,0 - 82,0 ъ ) илипополисахариды. В 1 л культурального 40фильтрата содержится от 0,82 до 1,12 г туберкулина (в среднем 0,98 г/л).Биологическая активность сенситинаизучена на гомологично сенсибилизированных морских свинках и составляет 0,0003 мг 45е 10 ТЕ,Изобретение иллюстрируется примерами,П р и м е р 1. Получение туберкулина. Штамм МусоЬас 1 ег 1 от снеопе 1 М 409 засевают на жидкую питательную среду Линниковой-Могилевского (3 серии по 20 колб с 500 мл среды), выращивают в термостате при 37 С в течение 6-8 недель, Затем колбы с культурой стерилизуют в автоклаве при 120 в течение 30 минут, Бактерийную массу отфильтровывают, высушивают, взвешивают. Туберкулин осаждают трихлоруксусной кислотой с последующей очисткой ацетоном, этиловым спиртом и эфиром, Полученный туберкулин представляет собой порошок светло-серого цвета. Химический состав характеризуется содержанием белка в количестве 75,0-82,0% и полисахаридов - 10,0-12,0 о , Выход туберкулина в трех сериях составляет 0,900,.0,950 и 1,120 г на 1 л среды соответственно.П р и м е р 2, Определение биологической активности,24 светлокожих беспородных морских свинок весом 300-350 г сенсибилизируют внутрикожным введением 5,0 мг бактериальной массы, убитой фенолом, в неполном адъюеанте Фрейнда. Через месяц после сенсибилизации морским свинкам внутрикожно вводят исследуемый туберкулин в дозе 0,000075, 0,00015 и 0,0003 мг в 0,1 мл растворителя для туберкулина млекопитающих.Биологическая активность сенситина из штамма МсоЬастегоа сПе 1 опе М 409 дана в таблице.Одновременно 16 морским свинкам вводят полный адъюеант фрейнда, содержащий 5,0 мг микобактерий штамма БЦЖ, убитого фенолом, Через месяц на них ставят кожные пробы со стандартным туберкулином из ГИСК им. Л.А.Тарасевича в дозах 2 ТЕ, 5 ТЕ и 10 ТЕ. Биологическую активность выявляют методом гетерологичных аналогий при сравнении известного с новым гетерологичным, Биологическая активность туберкулина из штамма М. снеопе 1 М 409 составляет 0,000035 мг в 1 ТЕ,Формула изобретения Штамм микобактерий МусоЬастег 1 ов сЬе 1 опе ГИСК Ф 409, используемый для аллергологической идентификации микроорганизмов,1835427 Продолжение таблицы каз 2977 ф Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытия 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 ГКНТ СССР роизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина. Составитель А. Лазовскаяедактор Т. Куркова Техред М.Моргентал Корректор Н. Ревск