Способ определения дегрануляции тучных клеток

(54) СПОСОБ ОПРЕ ЦИИ ТУЧНЫХ КЛЕ (57) Изобретение оименно к лаборато и и мели- ых ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ.ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ИСАНИЕ ИЗОБ ВТОРСКОУУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ.41государственный медим, Н,И,Пирогова И.Зеличенко и Л,М.Хи. - Иммунология, 1980,ДЕЛЕНИЯ ДЕГРАНУЛЯОКносится к медицине, а ным гистохимическим Изобретение относится к биологи медицине, в частности к лабораторным тодам количественного определения ве чины секреторной активности тучн клеток.Цель изобретения - повышение точности измерения секреторной активности тучных клеток,Способ осуществляют следующим образом. На изолированные участки брыжейки крысы воздействуют факторами, либерирующими гистами из тучных клеток (температурный фактор, 17 О-ный раствор декстрана), затем их окрашивают спиртовым раствором нейтрального красного и фотоэлектроколориметрически при длине волны А =490 нм определяют коэффициент пропускания лучей данной длины волны ( Л) брыжейкой, Одновременно подсчитывают среднее число тучных клеток в поле зрения и по величне козффиента регнессии КР (тангенсу угла наклона прямой т=(п) к отрицательной оси и определяют величину секреторной активности тучных клеток брыжейки. Выбор дли.Ы 2 1774219 2методам. Целью является повышение точности способа, Цель достигается тем, что исследование проводят на брыжейке, Фотоколориметрически определяют угол пропускания брыжейки, а дегрануляцию рассчитывают по углу отклонения зависимости коэффициента пропускания от среднего числа тучных клеток на препарате. И при угле отклонения менее 40 определяют активную дегрануляцию клеток, а при угле 40 - ее отсутствие, Способ позволяет определять дегрануляционную способность химических агентов при изыскании фармаколагически активных веществ. ны волны А=490 нм объясняется следук 1 щим образом. Красный цвет обладает способностью максимально пропускать (или отражать, если предмет непрозрачный) лучи. красной части спектра. а поглощать - лучи синей части спектра. При пропускании лучей синей части спектра создается наибольшая зависимость поглощения синих лучей от интенсивности окраски предмета в красный цвет. Экспериментально установленная авторами длина волны таких лучей 1=490 нь. Лучи с 1=490 нм наиболее сильно поглощаются использованным нами красителем (нейтральным красным). П р и м е р . Выделяют бессосудистые участки брыжейки. Затем их фиксируют между двумя пластмассовыми кольцами, внутренний диаметр (просвет), которых на 1-2 мм больше диаметра луча прибора ФЭК, а внешний соответствовал размеру каретки для кюветы прибора ФЭК, Края брыжейки вместе с петлями кишечника обрезают ножницами. По мере приготовления препарагы17742 19 помещают в раствор Хенкса на феноловом красном с рН=7,2-7,4,Исследуют фоновую секреторную активность тучных клеток при комнатной температуре, которая возможна в течение первых 5-10 мин после выделения брыжейкии из б рюш ной полости (фоновая секреция), Через 5-10 мин препараты окрашивают 1 - ным спиртовым раствором нейтрального красного в течение 1 мин, Далее препараты промывают 5-10 с дистиллированной водой до прозрачной промывной воды. Избыток жидкости удаляют с препаратавстряхиванием. Затем препарат помещают в прибор ФЭК марки КФКМП и э течение 510-15 с,определяют средний коэффициент пропускания при длине волны Л =490 нм относительно воздуха. Микроскопию и подсчет тучных клеток проводят в 4-5 полях зрения, среднее содержание клеток в одном поле зрения определяют, используя окуляр 7 и объектив 20.Результаты,Фоновая секреторная активность тучных клеток,19 19 2 т 52 57 54К 5 З 5 8= - 40,5,леток имее яция тучнь егр(К== ьтаты опытов по определереторной активности тучжейки свидетельствуют о клона графика т =-1(п) для х клеток соответствовал и м е р 2. Брыжеику и 37 С в растворе Хе исследования анал ому в примере 1. ультаты. ермостатироса 5 и 10 мин. ичен методу,ыв нию фо ных кл том, чтоинтактнь учных клеток С 5-минутное створе ХенкСекреторная актив при воздействии на ни термостатирование (37 са ость1=37С) в и 17 19 19 20 21 656 56 49 51 15-минут створе Х Р= 0,495:а = - 26,3К= - 0,793 е термостатирование (3кса 13 Р=О,435 1 а = - 23,5, К=-О,894 13 17 18 26 2 5 48 41 4 9 36 3 КР=0,479; / а =- -25,6КК=-0,770.Вывод, Термостатиро брыжейки при 37 С приво секреции тучных клеток, о вует уменьшение угла т=Цп) по сра ветствующим личение врем 15 мин не вли Получен н ют о том, чтонению с фоновой ени термо яет на ве е резуль редлагае лона, соотляции. Увеанияс 5 до креции,детельствуд количестом на деграну статиро ичину с таты сви мый мет вание препаратов дит к спонтанной чем свидетельстаклонэ графика 0,854; а0,770.од, Резуловой секток брыугол нах тучнь 40,5, дместо.П рвали прМетодописанРез1774219 Составитель Л,СтебаеваТехред М,Моргентал Корректор Н,Слободяник Редактор Заказ 3922 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 венной оценки секреторной активности тучных клеток повышает точность этой оценки, поскольку частично секреция гистамина тучными клетками происходит без морфологических изменений в клетках, определяемых визуально. Секреция гистамина может повлечь за собой лишь частичное обеднение клеток гранулярным материалом, что ведет к уменьшению содержания в них красителя. Предложенный авторами метод определения угла наклона графика т =Цп) позволяет оценить как визуальные, так и невизуальные измененияФормула изобретения Способ определения дегрануляции тучных клеток, путем воздействия на них веществ, вызывающих дегрануляцию, окрашивание клеток нейтральным красным с. последующим подсчетом среднего числа тучных клеток в поле зрения, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, исследования проводят на брыжейке, при этом дополнительно фотоколориметрически определяют коэффициент пропускания, а дегранупяцию рассчитывают по углу отклонения зависимости коэффициента пропускания от среднего числа. тучных клеток, и при угле отклонения менее 40 определяют дегрануляцию клеток, а при угле отклонения 40 - ее отсутствие.