Способ подготовки парафиновых срезов для гистологического выявления клеток крови и соединительной ткани

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 180740 й 33 Е ИЗОБ ИС И К АВТОРСКО ИДЕТЕЛЬСТ едиявский стологии едицина,щих соотн сителя,10-2575-90держит 0,05 и 0,05 - 0,1 Мтых в соотноями предлагаещих являются.ртного краситеиготовления ра-. етатного буфеей смеси; ОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР)(71) Кемеровский государствецинский институт(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПАРАФИНОВЫХ СРЕЗОВ ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ВЫЯВЛЕНИЯ КЛЕТОК КРОВИ И СОЕДИНИТЕЛЬЬ НОЙ ТКАН И(57) Использование: в области медицины, в частности в гистологической технике. Сущность изобретения: проводят депарафинирование .исследуемого материала, проведение по батарее спиртов от 100 до 70 и затем в воде, окраску смесью основного и кислого красителей, дифференцировку Изобретение относится к области медицины, в частности к гистологической технике и может быть использовано при проведении научных морфологических исследований; а также в патологоанатомической практике. Кроме того оно может быть использовано в ветеринарии для этих же целей,Цель изобретения - повышение экономичности (обеспечение надежности и воспроизводимости результатов, повышение устойчивости рабочего раствора красителя и многократного его использования) и ускорение способа,Поставленная цель достигается тем, что окраску срезов проводят смесью стандартного раствора красителя Мая-Грюнвальда и 2в 96 О-ном спирте до появления красной окраски эритроцитов с последующим обезвоживанием, просветлением и заключением в бальзам или полистирол, при этом окраску проводят в смеси стандартного раствора красителя-фиксатора Мая-Грюнвальда и ацетатного буфера при следующих соотношениях компонентов, об.: стандартный раствор красителя-фиксатора Мая-Грюнвальда 10-25; буферная смесь, состоящая из 0,05-0,1 М растворов ацетата натрия и уксусной кислоты, в объемных соотношениях 10.1-30:1 75-90, Способ позволяет выявлять в парафиновых срезах различные типы грэнупоцитов тнейтрофипьных, псввдоэоэинофипьных, гетерофипьных, эоэинофипь. о ных) и эритроцитов не всех стадиях " созревания, все клеточные элементы соеди нительной ткани. Способ позволяет много-;,; кратно испольэовать красящую смесь." Время окраски сокращается до 0,5-1,5 ч: ф вместо 12-24 ч в прототипе, 1 табл. ацетатного буфера при следушениях компонентов, об.(,:,Стандартный раствор краМая-ГрюнвальдаАцетатный буферпри этом ацетатный буфер со0,1 М раствор ацетата натрияраствор уксусной кислоты, взяшении 10:1-30:1. Существенными отли мого способа от существу а)использованиестан ляМая-Грюнвальда для и бочего раствора красител б) использование ац для приготовления красящв) объемные соотношения стандартногокрасителя и ацетатного буфера, используемых дпя приготовления рабочего растворакрасителя;г) объемные соотношения ацетата натрия и уксусной кислоты в буферной смеси.Ни стандартный краситель Мая-Грюнвальда, ни ацетатный буфер в предлагаемыхсоотношениях никогда и никем не применялись для выявления клеток крови и соедини- "0тельной ткани в парафиновых срезах,поэтому предлагаемый способ обладает новизной,Сущность предлагаемого способа отражена в схеме гистологической отработки,1). Депарафинирование и проведениепо батарее спиртов от 100 С до 70 проводится точно так же, как в известном способе.2. Дистиллированная вода не менее 2 20минут,3). Окраска рабочим раствором красителя от 30 мин до 1,5 ч в термостате притемпературе 45 - 55 С,4), Дифференцировка в 96 спирте от 2 25до 5 мин,Б), Обезвоживание в ацетоне 1,5 - 2 мин.6). Просветление в двух порциях ксилола 3 - 5 мин в каждой,7). Заключение в полистироя, 30Составы различных вариантов рабочихрастворов красителей приведены в таблице,Для работы пригоден любой вариант,Проведенные испытания на парафиновых срезах красного костного мозга кролика 35показали, что очень четко выявляются псевдоэозинофильные и эозинофильные гранулоциты на различных стадиях созревания,лимфоциты, плазматические клетки, фибробласты, макрофаги, зндотелиальные клетки, гладкомышечные и жировые клетки,базофильные, полихроматофипьные и оксифильные нормоциты (нормобпасты), Коллагеновые волокна и эритроцитыокрашивались в розовый цвет, 45Проведенными испытаниями было установлено, что красящие свойства рабочихкрасителей М 2 и М 4 с различной молярнойконцентрацией ацетатного буфера (0,1 М и0,05 М) одинаковы, поэтому они одинаково 50пригодны. Изменение соотношения ацетатанатрия и уксусной кислоты от 30:1 до 10:1(М 2, 5, 6 и 7, 8, 9),не приводило к существенным изменениям качества окраски препаратов, значит все эти варианты применимы, 55Испытания рабочих растворов красителейМ 1, 2, 3 с различной концентрацией красителя Мая-Грюнвальда показали, что качество окраски одинаково, однако оптимальное время окраски отличается: оно короче у раствора М 3 и продолжительнее у раствора В 1, однако, как правило, у всех трех растворов колеблется в пределах 0,5 - 1,5 ч, что гораздо меньшечем в известном способе (12 - 24 ч).По сравнению с прототипом, заявляемый способ имеет следующие преимущества; обеспечение надежности и воспроизводимости результатов, повышение устойчивости рабочего раствора красителя и многократного его использования и ускорение процесса окраски, Использование рабочего красителя, содержащего водно-метан опьную смесь с наличием ацетатного буфера обеспечивает резкое повышение устойчивости рабочего раствора красителя после приготовления, обеспечивающее возможность его многократного использования в течение 2-4 недель, В прототипе краситель используется лишь однократно, причем нередко хлопьевидный осадок образуется в момент его приготовления, что требует повторного его приготовления. В отличие от "капризного" по мнению гистологов прототипа, предлагаемый способ надежный, дает воспроизводимые результаты и не требует чрезвычайно чистой посуды иэ стекла особого качества. Время окраски в предлагаемом способе в 8-24 раза меньше по сравнению с прототипом.формула изобретения Способ подготовки парафиновых срезов для гистологического выявления клеток крови и соединительной ткани, включающий его депарафинирование, проведение по батарее спиртов от 100 С до 70 С и затем в воде, окраску смесью растворов основного и кислого красителей, дифференцировкуов 96 спирте до появления красной окраски эритроцитов с последующим обезвоживанием, просветлением и заключением в бальзам или полистирол, отл ич а ю щи й ся тем, что, с целью повышения экономичности и ускорения способа, окраску среза проводят смесью стандартного раствора красителя Мая-Грюнвальда и ацетатного буфера при следующем соотношении компонентов, об,: Стандартный растворкрасителя Мая-Грюнвальда 10-25 Ацетатный буфер 75-90 при этом ацетатный буфер содержит 0,05- 0,1 М раствор ацетата натрия и 0,05-0,1 М раствор уксусной кислоты, взятых в.соотношении 10:1-30:1.1807400 Компоненты Стандартный раствор краси- теля-фиксатора Мая-Грюнваль- а 0 0 20 25 2 Смесь 0,1 М растворов ацетата натрия и уксусной к-ты в обьемных соотношениях20:1 8 Смесь 0,05 М растворов ацетата натрия и уксусной к-ты в объемных соотношениях20:1 8 Смесь 0,1 М растворов ац тата натрия уксусной к-т в объемных с отношениях30:1 Смесь 0,1 М растворов ацетата натрия и уксусной к-ты в объемных соотношениях10:1 Составитель А.МихееТехред М.Моргентал Корректор О,Кравцов едактор С,Кулако Заказ 1376 Тираж Подпис ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и отк 113035, Москва, Ж. Раушская наб., 4/5иям при ГКНТ СССР Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101