Способ определения аутоиммунного процесса

(55 6 01 Й 33/ ИСАНИЕ ИЗС)БРЕТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ИЯ К АВТ ьский институы АЧН СССРняк, К.Ч. Свет еделения демипаточистологи 6, с. 160 - 163,НИЯ АУТОИЧмедицине и молинике нервных рный) в толецепторныхспад миелиых ло ОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР(56) Меркулов Г.А, Метод опелинизации по Марки. Курческой техники, Чедгиз, 19(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЧУННОГО ПРОЦЕССА(57) Изобретение относитсжет найти применение в Изобретение относится к медицине и может найти применение в клинике нервных болезней, паталогоанатомической и судебно-медицинской практике.Цель изобретения - прижизненное определение аутоиммунной демиелиниэации.Поставленная цель достигается тем, что у больного берут биоптат кожи, готовят из него два гистологических среза, один из которых окрашивают суданом черным, второй импрегнируют серебром, докрашивают общегистологическими красителями и по распаду миелиновых волокон, сопровождающемуся лимфо-моноплазмацитарными и/или лимфо-моноцитарными инфильтратами, устанавливают демиелиниэирующий процесс аутоиммунной природы.П р и м е р 1, Больная Р., 31 год, история болезни М 226. Клинический диагноз; рассеянный склероз, цереброспинальная форболезней, паталогоанатомической и судебно-медицинской практике, Цель изобретения - прижизненное определение аутоиммунной демиелинизации, Поставлен-. ная цель достигается тем, что у больного берут биоптат кожи, готовят из него два гистологических среза, один из которых докрашивают суданом черным, второй импрегнируют серебром, докрашивают обще- гистологическими красителями, а по распаду; .иелиновых волокон, сопровождающемуся лимфо-моноплазмацитарными и/или лимфо-моноцитарными инфильтратамиустанавливают демиелиниэирующий процесс аутоиммунной природы. ма. У больной берут биоптат кожи плеча размером 5 ь 10 мм, расправляют и наклеивают на полоску чистой плотной бумаги, фиксируют в течение 1 - 3 сут в 10,-ном растворе нейтрального формалина при рН 7,3 и на замораживающем микротоме готовят 2 среза толщиной 20-60 мкм, которые переносят на предметные стекла, смазанные смесью яичного белка с глицерином, Один из срезов помещают в спиртовой раствор судана черного (300 мг красителя в 100 мл 70 спирта) на 15 мин, дифференцируют в 70 спирте и заключают в лицерин-желатину, Второй срез импрегнируют азотно-кислым серебром по методике Бильшовского-Грос и докрашивают гематоксилин"зоэином.На первом срезе (судан чест пучках и приводящих рво кнах кожи наблюдается рановых оболочек в виде глыбок, шаров и зерен, На втором срезе (импрегнация серебром) обнаруживаются также деструктивные изменения аксонов - их фрагментация, зернистый распад, резкое истончение с образованием варикоэных расширений. После докраски этих срезов гематоксилин-эоэином(Г-Э) среди распадающихся нервных волокон по ходу нервных пучков, а также вокруг кровеносных сосудов Выявляются Воспалительные инфильтраты, состоящие из лимфоцитов, моноцитов, и плаэматических клеток, Все обнаруженные изменения подтверждают наличие демиелинизирующего аутоиммунного процесса, а именно распад миелиновых оболочеквыявляемый путем окраски суданом черным, свидетельствует о демиелиниэации, а деструктивные изменения аксонов и характерные воспалительные инфильтраты на препаратах, импрегнированных серебром, говорят о тяжелой степени повреждения нервных аппаратов и подтверждают клинический диагноз аутоиммунного демиелинизирующего заболевания,П р и м е р 2. Больной У 39 лет, история болезни М 221, Клинический диагноз: подозрение на рассеянный склероз.Взят биоптат кожи голени, из которого готовили два среза и окрашивали как в примере 1, На препаратах, импрегнироьанных серебром, выявляются лишь редкие с неровными контурами пучки аксонов, лишенные миелина и сопровождающиеся лимфомоноцитарными инфильтратами. По ходу крупных и мелких сосудов в дерме встречаются также очаги лимфо-моноцитарных периваскулярных инфильтратов. При окраске суданом черным во всех частях дермы в нервных пучках миелиновые оболочки не выявляются, Найденные морфологические изменения позволяют диагносцировать аутоиммунный демиелинизирующий процесс и подтвердить предполагаемый диагноз,П р и м е р 3. Больная С., 22 года, история болезни М 1004, Клинический диагноз: подозрение на рассеянный склероз.Берут биоптат кожи плеча, из которого готовили срезы и окрашивали как в примсре 1. На препаратах, импрегнированных серебром с докраской Г-Э, выявляются тонкие пучки нервных волокон с признаками фрагментации аксонов. Некоторая часть аксонов сильно истончена с варикозными расширениями по своему ходу, При окраске срезов суданом черным миелиновые оболочки в этих пучках не выявляются, в части пучков видна многочисленная суданофильная зернистость (остатки продуктов распада миелина). На импрегнированных и 5 10 15 20 25 30 чг 40 Д 1 50 55 докрашенных Г-Э препаратах по ходу нервных пучков и сосудов дермы обнаруживаются лимфо-плазмоцитарные инфильтраты. Полученные данные однозначно свидетельствуют об аутоиммунном демиелинизирующем процессе и подтверждают диагноз.П р и м е р 4. Больной Г., возраст 43 года, история болезни ЬВ 626, Клинический диагноз полиневрит, Взят биоптат кожи голени, из которого готовили срезы и окрашивали как в примере 1. На импрегнированных серебром и докрашенных Г - Э препаратах кожи встречаются лишь немногочисленные пучки с редкими тонкими аксонами. В остальных пучках акосоны не выявляются и среди шванновских клеток видны продукты зернистого распада. Рецепторные аппараты волосяных фолликулов находятся в состоянии деструктивных изменений. Только в некоторых нервных пучках на препаратах, окрашенных суданом черным, выявляются измененные с зазубренными краями короткие сегменты сохранившихся миелиновых оболочек, рядом с ними находится большое число суданофильных гранул, что свидетельствует о продолжающемся распаде миелина. На гистологических препаратах, импрегнированных серебром и докрашенных Г - Э, по ходу нервных пучков среди продуктов распада рецепторных окончаний, а также вокруг сосудов обнаруживаются лимфо-моно- и плэзмоцитарные инфильтраты, Полученные данные однозначно свидетельствуют о тяжелом, хроническом аутоиммунном демиелиниэирующем процессе.П р и м е р 5, Больная П., 52 лет, история болезни М 229. Клинический диагноз: подозрение на рассеянный склероз, Брали биоптат кожи спины, из которого готовили срезы и окрашивали как в примере 1. На препарате, окрашенном суданом черным, непосредственно под зпидермисом и в глубоких слоях дермы встречаются многочисленные пучки интактных миелиновых волокон, На препаратах, импрегнированных серебром и докрашенных Г-Э, хорошо выявляются мякотные и безмякотные аксоны и рецепторные аппараты волосяных фоликулов. Важной особенностью является отсутствие каких-либо воспалительных инфильтратов, Полученные данные позволяют исключить у больного диагноз демиелинизирующего заболевания, что подтвердилось в дальнейшем уточненным диагнозом - дискогенный радикулит,П р и м е р 6. Больная К 34 лет, история болезни М 228. Клинический диагноз; боковой амиотрофический склероз. Брали биоптат кожи спины, из которого готовили срезы и окрашивали как в приМере1709220 формула изобрете ни я Составитель А. ДревальТехред М.Моргентал Корректор Н, Ревская Редактор Ю. Середа Заказ 422 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-З 5, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 1. На препарате, окрашенном суданом черным, выявлялись лишь отдельные фрагменты миелиновых оболочек, в некоторых пучках они вообще отсутствовали, На препаратах, импрегнированных серебром и докрашенных Г-Э, встречались пучки истонченных, штопорообразно закрученных аксонов, Внутри пучков по ходу аксонов нередко были видны аргентофильные зерна и глыбки дегенерирующих волокон. Однако воспалительные инфильтраты во всех слоях биоптата кожи отсутствовали. Поскольку как известно в период ремиссии имеются в разной степени выраженности остатки воспалительных инфильтратов, то обнаруженные изменения в нервном аппарате кожи позволяют исключить аутоиммунную природу заболевания. Эти изменения свидетельствуют о хроническом дистрофическом процессе, который может быть связан с повреждением самих нейронов, локализующихся в спинномоэговых ганглиях, иннервирующих соответствующие участки кожи, либо сильным ущемлением спинномозговых корешков,Таким образом, предлагаемый морфологический способ дозволяет проводить прижизненную диагностику аутоиммунного демиелинизирующего процесса, Кроме того, в отличие от известных методов, он обеспечивает возможность определения не 5 только периаксональной демиелинизации,но и более тяжелую форму деструктивных изменений нервного аппарата кожи, а именно уоллеровскую дегенерацию нервных волокон, Все это в совокупности с оценкой 10 характера воспалительных инфильтратовпозволяет идентифицировать не только стадию, степень, но и высоту заболевания,15Способ определения аутоиммунногопроцесса в организме человека путем выявления демиелинизации нервной ткани, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью прижиз ненного определения аутоиммунной демиелинизации, исследуют биоптат кожи пациента, и в случае обнаружения демиелинизации нервных волокон, сопровождающейся лимфомоноплазмацитарными и/или 25 лимфо-моноцитарными инфильтратами, устанавливают демиелиниэирующий процесс аутоиммунной природы.