Способ отбора жизнеспособных спор фитопатогенных грибов

(505 А 01 й 63/04,С 12 М 1/О ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(56) Воронина Э.Г. и др. Физиолого-биохимическая характеристика покоящихся споргриба Е. тпах 1 егапа, Докл. ВАСХНИЛ, 1984,М 5, 23 - 26. Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано для оценки биологической разнокачественности спор фитопатогенных грибов,Цель изобретения - упрощение процесса и повышение выхода жизнеспособных спор,Способ осуществляют следующим образом.В центрифужную пробирку наливают раствор сахарозы с концентрацией 40 или 50, сверху осторожно вносят небольшое количество суспензии спор в буферном растворе, например фосфатном или трис-фосфатном. Пробирку помещают в угловой ротор центрифуги и центрифугируют при факторе разделения 850 д в течение 10-15 мин. Это обеспечивает разделение спор на фракции -легкую в верхней части и тяжелую на дне пробирки, Жизнеспособные споры, сосредоточенные в легкой (верхней) фракции отбирают пипеткой, наносят на фильтровальную бумагу и отмывают от сахарозы дистиллированной водой.(54) СПОСОБ ОТБОРА ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ СПОР ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ (57) Изобретение относится к фитопатологии и может найти применение для оценки биологической разнокачественности спор фитопатогенных грибов. Цель - упрощение процесса и повышение выхода жизнеспособных спор. Способ предусматривает концентрацию суспензии спор облигатных паразитов злаковых культур, используя безградиентный раствор сахарозы концентрацией 40 или 50, и фактор разделения не более 850 д при продолжительности центрифугирования в пределах 10 - 15 мин. 3 табл. П р и м е р 1. Из трех образцов уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы, имеющих исходное значение прорастаемости 73, 78 и 74, отбирают по 50 мг и суспензируют каждую пробу в 1 мл 0.05 М фосфатного буфера рН 6,9, В центрифужную пробирку наливают 6 мл 40 или 50-ного раствора сахарозы, сверху насла ивают суспензию уредоспор, Центрифуги- К) рование проводят при +5 С на центрифуге (, ОПНс угловым ротором при 3000 об,/мин (фактор разделения = 850 д) в течение 15 мин, После центрифугирования отбирают образовавшиеся фракции, отмывают от сахарозы и проводят оценку прорастаемости на 1(, агар-агаре путем инкубации агаровых блоков с напыленными спорами в термостате при 10+ 2 С в течение 18 ч.В табл. 1 представлена прорастаемость фракций уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы после фракционирования известным и предлагаемым способами.П р и м е р 2. Из трех образцов конидийвозбудителя пирикуляриоэа риса с исход1620073 Таблица 1 Таблица 2 ными значениями прорастаемости 74, 34 и 29 отбирают по 50 мг и суспендируют в 1 мл 0,05 М трис-фосфатного буфера рН 6,0. Режим центрифугирования и определение прорастаемости аналогично указанным, за исключением температуры инкубации, которая составляет 25+ 2 С.В табл, 2 приведены данные прорастаемости фракций конидий пирикуляции после фракционирования известным и предлагаемым способами.Как видно из табл. 1 и 2, в первой фракции концентрируется биологически активный материал; во второй Фракции - менее жизнеспособный и другие примеси,П р и м е р 3, 50 мг уредоспор возбудителя бурой ржавчины пшеницы суспендируют в 1 мл 0,05 М Фосфатного буфера рН 6,9. В центрифужную пробирку наливают 6 мл 40-ного раствора сахарозы, сверху наслаивают суспензию уредоспор и центрифугируют по режиму, указанному в примере 1.П р и м е р 4 50 мг уредоспор возбудители стеблевой ржавчины пшеницы суспендируют в 1 мл ОЛ 5 М Фосфатного буфера рН 6,9. В центрифужную пробирку наливают 6 мл 50-ного раствора сахарозы, сверху наслаивают суспензиюуредоспор и центрифугируют по режиму, указанному в примере 1. В табл, 3 представлены данные прорастаемости уредоспор возбудителей бурой и стеблевой ржавчины пшеницы после фракционирования в растворе сахарозы.5 Как видно из таблиц, в большинствеопытов прорастаемость спорфракции по предлагаемому способу существенно различаются (при Р = 0,95) как между контролем, так ифракцией.10 Таким образом, предлагаемый способпозволяет значительно упростить и повысить выход жизнеспособных спор облигатных паразитов злаковых культур.Формула изобретения 15 Способ отбора жизнеспособных спорфитопатогенных грибов, предусматривающий концентрирование суспензии спор в поле действия центробежных сил в центрифужных пробирках в растворе сахарозы с 20 последующим разделением полученныхфракций на легкую и тяжелую,о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода жизнеспособных спор, концентрированию подверга ют суспензию спор облигатных паразитовзлаковых культур в растворе сахарозы 40 или 50-ной концентрации и факторе разделения не более 850 9, а жизнеспособные споры отбирают из легкой фракции.301620073 Таблица 3 Составитель И.Привалова Редактор Т.ПарФенова Техред М,Моргентал Корректор М.Шароши, дственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Г 101 П Заказ 4201 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Рэушская наб., 4/5