Штамм инми арм 647 bacillus thurjngiensis var. thuringiensis (berliner)

268296 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУСоюа Советских Социалистических РеспуйликЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 09.1 Ч,1968 ( 1232465/30-15 Кл. 4 И, 15,исоединением заявкиМПК А 01 п 1500 Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР.15(088.8 ОпуоликованоДата опублико АРМ 647 ВАСШ.) ТН 1)К 1 М 61 ЕМ 1 ЧАР,.Н и РЩВ Е Ю 18 ( В ЕК 1.1 ЮК) ШТАММ И бавлениемез пигменСР 1-СРП)ными краями,ьно30 Штамм был выделен в Институте микробиологии АН Армянской ССР в процессе изучения возбудителей бактериальных болезней тутового шелкопряда, Источником явилась погибшая куколка тутового шелкопряда в пе риод весенней выкормки из племенной шелководческой станции в г. Ереване.Исходная культура бактерий активно спорулировала с образованием ромбовидных параспориальных включений - энтомоцидных 10 токсинов. В результате дальнейшего культивирования исходной культуры была получена стойкая аспарагиновая раса, лишенная способности образовывать энтомоцидные кристаллы. Однако при этом штамм активно про дуцировал другой энтомоцидный токсин, растворимый в культуральной жидкости и обладающий термостабильностью.Далее дано описание аспорогенной разновидности, которую можно отнести к Вас. Йц г 1 препз 1 з серотипу Вег 11 пег.Вегетативные клетки прямые, палочковидные, (1,2 - 1,4)М(3 - б мк), Подвижные, в виде коротких и длинных цепочек. Перитрихи, грамположительны. Споры не образуются, в 25 процессе развития внутри клеток ромбовидные кристалловидные образования не наблюдаются, При цитохимическом изучении (окраска суданом черным) в клетках обил выявляются жировые включения. На мясо-пептонном гаре образует беловато-серые плоские зернистые колочии с ризоидными краями. Колонии в средч не врастают и легко снимаются петлей. На мясо-пептонном бульоне обильный рост без образованияпленки, На мясо-пептонном агаре+сусло== агар - беловато-желтые колонии с бугристыми прожилками, влажно-блестящие,Обильный рост.На мясо-пептонном агаре с дояичного желтка - обильный рот бтации.На синтетических средах (умеренный рост с сильно ризоидбеловатые колонии,На ломтиках картофеля и моркови - беловато-серый рост, влажно-блестящий. Пигментация ломтиков отсутствует. Усваивает аммонииныи азот, для роста необходимо присутствие аминокислот.Усваивает также глюкозу, фруктозу, рибозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, глицерин, целлобиозу, крахмал, салицин с образованием кислоты без выделения газа. Слабо усваивает арабинозу, рамнозу, ксилозу, галактозу, лактозу, раффинозу, мелибиозу, мелезитозу, талозу, маннит, сорбит, дульцит, инулин, инозит, эритрпн. Усваивает нитраты, оксалаты и сукцинаты в виде аммоницных солей.Молоко слабо пептонизирует, желатин умеренно разжижает. Крахмал гидролизует.Денитрификация сильно положительна.Ацегилметилкарбинол не образует, Индол исероводорд не образует.Гемолизины (на среде с кровью человека)слабо выражены, типа р-гемолизина. Лецитиназу активно образует,Серологическая типизация с сывороткой,полученной к жгутикову (Н) антигену, свидетельствует о принадлежности данного штамма к разновидности Вас, Йцппрепз 1 з айаг.Йцппрепз 1 з (Вег 11 пег), серотипу 1 по классификации Бенефуа и Де Бержак (1962,1963).Антагонистические свойства к другим видам бактерий очень слабо выражены. Подвержен действию лабораторных и производственных фагов.Факультативный аэроб, оптимум роста при35 - 37 С,Образует термостабильный токсин, вызывающий гибель мух и гусениц тутового шелкопряда.Проведенные опыты показали, что этотштамм образует энтомоцидный токсин, не разрушающийся при автоклавировании. Токсинпродуцируется на многих питательных средах,содержащих источники органического азота иусвояемые углеводороды. Для этого вполнепригодным является мясо-пептонный бульон,а также среда следующего состава, г:КН,РО 4 6,8, Мд 304 7 Н 20 0,123, Мп 5044 НО 0,002, Еп 504 7 Н 20 0,014, СаС 1, 4 НО0,183, пепетон 7,5, глюкоза 10,0; вода дистиллированная до 1,0 л.К этой среде добавляют 10 мл растворасульфата аммония из расчета 1 г этой солина 100 мл воды с 2 г Ге 2(504) з.Инкубация культур на указанных средахведется при 28 - 30 С в условиях глубинноговыращивания, Образование термостабильногоэнтомоцидного токсина отмечается у культуруже однодневного возраста. Энтомоциднаяактивность нативной жидкости не теряетсяпосле автоклавпрования при 120 С в течение15 мин,Опыты показали, что при вскармливаниикомнатной мухи нативным фильтратом (вместе с сахарным сиропом) описываемого штамма наблюдается почти полная гибель мух.Тутовый шелкопряд в стадии гусеницы,вскармливаемый нативным фильтратом штамма, погибает в стадии куколок на 1007 о.В контрольных вариантах с культурой Вас.Йцппрепз 1 з маг. Йцппрепз 1 з, котораяиспользуется в производстве бактериальныхинсектицидов, смертность насекомых была вдва-три раза ниже. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Особенности предлагаемого штамма по сравнению с другими штаммами Вас. Йцг 1 препз 1 з видны также из табл. 1, 2 и 3,Предмет изобретен ияШтамм ИНМИ Арм 647 Вас 111 цз Йцппрепз 1 з аг, Йцппрепз 1 з (Вег 11 пег).Зарегистрирован в Институте микробиологии АН Армянской ССР.Морфология клеток. Клетки прямые, палочковидные размером (1,2 - 1,4) 3 - 6 мк), Подвижные, встречаются в виде коротких и длинных цепочек Перитрихи, грамположительны, Споры и ромбовидные включения в клетках не образуются. Окраска суданом черным выявляет внутри клеток жировые включения, многочисленные у молодых форм.Отношение к кислороду. Факультативный аэроб. Максимум роста при 35 - 37 С.Мясо-пептонный агар. Беловато-кремовые плоские зернистые колонии с ризоидными краями. Колонии в среду не врастают и легко снимаются петлей. Пигменты не образуются.Мясо-пептонный агар+сусло, Балинг 7. Беловато-желтые колонии с бугристыми прожилками, влажноблестящие. Обильный рост.Мясо-пептонный агар с яичным желтком. Обильный рост без пигментации.Мясо-пептонный бульон. Обильный рост, без образования пленки.Молоко. Слабо пептонизирует с образованием сгустка.желатин. Умеренно разжижает.Крахмал. Гидролизует.Картофель и морковь. Хороший беловато- серый рост без пигментации.Глюкоза, фруктоза, рибоза, сахароза, мальтоза, трегалоза, глицерин, целлобиоза, салицин. Усваивает с образованием кислоты, без выделения газа.Арабиноза, рамноза, ксилоза, галактоза, лактоза, раффиноза, мелибиоза, мелезитоза, талоза, маннит, дульцит, сорбит, инулин, инозит, эритрин. Не усваивает,Протезы, амилазы, лецитиназы. Продуцирует,Нитраты. Восстанавливает,Ацетилметилкарбинол, индол, сероводород, Не образует,Гемолизины. Образует слабо, преимущественно р-гемолизин.Сероагглютинация. Специфически агглютинируется с сывороткой, полученной к жгутиковому антигену от культур Вас. Йцппрепз 1 з айаг. Йцппрепз 1 з (Вег 11 пег).Продуцирует термостабильный энтомоцидный токсин, активный по отношению к мухам и гусеницам тутового шелкопряда.268796 Таблица 1 11 ерекрестная сероагглютинация различных разновидностей спороносных бактерий - продуцентов энтомоцндных токсиновАгглютинирующая сыворотка Жгутиковый аитиген (культура бактерий) Серотип о о Я Вас. Йцппрепз 1 з ССЕВ Вас. Йцппрепяз ИНМИ Арм 647 Вас, Йцппрепз 1 з чаг, сацсаясцз ИНМИ Арм 805 Таблица 2 Антагонистическое действие культур разновидности ВегНпег серотипа 1 и штамма ИНМИ Арм 647. Вас. Йцппрепяз ССЕВВас. Йцппрепяз ССЕВВас. Йцппрепяз ССЕВВас. Йцппрепз 1 з ИНМИ Арм 647 Таблица 3 Гибель тутового шелкопряда от фильтрата культур кристаллофо нов (однократная ежедневная дача гусеницам автоклавированного фильтрата)Культура бактерий всего куколок гусениц 5 0 10 П( 1 Ч Ч 5 0 10 Вас. Йцппя 1 епз 1 з чаг. сацсаясцз ИНМИ Арм 811 50 60 30 30 50 20 20 10 10 111 1 Ч Ч Вас. Йцппрепз 1 з ССЕВ30 20 80 Вас. Йцг 1 препяз ИНМИ Арм 647 П 1 1 Ч Ч Составитель М. Дранишников Редактор Е, П, Хорина Техред А. А, Камышиикова Корректор А. И. ГавриловаЗаказ 1778/8 Тираж 480 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва Ж.35, Раушская наб., д. 4(5 Тинография, пр. Сапунова, 2 ьо 1ю о ф Щ о Д а О го О В Ю Ф о о а 63 О) Ю сФ со с 3 Я о я О Гй О е,О с 3 щ ц д Тд о щ О Ю О В Е о 3 о с Ф .о В Ф о о о ао о - й щ со м 1 и о с о оо со о с О с о Я ф Й 1агоВ йэ со3э Оо юЮ щЖ М Ф 3 о о В о о с х сБ Э о саси Ф с щ о с вФ 1во о Я Ю