Скрининг системных препаратов против фитонематод

(51)5 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЭОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗО АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Стояков А.В. Токсичность фосфорорганических соединений для фитонематод иметоды первичной оценки их нематицидности.Дисс.на соиск.учен, степени канд.биол.наук. Среднеазиатский НИИ фитопатологии, 1976, 49,Патент США М 4444891,кл. 0 01 й 33/48,1986.(54) СКРИНИНГ СИСТЕМНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ ФИТОНЕМАТОД(57) Изобретение относится к сельскому хозяй ству, а именно защите растений от вреИзобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к защите растений от вредителей и болезней, и может быть использовано при отборе активнодействующих соединений системных нематицидов для борьбы с гельминтами растений.Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения системных препаратов, сокращение сроков поиска и снижение трудоемкости исследования.Способ заключается в следующем.Испытуемый препарат в 0,1-1-ной концентрации вводят в питательную среду, затем высевают гриб Айегпага сепоз или Гцзабое охузрогца на 4-й день вносят 100 половозрелых нематод. действие препарата определяют визуально по окраске гриба и путем подсчета нематод в течение 6 дней. дителеи и болезнеи, и может быть испол -.зовано при отборе активнодействующих соединений системных немотицидов для борьбы с гельминтами растений, Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения системных препаратов, сокращение сроков поиска и снижение трудоемкости исследования, Испытуемый препарат вводят непосредственно в питательную среду, затем засевают гриб или Асегпага сепозили ЕцзагШа , охузрогце и на 4-.й день вносят 100 поло-, возрелых нематод. Количес гво погибших не- матод подсчитывают в течение 6 дней.Напримере препарата ДДВФ показано, что по предлагаемому методу оценки от 1 мг препарата из 100 испытуемых нематод гибнет на 6-е сутки 100 от 0,5 мг 99 и от 0,1 мг 91, а по известному методу оценки - от 1;0,5 и 0,1 мг препарата 25, 14 и 10 соответственно. 2 табл,Выбор срока внесения нематод (4-й день) обоснован тем, что этот срок является оптимальным для роста гриба АИегпага тепйз и для проведения оценки действия испытуемых препаратов; Более ранний срок (т.е. до 4-го дня) нежелателен, так как мицелий гриба еще недостаточно развит, а в более поздние сроки происходит старение гриба, что приводит к изменению его окраски.П р и м е р 1. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вно. сят испытуемый препарат карбофуран,в 0,1 ф,-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в зти пробирки проводят посев гриба АИегпаг 1 а .1 епЫз, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 нема 1620072тод в каждую пробирку и выдерживают при25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут,П р и м е р 2. В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат карбофуран в0,56-ной концентрации по 0,4 мл в каждуюпробирку, затем через 2 ч в эти пробиркипроводят посев гриба А 1 тегпаг 1 а тепцз,предварительно получив споры иэ расчета2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированйой воды, Через 4 дня вносят по 100нематод в каждую пробирку и выдерживаютпри 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч погибели нематод (в процентах) в течение 6сут,П р и м е р 3. В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат карбофурана в17 ь-ной концентрации по 0,3 мл в каждуюпробирку, затем через 2 ч в эти пробиркипроводят посев гриба А 11 егпаг 1 а тепЫз,предварительно получив споры иэ расчета2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100нематод в каждую пробирку и выдерживаютпри 25 ОС; Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч погибели нематод (в процентах) в течение 6сут,П р и и е р 4; В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат в 0,1-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку,затем через 2 ч в зти пробирки проводятпосев гриба А 11 егпага тепо 1 з, предварительно получив споры из расчета 2000-3000спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.Через четыре дня вносят по 100 нематод вкаждую пробирку и выдерживают при 25 С,Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод(в процентах) в течение 6 сут,П р и м е р 5. В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат видат в 0,5-нойконцентрации по 0,4 мл в каждую пробирку,. затем через 2 ч в эти пробирки проводятпосев гриба А 11 егпаг 1 а тепц 1 з, предварительно получив споры из расчета 2000-3000спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.Через четыре дня вносят по 100 нематод вкаждую пробирку и выдерживают при 25 С,Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут,П р и м е р 6. В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл вно 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 сят испытуемый препарат видат в 1 ф,-ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А 1 тегпаг 1 а тепц 1 з, предварительно получив споры из расчета 2000 - 3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25 С, Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.В табл, 1 представлены сравнительные данные по испытанию препаратов в концентрации 0,1-1,П р и м е р 7. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в 0,1 (-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А, тепо 1 з, предварительно получив споры из расчета 2000 - 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод(в процентах) в течение б сут.П р и м е р 8. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в 0,5;(-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А, епц 1 з, предварительно получив споры из расчета 2000 - 3000 тыс, спор гриба в 1 мл дистиллированной воды, Через четыре дня вносят по 100 нематод А. Ьеззеу в каждую пробирку и выдерживают при 25 С, Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.П р и м е р 9, В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в 1-ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А, тепйз, предварительно получив споры из расчета 2000 - 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод А, Ьеззеу в каждую пробирку и выдерживают при 25 ОС. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод(в процентах) в течение б сут.П р и м е р 10. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А, 1 епц 1 з, 16200725 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 предварительно получив споры из расчета2000 - 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по100 нематод А. Ьеээеу, в каждую пробиркуи выдерживают при 25 ОС, Эффективностьпрепаратов определяют визуально и черезкаждые,24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.П р и м е р 11, В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,5 мгв каждую пробирку, затем через 2 ч в этипробирки проводят посев гриба А. тепнэ,предварительно получив споры из расчета2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по100 нематод А. Ьеээеу в каждую пробирку ивыдерживают при 25 ОС. Эффективностьпрепаратов определяют визуально и черезкаждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут,П р и м е р 12. В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 1 мг вкаждую пробирку, затем через 2 ч в этипробирки проводят посев гриба А. 1 епнз,предварительно получив споры из расчета2000 - 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по100 нематод А. Ьеээеу в каждую пробирку ивыдерживают при 25 С. Эффективность. препаратов определяют по гибели нематод(в процентах) в течение б сут.П р и м е р 13, В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба А, 1 епЮэ, предварительнополучив споры из расчета 2000 - 3000 тыс,спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.Через четыре дня вносят по 100 нематодА. Ьеээеу в каждую пробирку, затем вносятиспытуемый препарат ДДВФ (прототип) по0,1 мг в каждую пробирку и выдерживаютпри 25 ОС. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) втечение 6 сут,П р и м е р 14. В пробирки со средойкартофельного агэра в количестве 8 мл проводят посев гриба А. епн 1 э, предварительнополучив споры из расчета 2000-3000 тыс,спор гриба в 1 мл дистиллированной воды,Через четыре дня вносят по 100 нематодА. Ьеазеу в каждую пробирку, затем вносятиспытуемый препарат ДДВФ (прототип) по0,5 мг в каждую пробирку и выдерживаютпри 25 ОС. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) втечение б сут.П р и м е р 15. В пробирки со средойкартофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба А. 1 епйз, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод А, Ьеээеу в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по 1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут,П р и м е р 16. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в 0,1-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Г. охуэрогна, предварительно получив споры иэ расчета 2000- 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод А. Ьеээеу в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.П р и м е р 17. В пробирки со средой картофельного агэрэ в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в 0,5 о -ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Г. охуэрогнщ, предварительно получив споры иэ расчета 2000- 3000 тыс, спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 немэтод А. Ьеээеу в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.П р и м е р 18, В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиэбендзол в 1-ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Г. охуэрогна, предварительно получив споры иэ расчета 2000- 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды, Через четыре дня вносят по 100 нематод А. Ьеээеу в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод(в процентах) в течение 6 сут.П р и м е р 19. В пробир.ки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Е, охузрогнгд, предварительно получив споры иэ расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 нематод А. Ьеээеу в каждуюпробирку и выдерживают при 250 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.П р и м е р 20. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,5 мгв каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Е. охузрогце, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 нематод А. Ьеззеу в каждую пробирку и выдерживают при 250 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут,П р и м е р 21. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в зти пробирки проводят посев гриба Е. охузрогца, предварительно получив споры из расчета 2000 - 3000 тыс, спор гриба в 1 мл дистиллированной воды, Через 4 дня вносят по 100 нематод А, Ьеззеу в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.П р и м е р 22, В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба Г. охузрогоа, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.Через 4 дня вносят по 100 нематод А, Ьеззеу в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по 0,1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.П р и м е р 23. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба Р. охузрогце. предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной водц, Через 4 дня вносят по 100 нематод А. Ьеззеу в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по 0,5 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют па гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.5 П р и м е р 24. В пробирки са средойкартофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба Р. охузрогогп, предварительно получив споры иэ расчета 2000 - ЗООО тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной 10 воды. Через четыре дня вносят па 100 нематод А. Ьеззеу в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) па 1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25 С,15 В табл. 2 приведены результаты сравнительных исследований известного и предлагаемого способов отбора нематицидов.Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах).в тече ние 6 сут. Во всех примерах контролемслужила питательная среда для культивирования гриба без внесения в нее каких-либо химических веществ.Таким образам, предлагаемый способ 25 позволяет быстро и эффективно производить отбор нематицидных препаратов системного действия.Анализируя данные табл. 2, можно также сделать вывод, чта вид гриба (А. тепшз 30 или Р, охузрогца) не влияет на достижениепоставленной цели, так как оба вида гриба являются хорошим субстратом для жизнедеятельности рисовой листовой нематоды А, Ьеззеу.35Формула изобретен ия Скрининг системных препаратов против фитанематод, включающий посев фито патогенного микроскопического гриба натвердую питательную среду, культивирование гриба до образования мицелия, внесение патогенных фитонематод и исследуемого нематицида, инкубирование с 45 последующей оценкой результатов по гибели фитонематод, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повцвения чувствительности способа, сокращения срока и снижения трудоемкости, исследуемый нематицид вводят 50 непосредственно в среду перед посевоммикроскопического гриба.10 1620072 Таблица 1 Таблица 2 Количество Препарати концентрация Экспоаи ия с 100 100 97 100 99 91 50 30 17 30 20 15 100 100 40 100 34 38 100 40 25 37 30 28 0,3 мл 0,4 мл 0,4 1 мг 0,5 мг 0,1 мг 20 10 5 10 5 3 30 20 10 23 10 25 10 8 6 О 0 0,5 мг 0,1 мг У0,4 мл 0 г иба Роза бших немат гцт ох з о о А.Ьеззе Колич вкль е ество поги 0,3 мл 0,4 мл 0,4 мл 100 100 100 100 100 35 100 32 28 47 30 17 37 25 12 16 13 8 100 97 32 20 100 ЗО 36 27 24 14 1 мг 0,5 мг(вода)0 Тиабендазол10,50,1ДДВФперед посевомг иба Количество погибших нематод А.Ьеззеу в культуре гриба Атегпаба тем 1 з1620072Продолжение табл,2Составитель И.Залунин Редактор Т.Парфенова Техред М,Моргентал Корректор О,Кравцова Заказ 4201 . Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/51Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101