Способ определения гистамина в пищевых продуктах

)5 6 21 64 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ПАТЕНТУ дем емия г-Непз, М,сап)пе Ьу огезсепсе 987, %59, СТАМИН ромышленль качества тной и контрольной 0,3 мл 6 н. раствора том в контрольной ительно разрушают мл 0,01 М раствора- 12 мин, а конценделяют по формуле водят паралл пробах доба соляной кис пробе гистам путем инкуб йода в воде трацию гиста ельно в оп лением по оты, при ин предва ации с 02 в течение 8 мина опре=(у где х - концентраци у - величина и ции контрольно а - значение та ровочного графи Способ осущест ом,Приготовление нализируемого я гистамина,нтенсивности ф1 пробы,нгенса угла накка.вляется следую луорес; она би ст экстрактматериал ст ас мина, 2 рают в ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(71) Латвийская медицинская ака(73) Латвийская медицинская ака(егчатУе зупсЬгопоцз Лцзрестготетгу, - А.па, Восеет, 1р.769 - 773,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИВ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ57) Использование: пищевая иность, гигиена питания, контро Изобретение относится к области гигиены питания, касается вопроса контроля продуктов, в частности содержания в них биологически активных веществ.Известен способ определения гистамина в пищевых продуктах, основанный на флуоресцентном измерении продукта конденсации амина с флуорогеном (О-фталевым альдегидом), флуоресценцию регистрируют с использованием синхронных спектров и их производных, что требует дополнительного времени 15 - 20 минут на каждый анализ,Цель изобретения - повышение чувствительности способа, сокращение времени исследований.Поставленная цель достигается тем, чтороводят экстракцию гистамина этанолом, абилизацию флуороформа гистамина пропродуктов. Сущность изобретения: анализируемый материал экстрагируют этанолом. Проводят стабилизацию флуорофора гистамина добавлением к экстракту 0,3 мл 6 н, НС параллельно в опытной и контрольной пробах. В контрольной пробе гистамин предварительно разрушают путем инкубации с 0,2 мл 0,01 М раствора йода в воде в течение 8 - 12 мин. Проводят концентрацию с О-фталевым альдегидом, Концентрацию гистамина Х определяют по формуле Х = /у - Ь/; а, где у - величина интенсивности флуоресценции опытной пробы при 1= 440 нм, Ь - величина интенсивности флуоресценции контрольной пробы, а - значение тангенса угла наклона калибровочного графика. 1 табл, 1 пр.1790756 55 фарфоровой ступке со стеклянным порошком, постепенно добавляя 20 мл этанола. Гомогенат переносят в пробирку емкостью 50 - 70 мл с притертым шлифом. Экстракцию гистамина проводят в водяной бане при 60 С в течение 15 мин, Затем пробирку охлаждают до комнатной температуры, гомогенат фильтруют через бумажный фильтр. 1 мл фильтрата (экстракт гистамина)переносят в мерную колбу на 100 мл и этанолом доводят объеМ до метки,Для определения гистамина из колбы отбирают в две пробирки по 1 мл раствора, В одну пробирку (холостая проба) добавляют 0,2 мл 0,01 М раствора йода, а в другую (опытная проба) - 0,2 мл бидистиллированной воды и хорошо смешивают, Через 8 мин в обе пробирки вносят, каждый раз хорошо перемешивая, 0,3 мл КаОН и 0,35 мл 2 -ного раствора ОФА и через 5 мин 0,3 мл 6 н,НС 1.Флуоресценцию флуорофора гистамина измеряют при длине волны возбуждения 360 нм и испускания 440 нм.,При расчетах содержания гистамина используется градуировочный график, который отражает интенсивность флуоресценции (ф) продукта конденсации стандарта гистамина с О-фталевым альдегидом в зависимости от концентрации амина в образце.Градуировочный график описывается уравнением регресиих = (у- Ь): а,где х - концентрация гистамина; Формула изобретения Способ определения гистамина в пищевых продуктах, включающий экстракцию анализируемого материала спиртом, конденсацию его с О-фталевым альдегидом в щелочной среде, стабилизацию полученного флуорофора гистамина кислотой, разбавление спиртом до концентрации гистамина, соответствующей диапазону стандартных концентраций его на калибровочном графике, измерение интенсивности флуоресценции, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, для экстракции вбсачестве спирта используют у - величина интенсивности флуоресценции опытной пробы;а - значение тангенса угла наклона;Ь - интенсивность флуоресценции образца при х = 0 (контрольной пробы);Данное уравнение позволяет по величине интенсивности флуоресценции образцарассчитать в нем содержание гистамина,П р и м е р. Интенсивность флуоресцен- "0 ции опытной пробы (1 ф ОП) - 104,7 относит.единтенсивность флуоресценции холостой пробы - (ф ХП) 45,1 отн.ед. ф ОП - 1 ф ХП = 104,7 - 45,1 =15 = 59,6 (отн.ед.). Содержание гистамина в пробе рассчитывают по уравнению регрессии конкретно 20 х =(у - 9,5); 825,3 х -2 - 0,0607 (мкг/мл), 59,6 - 9,5 С учетом коэффициента разведенияобразца 1000 содержание гистамина в анализируемом материале составляет 6,07 мг/100 г.Положительный эффект заключается в 30 повышении чувствительности способа в1,5 - 1,6 раз и сокращении времени исследований на 1/3 (80 - 90 и 50 - 60 мин соответственно),В таблице приведены характеристики 35 флуоресцентного метода определения гистамина в пищевых продуктах. этанол, стабилизацию флуорофора гистами на проводят параллельно в опытной и контрольной пробах путем добавления по 0,3 мл 6 н, НС 1, при этом в контрольной пробе гистамин предварительно разрушают путем инкубации с 0,2 мл 0,01 М раствора 45 йода в воде в течение 8 - 12 мин, а концентрацию гистамина определяют по формуле х =(у- Ь): а, где х - концентрация гистамина; у - величина интенсивности флуоресценции опытной пробы приЛ= 440 нм; Ь - величина 50 интенсивности флуоресценции контрольной пробы; г - значение тангенса угла наклона калибровочного графика.1790756 10 15 20 25 30 35 Составитель О,КомароваТехред М,Моргентал Корректор Е.Папп Редактор Т.Иванова Заказ 374 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101