Штамм дрожжей dеваryомyсеs glовоsus продуцент липидов на этанолсодержащей среде

(71) Институт микробиологии АН БСС и Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ(56) Авторское свидетельство СССР 9 1440039, кл. С 12 Р 7/64, 1987.Капело Н., ПоясЬагаМ., Т 1 гоп Т Ирой сотрояхГ 1 оп оЕ с 1.ея ой уеаягя, 1 лрЫя, . 1 Ф 12, р. 837-874(54) ИТАММ ДРОЖЖЕЙВОЯПБ - ПРОДУЦЕНТСОДЕРЖАЩЕЙ СРЕДЕ омановец,И.П.Стратейазанцев апа 1 са М30 яре-1, 1976,ПЕВАНУОЖКСЕБ ЖОЛИПЩОВ НА ЭТАНОЛобретен и кас ие от ится к ого шт иотех логижей тся но дрож- липионстит этан е лиутивного олсодерж пиды и жиних, ичных от продуцещих сныеут быаслях ов кробредах. Ми кислоты вы ть использонародного стительного ные из в разл ны хозяиства взамен жиров раи животного происхождения.Цель изобретения - получение штамма дрожжей ПеЬагуошусез я 1 оЬозця ВКПМ У(БКЯЭ), способного при активном росте на среде с этанолом в качестве единственного источни,ка углерода к конститутивному синтезу лириКов. раза в год арактерисс КуКультуологич альн о-моркие признак и. е, глюкозоптонном агаа сусло-а аре и мяс Колониипептонном ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИАВТОРСКОМУ СВИ(57) Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма дрожжей - конститутивного продуцента липидов на этанолсодеражащих средах. Микробные липиды и жирные кислоты, выделенные из них, могут быть использованыв различных отраслях народного хозяйства взамен жиров растительного и животного происхождения. Целью изобретения является получение штамма дрожжей ПеЬагуощусея я 1 оЬояця ВКЕ 1 У(БИМДЭ), способного при активномросте на среде с этанолом в качестве 1единственного источника углерода кконститутивному синтезу липидов. Привыращивайии на синтетической среде сэтанолом в периодическом режиме сподпиткой штамм накапливает до32,7 г/л биомассы с содержанием вней 32,5 Е липидов,Предлагаемый штамм получен путеммногократного пассирования исходнагштамма ОеЬагуошусея я 1 оЬояця Днэтанолсодержащей среде следующегосостава, г/л: ИН 4 НР 04. 10," ИаНР 04 "Х 7 НО 0,7; 1"18304 7 НО 0,7; КНРО 46этанол 1,0 Х (объемный).Ытамм хранят при +3-4 ОС на косякасуслоагаром. Пересевы 2Штамм имеет следующую хПр и м е р 1. Итамм выращиваютв колбах Зрленмейера на 500 мл со100 мл среды на качалке (200 об/мин)при 28-30 С в течение 3 сут на средеследующего состав, г/л: ИНдНРО,1 10; 55 ре крупные, серо-белые, поверхность гладкая, край волнистый, пастообразной консистенции, 1 трих на суслоагаре серо-белый до кремового, имеет гладкую, ровную с блеском поверхность, кромка сплошная или имеет ломаный контур.На жидкой глюкозопептонной среде образование пленки не наблюдается, после продолжительного инкубирования (свыше 10 сут) образует незавершенное кольцо и осадок. Изменения среды (запах, окрашивание) не наблюдается.В трехсуточнойкультуре на глюкозопептонной среде клетки шаровидные или округлые размером З-б х 3-6,5 мкм, располагаются по одиночке, в парах или небольшими группами, могут присутствовать клетки, имеющие выпячивание, Почкование многостороннее, Псевдомицелия не образуют, Образование аскоспор: аскообразованию предшествует коньюгация отдельных клеток или почки и материнскои клетки, которая превращается в аск. Аскоспоры неровные, сфероидальные с бугристыми стенками, содержат липидные глобулы; аски обычно содержат одну-две аскоспоры.30Фи зиол о г о - биохимические признаки,Отношение кисточникам углерода:ассимилирует глюкозу, ксилозу, маннозу, трегалозу, йруктозу, сахарозу,рафииозу, этанол, глицерин; не ассимилирует галактозу, мальтозу, мелибиозу, крахмал; сбраживает глюкозу,маннозу, фркутозу, сахарозу, рафинозу (на 1/3), этанол; не сбраживаетгалактозу, мальтозу, мелибиозу,Якрахмал.Отношение к источникам азота: усваивает аммонийный и органическийазот, не усваивает нитратный азот.Отношение к фактораМ роста: штаммрастет на безвитаминных средах.Оптимальная температура роста 28 ЗООС; максимальная температура роста35-40 С,. Оптимальный рН - 5,0-5,5; рост 50в пределах рН от 3 до 8,факультативный анаэроб,Штамм непатогенен. Иа НРО 7 Н О 0,7; МрЯОд 7 Н О 0,7 КНРО, 6,8; этанол 1,0% (объемный); начальный рП 5,0. Биомассу дрожжей отделяют центрийугированием, промывают водой, высушивают лиойильно,Концентрация биомассы достигает 7,9 г/л при содержании в ней липидов 32,9%, что составляет 2,6 г/л. Содержание липидов в биомассе в экспоненциальную йазу роста 32,6-33,6%. Удельная скорость синтеза безлипидной биомассы и удельная скорость синтеза липидов достигают максимума одновременно и составляют 0,09 и 0,04 ч соответственно, т,е, синтез липидов штаммом проходит параллельно росту.П р и м е р 2. Культивирование штамма в периодическом режиме с подпитками проводят в лабораторном ферментере АНКУММ с рабочим объемом 5 л, Процесс ферментации осуществляют периодическим способом с дозированным внесением питательной среды следующего состава, г/л: КС 1 129 МяЯОд 7 НО 7,7; ГеЯО 17 НО 0,8; ЕпЯО 4 7 Н 20 0,5 МпЯО 5 НО 0,4," Н ЯО 36,4; этанола 29,6 обХ. При этом в качестве исходной питательной среды используют смесь указанного состава, которую предварительно разводят водопроводной водой до содержания этанола 0,2-0,3 М.При культивировании дрожжей йоновую концентрацию этанола, составляющую 0,2-0,3%, поддерживают дозированным внесением питательной смеси. Сигналом для подачи подпиток в ферментЕр служит самопроизвольное увеличение концентрации растворенного кислорода и самопроизвольное увеличение рН среды. Условия культивирования: температура 28 С, аэрация 1,3- 1,5 л/л мин, скорость вращения мешалки 400 об/мин, рН 5,0. Поддержание рН проводят путем автоматической подтитровки 10%-ным раствором БНАМОН, Продолжительность культивирования 48 ч, Концентрация дрожжей достигает 32,7 г/л, при содержании липидов 32,5%, что составляет,10,6 г/л, Содержание липидов в биомассе в экспоненциальную йазу роста 32,4-33,07,. Удельная скорость синтеза безлипидной биомассы и удельная скорость синтеза липидов достигают максимума од- - .1 новременно и составляют 0,12 и 0,06 ч соответственно, т,е, синтез липидов штаммомпроходит параллельно росту, Штамм обладает постоянством жирно- кислотного и йракционного составалипиФормула изобретения Составитель Л. МинееваТехред Л.Сердюкова Корректор Л. Пилипенко Редактор И. Келемеш Заказ 524 Тираж 360 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб;, д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 5 163 дов во все фазы роста. Экстрагирован ные известным способом липиды имеют следующий фракционный состав, Е: моноглицериды + фосфолипиды 2,4.; диглицериды 1,6; стерины 6,1; спирты + + диглицериды 1,7; свободные жирные кислоты 9,2; триглицериды 63,6; эфиры стеринов + воска 15,1. Жирно- кислотный состав, 7.: С.о 12,3;1 Гщ и следц С 1сумма ненасьпценных кислот 87,7.П р и м е р 3. Культивирование штамма в непрерывном режиме проводят в лабораторном ферментере АНКУМИ с рабочим объемом 5 л. Процесс ферментации осуществляют при подаче питательной среды следующего состава, г: КС 1 3,2 г; М 8 Я 047 Н 40 1,9 г; РеЯО 47 НО 0,2 мг; ЕпЯ 047 Н О 0,1 мг; МпЯ 045 Н О 0,4 мг; НЯО 4 2,0 мл; НРО 4 2,3 мл; этанол 2,9 об,Х; дис- . тиллированная вода до 1 л.фоновая концентрация этанола в аппарате составляет 0,2-0,3 Х. Скорость протока 0,06 ч, стабилизацию рН осуществляют 107.-ным раствором 3 10856ИЙ 40 Н, температура культивирования28 ОС, Содержание липидов в биомассесоставляет 32,87Таким образом, предлагаемый штаммдрожжей имеет следующие преимущества по сравнению с известным: способен к активному росту на средах сэтанолом в качестве единственногоисточника углерода; накапливает повьппенное содержание липидов в биомассе; является конститутивньж продуцеп -том липидов, т.е. синтезирует липндыпараллельно с ростом, что позволяетисцользовать его для получения микробных липидов в условиях непрерывногокультивирования; обладает постоянством жирно-кислотного и фракционногосостава во все фазы роста, что позво- Ю ляет получать продукт стандартногосостава. 25 Ытамм дрожжей ПеЬагуошусез ц 1 оЬо-, зиз ВКПИ У- продуцент липидов на этанолсодержащей среде,