Способ выявления структур нервных элементов на гистологическом препарате

(21 (22 ы, а именно изобретения нности преп цию мозга 1 а физиологи ел ох ч ствляют тем стологии ис. 99-104, ТРУКТУР НЕРВОГИЧЕСКОМ ПРЕметоду Тимма. изучить расп эфферентных ся к област ической меволоко пресинап ОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт мозга Всесоюзногоного центра психического здоровьАМН СССР(54) СПОСОБ ВЬИВЛЕНИЯ СНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ НА ГИСТОЛПАРАТЕ(57) Изобретение относитэкспериментальной и клин к неирогистологии.- удлинение времени ратов. ПроводятХ-ным этиловым спиреском растворе, Заоксональный ионофорез хлорида кобальта на препаратемозга, который после этого помещаютв смесь сульфида натрия и этиловогоспирта. Окраску гистологического пр парата производят и Изобретение позволя деление афферентных взаимоотношения: с постическими элементами.1 13038Изобретение относится к экспери-ментальной и клинической медицине, а именно к нейрогистологии, и может быть использовано для решения психиатрических и неврологических задач при изучении взаимоотношений между системами нервных элементов в мозге, а также в микрохирургической практи" ке для определения наиболее рациональных подходов при операции на 10 мозге.Целью изобретения является удлинение времени сохранности препаратов.Указанная цель достигается тем, что перед осуществлением способа про водят Фиксацию мозга 107. этиловым спиртом в Физиологическом растворе при 4 С в течение 2 и, далее ттроводят аксональньтй ионофорез хлорида кобальта на препарате мозга 1 п хуго 20 в 107, этиловом спирте на физиологическом растворепоследующее выдерживание мозга в смеси, состоящей иэ 2 мл 107. БаЯ и 100 мл 70% этилового спирта, стандартную проводку и заливку мозга в парафин, приготовление преттаратов и окраску срезов по методу Тимма. Изобретение иллюстрируется следующими примерами,П р и м е р 1 (по прототипу).Животное умерщвляют чрезмерной дозойнембутала (60 мг/кг), мозг перфузируют через сердце холодным (4 С) Физиологическим раствором, содержащим154 тпМ ИаС 1, 5,6 птМ КС 1, 2,3 тпМ СаС 16 Н О, 0,25 М сахарозы в 1 пМ -трисНС 1 буфере, рН=7,4, Мозг достают изчерепной коробки и помещают в фарфоровую чашку с Физиологическим раствором. Центральные концы волоконтракта или корешка нерва помещают вполиэтиленовую трубку и фиксируютв стенке трубки тканевым клеем иливазелином. Через свободный конецтрубки наливают 130 шМ раствор хлорида кобальта. Последовательно подключают источник постоянного тока,микроамперметр, реостат и два платиновых электрода, Один платиновыйэлектрод (плюс) помещают в находящийся в трубке раствор хлорида ко-бальта, а другой (минус) - в раствор,омывающий мозг. Пропускают постоянный электрический ток силой 40 мкАв течение 10 ч. Эксперимент проводятапри 4-6 С, через каждый час полностьюменяют раствор, омывающий мозг, Че 79 2рез 10 ч после начала эксперимента подлежащий изучению участок мозга помещают на 10 ч в смесь, состоящую из 2 мл 107. Ма Я и 100 мл 70% спирта. Далее проводят стандартную проводку и заливку мозга в парафин, получают непрерывные серийные срезы и окрашивают их по методу Тимма.Таким .образом удается заполнить хлоридом кобальта элементы мозга, находящиеся не далее 25 мм от места аппликации этого вещества. Сенсорные волокна и их терминальные ветвления заполнены кобальтом и имеют четкиеконтуры, дендриты можно проследить на расстоянии 100-150 мкм от теланейрона, набухания и фрагментирования волокон, изменения формы и объема нейронов не происходит.П р и м е р 2. При проведении способа на мозге экспериментального животного его умерщвляют чрезмерной дозой нембутала (60 мг/кг). Для удаления крови мозг перфузируют через сердце или сонные артерии холодным (4 С) Физиологическим раствором, содержащим 154 тюМ ИаС 1, 5,6 тюМ КС 1, 2,3 тпМ СаС 1 6 Н О, 0,25 М сахароэы в 1 шМ трис-НС 1 буфере, рН=7,4. Для Фиксации нервной ткани мозг перфузируют холодным (4 С) 107.-ным этилоовым спиртом в физиологическом растворе в течение 30 мин. Затем мозг достают из черепной коробки и помещают в Фарфоровую чашку с 10%-ным этиловым спиртом в физиологическом растворе, Центральные концы волокон тракта или корешка нерва помещают в полиэтиленовую трубку и фиксируют к стенке трубки тканевым клеем или вазелином. Через свободный конец трубки наливают 130 тюМ раствор хлорида кобальта. Последовательно подключают источник постоянного тока, микроамперметр, реостат и два платиновых электрода, Один платиновый электрод (плюс) помещают в находящийся в трубке раствор хлорида кобальта, а другой (минус) - в раствор, омывающий мозг. Пропускают постоянный электрический ток силой 40 мкА в течение 144 ч. Эксперимент проводятопри 4-6 С. Через 144 ч после начала эксперимента подлежающий изучению участок мозга помещают на 16 ч в смесь, состоящую из 2 мл 107. МаВ и 100 мл 70 . этилового спирта. Далее проводят стандартную проводку и заливку мозга в парафин, получают не13038 Формула изобретения Составитель А,Рыбина Техред И.ПоповичКорректор С.Шекмар Редактор А.Долинич Заказ 1299/42 Тираж 777 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул,. Проектная, 4 прерывные серийные срезы и окрашивают их по методу Тимма.П р и м е р 3. Для проведения способа на трупном материале мозга человека, мозг берут в первые часы (2-4 ч) после смерти. Мозг достают из черепной коробки и сразу же помещают в холодный (4 С) 107.-ный этиловый спирт в физиологическом растворе на 2 ч. Через каждые 30 мин раст вор полностью меняют. Затем мозг помещают в свежий 107.-ный этиловый спиртна физиологическом растворе и проводят аксональный ионофорез хлорида кобальта по примеру 2, 15П р и м е р 4. Берут мозг экспериментального животного или трупный материал мозга человека, как описано в примерах 2 и 3, но перфузию мозга проводят в 57-ном этиловом спирте 20 на физиологическом растворе.П р и м е р 5. Берут мозг экспериментального животного или трупный материал мозга человека, как описано в примерах 2 и 3, но перфузию мозга 25 и весь эксперимент проводят в 30-407. этиловом спирте на физиологическом растворе.На гистологических препаратах, полученных в результате эксперимен та по примеру 4 и 5 выявлено, что в случае применения 5 Х-ного этилового спирта нормальная структура нервной ткани не сохраняется при проведении опыта более 10 ч, а в слу чае применения 30-407-ного этилового спирта нормальная структура нерв 79 4ной ткани сохраняется на протяжении всего эксперимента, но аксональный ионофорез хлорида кобальта невозможен.Предлагаемый способ предварительной фиксации мозга в 107-ном этиловом спирте на физиологическом растворе сохраняет нормальную структуру нервной ткани, инактивирует аутолитические процессы, экономит время путем одновременной фиксации мозга и проведения опыта, не препятствует аксональному ионофорезу хлорида кобальта, что позволяет решать многие важные, практические задачи в психиатрии и неврологии путем изучения рас" пределения афферентных и эфферентных волокон на гистологических препаратах, их взаимоотношения с пост- и пресинаптическими элементами. Способ выявления структур нервных элементов на гистологическом препарате путем аксонального ионофореза хлорида кобальта на препарате мозга хп чдСго при силе тока 40 мкА с последующим помещением мозга в состав, состоящий из сульфида натрия и этилового спирта, и окраской полученного гистологического препарата по методу Тимма, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью удлинения времени сохранности препаратов, препарат предварительно фиксируют. 107-ным этиловым спиртом на физиологическоморастворе при 4-6 С от 30 мин до 2 ч.