Способ получения нейраминидазных антигенов вируса гриппа птиц

)5 С 12 И 7/00 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНК А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 21) 22) 46) 71) кцй А/индюшка/ Массачузе А /утка/ Англия/56 / /Украина/63 (НЗ 8) с тицина це ниже 1: 128 с/ 65 / Н11 6/,А/титром ге и нейра ми же 1, 000 2/, тка/ агглю- идазе,ц е Изобретеци ветеринарной тц к спссобу цых антцгецон к области н частносейраминидаз - для исполье отцоситс вирусологии получения цпригодных юи активностью не н зонап кой плотности.уссодержащую азводят фосфа птич алла нт оис ную жидтцо - соленым бу,9-6,0) в 8 раэ свободцых сиалоагглюти нации в е не должен быть ю нируссодержася упроыхода це Виркость рФерным раствор для устранения ных кислот. Ти он нл еци ге цтигеновллантоис азнеденцом материал пже 1;8. Разнедеццу птиц ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР 4483390/30-1319.09,8815.12.90. Бюл.46Всес .озцый научно-цсследонателветеринарный институт птицевод стна(56) Зацдес В.И Селимоцова Л.И., Доценко Л.Н., Идацон В,11. Очистка и изучение цейрамицидаз вируса грип, па. - Вопросы вирусологии, 1981,6 с. 692-696.Бего 1.Т. Вггеп 1 еЕ К., Ко 11 К.1 яо 1 аг 1 оп оГ а 1 оч шо 1 е 1 сц 1 аг юед 8 ЬТя 1 а 1 Ыаяе (пецгаш 1 п 1 йаяе) агою пГ 1 цепка ч 1 гця. - В 1 осй 1 п 11 са ег Ьдорйуя 1 са Аса, 1966, ч. 113, р. 402- 404 . н серологическоц диагностик рицпа птиц.Целью изобретения янляещение способа и повышениел ен ог о пр одук та .П р и и е р. Для приготпрепаратов цейрамицидазцых ис и ол ьз уют вцр ус с од ер жа щуцую жидкость вирусов грип 801613489 А(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НЕИРАИИНИДАЗ 1 ИХ АНТИГЕНОВ ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ (57) Изобретение относится к ветери-. нар ной вирус ологии, в час тности к способам получения нейраминидазных антигецов, пригодных для испольэова" ция в серологической диагностике гриппа птиц, Целью изобретения является упрощение способа и повышение выхода целевого продукта. Для этого используют штаммы вируса гриппа птиц, содержащие в своем составе нейрамицидаэу более термостабцльную,чем гемагглютинин. При этом накопленную вируссодержащую аллантоисную жидкость разводят, буферным растнором в 4-8 раэ и прогревают при 54-58 С до исчезноо неция гемагглютицирующей активности. Критерием качества препарата является сохранение цейраминидазной актив- С ности на уровне, достаточном для проведения реакции подавления нейраминидазной активности. 2 табл.щую жид кос т ь р а зли в ают п о пр обир кам в объеме 5, 0-1, О мп и пр огревают в водяном ультратермостате 30 мин в температурном режиме 54-58 С, (пред"арительно устанавливают для каждого штамма в отдельности, до полного устранения геммаглютинации) . Затем пробы охлаждают водопроводной водой в течение 3-5 мин и определяют титр гемагглютинации с 5 Е-ным раствором эритроцитов петуха в капельной реак- . ции гемагглютинации. 11 ри отсутствии ге;д гглютинации в прогретом вируссод ржащем материале определяют нейра.гппцззную активность. Для этого к 0,2 мл прогретой вируссодержащей жидкости добавляют 0,2 мл фосфатно-со;:свого буфера и 0,2 мл овомуцина ио ььгержпвают при 37,0-37,5 С в течение 16-18 ч. В охлажденных до комнатной г мпературы пробах определяют нейра:анидазнук 1 активность.Зкстинцию реакционной смеси опре - деллют спектрофотометрически при длине волны 549 нм против овомуцина в к;честве контроля. Нейраминидазная ,;ктивность прогретой вируссодержащей жидкости должна бьггь не ниже 0,400 ед. оптической плотности.Для инактивации нейраминидазных ант,.генов берут 0,01 мп формалина, содержащего 26 формальдегида, на 3 мл прогретой вируссодержащей жидкости.Использование способа получения нейраминидазных антигенов вируса гриппа птиц позволяет по сравнению с известным с низить число этапов, уменьшить длительность, не требует 5использования дорогостоящей и трудоемкой в применении аппаратуры, дорог ос т оящих ф ерме нт ати вных пр е пар а т он .В табл. 1 представлен уровень нейраминидазиой активности при различной температуре прогревания вируссод ержащей жид кости .В табл. 2 представлен уровень иейраминидазной активности при различнойпродолжительности прогревания.15фор мула и з о бр ете ни я Способ пол учения нейрами нида зныхантигенов вируса гриппа птиц, вкпючающий заражение куриных эмбрионоввирусом гриппа птиц, накопление вируссодержащего материала, его обработку и контроль полученного антигена на нейраминидазную активность,отличающийся тем, что, с25 целью упрощения способа и повышениявыхода целевого продукта, в качествевируса гриппа птиц используют штаммывируса гриппа птиц, содержащих в своем составе нейраминидазу более термо 30стабильную, чем гемагглютинин, а обработка вируссодержащего материалавключает разведение вируссодержащейаллантоисной жидкости в 48 разбуферным раствором рН 5,96,0 с пооследуюгим прогреванием при 54 58 С,до исчезновения гемагглютинирующейактивности,, оС 11 таммы вируса гриппа Продолзв:тельность прогревания, мин 30 60 РГА А РГЛ А РГА А РГА А А/индюшка/Массачуэетс/65/ Н 6 Р 2/ 56О, 880 -" - 0,810 -- О, 38 7 -- О, 076 А/утка /Англия/положительная реакция гемагглютинацниотрицательная реакция гемагглютинациннейраминида зная активность, ед. оптической плотности,Составитель С,Снетлышен Редактор О.Спесиных Техред И,Дидык Корректор И.ЭрдейиЗаказ 3867 Тираж 478 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открьггиям при ГКНТ СССР 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 56 58 72 74 76 1,600 1,352 0,809 О, 116 0,053