Способ определения биозараженности винограда и виноматериалов

(57) Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой и консервной, и касается определения пораженного плесенями сырья. Цель изобретения - повышение точности определения жизнеспособности плесеней. Это достигается за счет выбора вещества, характеризующего наличие такого поражения. В качестве такого вещества используют рутин (3-0-рутинозид кверцетина), который обладает способностью под воздействием специфического грибного фермента рутинаэы расщепляться до дисахарида рутинаэы и агликона-кварцетина. 2 табл. нен Вай 01 о 91 са елее п 1 Гооб АРААТЕ тиназы и агликона под действием специфического формента плесеней - рутиназы. Пробы фильтруют через мембранный пределяют концентрацию рукоэффективной жидкостной фией. При снижении концента выше 10 сырье признается м плесенями, Отсутствие разлитрации рутина в контрольном и м образцах, по величине не пре, служит основанием для ырья "здоровым",мобраСпособ осуществляют следующиэом,П р и м е р 1 Виноград сортаска" сортируют на здоровый и поный плесенями, перерабатывадробилке-гребнеотделителе. мезгусуют, отделяют сусло-самотек и идавление и отбирают среднюю прГОСТ 14137-74. Средние пробы от кпартии переработанного винограда ГОСУДАРСТВЕН ЬЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) йо 1 егвапв Я. апб ой. ввопбезвестоп оЮ воц 1 бз 1 и 5 ооб геа 11 оп Ьапт 1 деп ргобцст 1 оп апб 9 гоапЬ.- 1 пб.МсгоЫоаду, 1986, 3, В 5, р. 253-261(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЖЕННОСТИ ВИНОГРАДА И ВИНОРИАЛОВ Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой и консервной, и касается определения пораженного плесенями сырья.Цель изобретения - повышение точности определения жизнеспособности плесеСущность способа заключается в следу ющем.Виноград перерабатывают, меэгу прес суют, отделяют суслосамотек и первое дав ление и в среднюю пробу сусла вводят рутин, инкубируют с последующим определением изменения концентрации рутина Среднюю пробу сусла берут в количестве 50 смз, вводят 5 мг рутина и делят пополам по 25 см . Одну часть пробы стерилиэуют при 1000 С в течение 10 мин, а другую инкубируют при 37 С в течение 30 мин.В результате инкубирования происхо дит расщепление рутина до дисахарида руфильтр и о тина высо хроматогра рации рутин пораженны чий в концен исследуемо вышающих признания с фетя- аженют напресервое бу по аждой в трех40 45 50 55 повторностях в количестве по 50 см каждойз помещают в колбочки, в которые вводили по 5 мг оэутина. Образцы делят пополам по 25 см, одну половину стерелизуют кипячением при 100 С в течение 10 мин, а другую половину каждой пробы оставляют беэ изменений, Стерилизованные образцы - контроли помещают вместе с испытуемыми в термостат и инкубируют при 37 С в течение 0,5 ч, Отбирают из каждой пробы 5 см обз разца, фильтруют через мембранный фильтр 0,45 мкм и определяют концентрацию рутина на жидкостном хроматографе "Милихром" на колонке 62 х 2 мм, с сорбен. том "Силасорб С 1 в . В хроматограф вводят 15 мкм мембранно отфильтрованного образца и элюируют смесью ацетонитрила и воды в соотношении 20;30 (по объему) при рН 2,8, доведенной ортофосфорной кислотой, со скоростью 30 мкл/мин потока подвижной фазы. Детектирование ведут при 360 нм с идентификацией пика рутина путем сопоставления приведенного времени удержания образца с приведенным временем удержания раствора чистого рутина, анализируемого в тех же условиях, Концентрацию рутина определяют по калибровочному графику, Сопоставляя концентрации рутина в контрольной и исследуемой пробе судят о пораженности сырья плесенями.В табл, 1 приведены данные, характеризующие концентрацию рутина в контрольных и исследуемых образцах "здорового" и пораженного винограда сорта "фетяска".В пробах сусла, полученного иэ здорового сырья, и в стерилизованном образце концентрация рутина не изменилась, отклонения не превышают ошибку метода анализа. В процессе стерилизации происходит инактивация ферментов плесеней и внесенный в образе путин не подвергается расщеплению, его содержание не меняется, В образце пораженного плесенями винограда концентрация рутина снизилась, он разрушился под дейл, вием ферментов, присутствующих в пораженном плесенями винограда,П р и м е р 2. Виноград сортов "Рислинг", "Рейнский", "Пино", "Траминер", "Алиготе", "Амур" перерабатывают на дробилке-гребнеотделителе, не сортируя на здоровые и пораженные плесенью ягоды, Мезгу прессуют, отделяют сусло-самотек и первое давление и отбирают среднюю пробу по ГОСТ 14137 - 74. Средние пробы каждого сорта перезоаботанного винограда в количестве 50 см помещают в колбочки, в каждую иэ которых вводят 5 мг рутина. Образцы делят пополам по 25 см, одну полозвину стерилизуют кипячением в течение 10 5 10 15 20 25 30 35 мин, а другую половину каждой пробы оставляют без изменений, Стерилизованные образцы - контроли помещают вместе с испытуемыми в термостат и инкубируют при 37 С в течение 0,5 ч. Иэ каждой пробы отбирают по 5 см образца, фильтруют череззмембранный фильтр 0,45 мкм и определяют концентрацию рутина на хроматографе "Милихром" на колонке 62 х 2 мм с сорбентом "Силасорб С 1 а", В хроматограф вводят 15 мкл мембранно отфильтрованного образца и элюируют смесью ацетонитрил - вода в соотношении 20,80 по объему при рН 2,8, доведенной ортофосфорной кислотой, со скоростью потока подвижной фазы, равной 30 мкл/мин. Детектирование ведут при 360 нм с индентификацией пика рутина путем сопоставления приведенного времени удерживания образца с приведенным временем удерживания раствора чистого рутина, анализируемого в тех же условиях, Концентрацию рутина определяют по калибровочному графику. Уменьшение концентации рутина в контрольных и исследуемых пробах через 0,5 ч свыше 10 позволяет признать сырье пораженным плесенями. Если же уменьшение концентрации рутина не превысило 10, то проводят определение концентрации рутина через каждый час, но не более 4,5 ч в сумме. При отсутствии различий в содержании рутина в контрольной и исследуемой пробах по прошествии 4,5 ч сырье признавали "здоровым". В табл. 2 приведены данные характеризующие концентрацию рутина в исследуемых образцах винограда по отношению к контрольным.В образцах сусла "Рислинг", "Рейнский" и "Алиготе" после 0,5 ч инкубации происходит заметная убыль рутина (по отношению к контролю), что позволяет утверждать факт пораженности этих партий винограда плесенью. Сортообрацеэ сусла "Пино" поражен плесенью, что подтверждено 3,5 ч инкубирования,В образцах сусла "Траминер" и "Амур" не обнаружено изменений концентрации рутина (по отношению к контролю) на протяжении всего времени инкубирования, что позволяет установить факт отсутствия поражения сырья плесенью, сырье "здоровье".Представленные примеры показывают воэможность использования определения рутиназной активности в пораженном плесенью исходном сырье, предназначенном для переработки, Рутиназа является специфическим форментом плесеней, активность которого обнаруживается по расщеплению1635132 рутина, добавляемого в пробу, а рутин может служить индикатором для определенияплесеней в сырье,Таблица 1 Таблица 2 Составитель Г.БогачеваТехред М.Моргентал Корректор Т.Малец Редактор А.Ревин Заказ 754 Тираж 411 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина, 101 Предлагаемый способ (в отличие от известного) обеспечивает: специфичность определения; большую точность определения при различной степени пораженности сырья; воэможность контроля за ходом процесса пастеризации, обработки бентонитом и других технологических операций, связанных с удалением ферментов иэ обрабатываемого материала. Формула изобретения Способ определения биоэараженностивинограда и виноматериалов по наличию продукта метаболизма грибов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышенияточности определения жизнеспособности плесеней, в пробу исследуемого продукта вводят рутин с последующим делением ее на две части, одну из которых стерилиэуют.10 измеряют концентрацию рутина в этих частях и сравнивают их между собой, а определение наличия продукта метаболизма осуществляют по результату сравнения.