Способ скрининга нематицидов

А 3 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ЮНТ ССОф ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ТОРСК СВИДЕТЕЛЬСТВУ 3 и Бюл. У 36 й институт гел Скрябина и Вс вательскнй инс минт о" оюзный тут ва и Л.Н. Тит3(088,8)Б., Шестиперов А,Атиабендазола и бенловым афеленхоидом.ого института гель23, с. 20-28, 1978КРИНИНГА НЕМАТИЦИДО Поп 085. ва М ость с ри аренко е т Бюлл есою н оль логии, вып. 54) СПОСОБ аллусами помеО температуре 28 С(56) Попо Эффективн в борьбе Изобретение относится к биотехнологии, в частности к защите растений, и может быть использовано при отборе высокоактивных соединений для борьбы с паразитическими нематодамн сельскохозяйственных растений.Целью изобретения является ускорение и упрощение анализа.Способ состоит в том, что отбор высокоактивных нематицидов проводят путем использования культуры ткани (каллусы, или проростки ), инокуляцией ее стерильными нематодами с одновременным внесенйем растворов испытуемых препаратов. Оценку нематицидности препаратов осуществляют через 6-15 дней после инокуляции культуры ткани риса нематодами по наличию жизнеспособных нематод в культуре ткани, оценку фитотоксичности - по росту каллусной массы и растений-регенерантов. 51)5 С 01 Н 33/48 С 12 Н 5/(57) Изобретение относится к областбиотехнологии и касается защиты растеннй от нематод. Способ с успехомможно применять в сельском хозяйствЦелью изобретения является упрощение и ускорение анализа. Способ состоит в том, что растительный материзаражают стерильными нематодами, обрабатывают нематицидом, активностькоторого исследуют, после чего подсчитывают через 6-15 сут количествожизнеспособных нематод, при этом вчестве растительного материала исцэуют культивируемые ьп чайно тканирастений. 1 табл. Способ обеспечивает. отбор химических соединений контактного и систем" ного действия, нефитотоксичных, высокоактивных дпя борьбы с рисовой листо .;вой нематодой.П р и и е р 1, В пять пробирок с каллусами и в пять пробирок с проростками восприимчивого к нематоде .сорта риса Дубовский 129 вносят по 0,3 мп 13-ного раствора биабендаэола ,(известного нематицида ) и 0,15 мп вод ной суспензии стерильных нематод иэ расчета 100 особей на одну пробирку.В пять контрольных пробирок с каллусами и в пять контрольных пробирок с проростками риса вносят по 0,15 мп водной суспенэии стерильных нематод иэ расчета 00 особей в каждую пробирку.Далее пробирки с кщают в термостат при1596251 40 х растени астени вность (ТЭ% )а 45,4%.йствйя препа" лению растворов ов, суспензии внесению их в.ткани риса прововиях (в боксе). в приведенных уют о высокой аемого способанематицидов. аемого способа 50 д" пробирки с проростками - в камеру с температурой 28 С.и освещенностью 2000 лк.Контроль для примеров 1-3 один и тот же.Оценку нематицидности препарата проводят через 6-15 дней после его внесения.При просмотре под микроскопом МБСна стенках пробирок не обнаружено ни одной подвижной особи нематод, что свидетельствует о высокой нематицидной активности препарата.Следовательно, выявлена и подтвержена высокая нематицидная активность тиабендаэола.Не отмечено угнетения роста каплусаи растения, что указывало на отсутствие Фитотоксичного действия препаата.В контрольных пробирках с каллусами и проростками риса через несть дней найдены единичные особи нематод ,(1-12 экз. ), численность которых к пятнадцатому дню возросла до 250- 300 экэ.Прим аллусами и е р 2. В пять пробирок с в 5 пробирок с проростка сят па 0,3 мл 1% ного рас зувмого препарата У 391водной суспенэии немаета 100 особей в одну про риса вно твора испольпо 0,15 мп год из расч бирку,Дальнейший ход эксперимента аналогичен описанному в примере 1,При учете через шесть дней в проирках с каллусами и проростками риса тмечены единичные особи активнодей" твующих нематод, через 15 дней их ко пичество составляет соответственно 200-250 и 200-230 экз.Указанное свидетельствует о размно женин нематод в культуре ткани риса, отсутствии нематицидного действия упрепарата У 391 и его нефитотоксичнос П р и м е р 3. Схема и методика опыта аналогична описанным в примераи 2, В качестве испытуемого препар та берут химическое соединение 9 401 с неизвестной нематоцидной активностью.При оценке результатов через 6- 15 дней после внесения препарата и и нематод в пробирках с каллусами и проростками не выявлено ни одной по вижной нематоды, что указывает на в сокую нематоцидную активность соединения,Отмеченные потемнение и угнетение 5роста каллуса и проростка свидетельствует о фототоксичности препарата.П р и м е р 4 (по прототипу ). Опытпроводят в теплице. В десять вазоновс простерилизованной почвой высеваютпо десять семян риса. При появлениивсходов проводят инокуляции нематодами из расчета 500 особей на одной растение. Растения в фазе трех листьев впяти вазонах обрабатывают 1%-ным раствором тиабендазола. Контроль - пятьвазонов с зараженными растениями риса без обработки препаратом.В период выращивания риса проводятвсе мероприятия по уходу за растениями (подкормка, обеспечение водного исветового режима и др.)Оценку нематицидной активности препарата проводят в конце вегетации растений (через 120 дней после посевасемян ) по зараженности метелок рисанематодами. Нематод из зерна рисавыделяют методом Бермана. Анализируютпятьдесят растений в опытном варианте и пятьдесят растений в контроле.Пробы просматривают под микроскопом.Наличие нематод свидетельствует о.зараженности растения, Зараженность рас.тений в варианте с обработкой тиабендазолом составляет 48%, в контроле 88%, Нематоцидную активность препарата устанавливают по относительномуколичеству зараженных растений отаналогичного показателя в контроле поФормуле где а - число зараженньв контроле;б - число зараженньопыте,Техническая эффектиприменения тиабендазолФитотоксического де рата не отмечено.Работу по приготовиспытываемых препаратстерильных нематод ипробирки с культуройдят в стерильных услоРезультаты опытовпримерах свидетельствэффективности предлаготбора высокоактивныхИспользование предлаг5 1596251 6 дпя оценки нематицидной активности их вегетации, стерилизации почвы, ,тиабендизола подтверждает высокую вазонов и т.д. активность действия этого препаратаИспользование способа исключает на рисовую листовую нематоду (100 Ц , влияние окружающей срегФ (погодны"р 5тогда как при оценке его активности условий, других организмов) на оцениэвестным способом (прототип 1 эфек- ку активности препаратов при их тивность составляет 45 з 43.сщщни иге.Формула изобретенияОценку препаратов на нематоцид" 0 Способ скрикинга нематицидов, ность проводят в течение 6-15 дней, включающий заражение растительного тогда как для оценки нематицидной ,материала нематодами, обработку его активности тиабендазола известным нематицидами и оценку активности не- способом (прототип ) требуется 120 матицидов, о т л и ч а ю щ и й с я дней. 15 тем, что, с целью упрощения и ускореСпособ позволяет повысить проиэ- ния анализа, в качестве растительного водительность труда и снизить трудо- материала используют культивируемые затраты, так как его использование п ч 3.Сто ткани растений, а оценку исключает необходимость проведения активности проводят путем подсчета анализов по вьщелению нематод из рас- количества жизнеспособных нематод че 20тений, ухода за растениями в период рез 6-15 сут после заражения. Оценка способов первичной оценки ненатициднай активности препаратов против рисовой листовой пенатоды Оценка фитотокснчности препарата Сроки проведениииспытании,дки ИспытывесИспользованШй субстрат Химические соединение н препараты ри/и Такннческав зффектнвность енкв активности действие првларатв наи концентрацю растворапрепаро та, Х ол-вовраненвк рвееюв,Х через15 дней рез дней через15 дней через6 дней препарата, ХТиабендазол, д.и,Королев каллусооб разованне Отсутствие фитотокснч"ности ) 15 00,0 аллу ол, 752 ТивбендаипаПрепаратПрсиаротПрепаратПрепарати и 3Ф 6- 1 5 6- 1 5 6-15 6-15 6 т 15 03-10 1,0 1,О 1,0 1,0 1,0 00,00 0200-252 ЭОПроросткиКаллусПроросткиКаллусПроросткн Ф Э 91 Р Э 91Р 401 р 40 00,100,ение каллуоявлеюгексичностп)а каллусообр Потеннса лфитот-12 250-3 6 Каллус оитроль несения репарата и н н и 1-1 О 200-2 5 Проросткн Иорнальноа развитие проростков 5 Тиабендазол,75 Х д,н, Растениеказ 2906 Тираж 518 ПодписноеНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открьггиям при ГКНТ СЧСР 113035, Иоскваз Жз Раушская каб д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 1