Способ приготовления диагностикума для экспресс-индикации вирусов

) )Л УЯ 5 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ИДЕТЕЛ ЬСТВ К АВТОРСКОМ довательский клинической поль- одернации Вопр. ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР(56) Авторское свидетельство СССР1 ч"1323960, кл, С 12 й 7/00, 1987.Спыну К.ИБуздуган Г.И. Опыт исзования стафилококкового реагента, сжащего белок А, в реакции коагглютидля идентификации энтеровирусов. -вирусологии, 1987, М 5, с. 595 - 597. Изобретение относится к вирусологии, конкретно к способам идентификации и индикации вирусов,Цель изобретения - упрощение способа приготовления диагностикума для экспрессиндикации вирусов,П р и м е р 1, В качестве реагента используютт пылевидную черную массу головни кукурузы (хламидоспоры гриба .Яогозрог 1 цв ге 111 апцв). Технология изготовления предлагаемого диагностикума заключается в следующем.Отвешивают 90,0 М,5 мкг пылевидной черной массы головни кукурузы и два-три раза отмывают в 0,01 М фосфатно-солевом буфере (ФСБ). Эти и все последующие процедуры отмывания осуществляют путем осаждения хламидоспоровых частиц при 4000 об/мин в течение 10 мин и ресус(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ЭКСПРЕСС-ИНДИКАЦИИ ВИРУСОВ(57) Изобретение относится к вирусологии, конкретно к способам идентификации и индикации вирусов. Цель изобретения - упрощение способа приготовления диагностикума для экспресс-индикации вирусов. Это достигается использованием в качестве твердотельного носителя на основв микроорганизма хламидоспор Яогозрог 1 ов геИапцв. Сенсибилизация их гипериммунными сыворотками позволяет осуществлять индикацию и идентификацию антеро- и ротавирусов в реакции агглютинации, 1 табл. пендирования осадка в ФСБ, Затем взвесь головни фиксируют раствором формальдегида в концентрации 1,5 в течение 1,5 ч. Фиксацию проводят при постоянном перемешивании После фиксации суспенэию хламидоспор четыре раза отмывают в ФСБ от формальдегида. При необходимости длительного хранения (до 6 мес) взвесь хламидоспор головни добавляют в мертиолят или аэид натрия в конечной концентрации 1:1000-1;10000.После процедуры фиксации (или консервации) осуществляют сенсибилизацию Яогозрог 1 ов гейапцв гипериммунной или диагностическими коммерческими сыворотками против знтеровирусов. Для этого к 0,3 мл иммунной сыворотки против вирусов, разведенной 1:100 и более (в зависимости от исходного титра), добавляют 1,0 мл 10 1687611ной взвеси хламироспор, Смесь инкубируютв течение 1 ч при 37" С, тщательно перемешивая, По окончании процесса к содержимому флакона добавляют 5,0 мл 0,01 М ФСБи переносят в центрифужный стакан. Г 1 осле 5однократного отмывания в ФСБ и осакдения центрифугированием при 4000 об/минв течение 10 мин к осадку добавляют 10,0 мл0,01 М ФСБ с 0,05%-ным твином.Приготовленный по указанной технологии диагностикум готов для использованияв реакции агглютинации,П р и м е р 2. Осуществляют экспрессидентификацию 41 изолятов энтеровирусов, выделенных от больных детей 15серозным менингитом. В качестве реагентаиспользуют пылевидную черную массу хламидоспор Яогозрогцгп геапщп. Диагностикум для экспресс-индикации вирусовготовят аналогично описанному, 20На предметное стекло (на белом фоне)стерильной микропипеткой наносят 1 каплю диагностикума и каплю ФСБ (для контроля штаммов на спонтанную агглютинацию).Затем микропипеткой берут исследуемый 25изолят и соединяют с диагностикумом. Покачивая стекло, наблюдают наступающую агглютинацию, Реакцию коагглютинации (РК)учитывают в течение 30 с - 2 мин. Специфичность РК контролируют в реакциях между 30Яогозрогца геапцпп, сенсибилизированной типовыми иммунными сыворотками иих смесями, и гомологичными, гетерологич-.ными стандартными штаммами вирусовЕСНО 1 - 6, Коксаки А и В и т,п, Результаты 35РК учитывают по 4-крестовой шкале:(- -- -) - отсутствие коагглютинации, 45отрицательная.Заключение о принадлежности штаммаделают на основании положительной реакции не менее чем напри наличии указанных контролей, 50Идентификацию изолятов, выделенныхиз материала (фекалии, носоглоточные смывы, ликвор) от больных серозным менингитом в реакции коагглютинации, проводят в два этапа. На первом этапе используют Яогозрогцгп ге%апцн, сенсибилизированную смесями иммунных сывороток к энтеровирусам, а на втором - реагент, обработанный типоспецифическими сыворотками. Результаты идентификации на первом этапе показывают, что в 35 (85,4 о ) и 6 (14,6 о ) случаев изоляты относились к вирусам ЕСНО 1 - 6 и Коксаки В 1-6. Окончательная идентификация энтеровирусов (на втором этапе) в реакции коагглютинации показывают, что вирусы ЕСНО 1 - 6 распределились следующим образом: ЕСНО 1 - 2; ЕСНО 2-3; ЕСНО 3-1; ЕСНО 5-6 и ЕСНО 6-23 штамма. Вирусы Коксаки В 1-6 распределились следующим образом; Коксаки В 1 - 3; В 2 - 2 и В б - 1 штамм. Подобные результаты получены при использовании традиционного метода, т,е, стафилококкового реагента из штамма Со ЧЧап 1, Результаты окончательной идентификации изолятов следующие: Коксаки В 1 - 3; В 2-1 и В 6 - 2 штамма; ЕСНО 1 - 2; ЕСНО 1 - 2; ЕСНО 2 - 4; ЕСНО 5 - 7 и ЕСНО б - 21 штамм. Процент совпадения результатов, определенных известным и предлагаемым способами, составил 95,8%.П р и м е р 3, Осуществляют выявление ротавирусных антигенов в фекальных экстрактах больных острым гастроэнтеритом, а также в образцах сточных вод и воды открытых водоемов. Анализ проводят по изложенной методике,Результаты показаны в таблице, Проводимые сравнительные исследования показывают, что предлагаемый способ приготовления диагностикума для экспресс-анализа антигенов не уступает по чувствительности и специфичности известному способу,Формула изобретения Способ приготовления диагностикума для экспресс-индикации вирусов, включающий коньюгацию антител с твердотельным носителем, приготовленным на основе клеток микроорганизма, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве твердотельного носителя используют хламидоспоры Яогозрогцп гейапвп.1687611 Сравнение чувствительности и специфичности определения ротавирусного антигена известным и предлагаемым способами в реакции коагглютинацииСоставитель С. СветлышевТехред М.Моргентал Корректор Т. Палий Редактор М. Петрова Заказ 3678 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 П р и м е ч а н и е .Чувствительность = (РКЯК и РКЯт положительные/РКЯт положительные) хх 100; специфичность = (РКЯЯ и РКЯт отрицательные/РКЯт отрицательные) х 100; совпадение = РКЯВ и РКЯт положительные) + (РКЯИ и РКЯт отрицательные)/(РКЯЯ и РКЯт положительные+ РКЙ отрицательные х 100.