Способ определения биологической активности препаратов инсулина

(1% (И) 18 33/48 ПОД ЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ; (56) 1,ГосударственнаяфармакопеяСССРМ., фМедицинаф, 1968, 10-е издание,с. 934-9.37,(21 (22 (46 ий институхимическ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС ЕЛАМ ИЭОЬРЕТЕНИЙ И ОТНРЬ(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТ ИНСУЛИНА путем сравнения воздействия стандартного и исследуемого препаратов е- инсулина на биологическийтест-обьект,, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что, с т целью ускорения способа, в качестве их тест-объекта используют миокард цредсердия лягушки, а. степень вызываемогоэффекта оценивают по силе сокращения миокарда.1010860 10 Изобретение относится к биологии имедицине и касается определения биологической активности лекарственных препаратов,Известен способ определения биологи 5ческой активности препаратов инсулинапутем сравнения воздействия стандартного и исследуемого препаратов инсули-на на биологический тесг-объект 1 .Однако известный способ являетсясложным, а также требуется много вре мени.Цель изобретщия ускорение способа.Указанная цель достигается тем, чтопри осуществлении способа опредуениябиологической активности препаратов инсулина путем сравнения воздействия стандартного и исследуемого препаратов инсулина на биологический тест-объект, в качестве тест-объекта исйользуют миокардпредсердия лягушки, а степень вызываемого эффекта оценивают по силе сокра-,щения миокарда.Определение биологической активности препаратов инсулина на тест-объекте,представляющем собой изолированныепредсердия лягушки Кано Й 1 ЙЪоюдоОбездвиженную путем спинализациилягушку укладывают на пенопластовую З 0подложку брюшной частью вверх. Вскрывают грудную полость, от сердца определяют венозные и артериальные сосуды.Изолированное сердце помещают в изме-.рительную камеру с, физиологическим 35раствором следующего состава:МаСС 13.0 мМ,КС 2,5 мМ, СаС 1,8 мМКН РО, 0,9 мМ, ЙОНСО 2,5 мМглюкоза О, 1%, рН 7,8.Предсердия отделяют от желудочка и 40тонкими нитями привязывают в двух точках. С помошью нитей один конец объекта прикрепляют к стенке камеры, другойсоединяют с датчиком силы. Для испытаний используют цинк-инсулин кристаллический для инъекций во флаконах. Растворы различных концентраций получаютпутем разведения инсулина из флаконовфизиологическим раствором, Для регистрациизависимости силы сокращения от концентрации инсулина измерительную камерунаполняют растворами с различными кон. центрациями инсулина. Инсулин оказывает отрицательный инотропный эффект на сократительный миокард предсердий лягушки -. сила сокращений под его влиянием уменьшается, Измеряя силу сокращений для различныхконцентраций, инсулина, получают так называемую кривую доза эффакт для данного препарата инсулина. Пусть соотношение доза - эффект для стандартногопрепарата инсулина будет выражено зависимостью 1, а для исследуемого препарата - зависимостью 2 (фиг, 1). Биологическая активность исследуемого инсулина может быть либо вообще неизвестна, либо известна ориентировочно.Поэтому для построения зависимостидоза-эффект за величину биологическойактивности исследуемого препарата прини.мают либо ориентировочно известнуюактивность, либо берут произвольное значение биологической активности, котороеточно найдено в процессе определения поданному способуСпособ осуществляют следующим образом.На плоскости с зависимостью дозаэффект для стандартного и исследуемогопрепаратов проводят прямую 6, параллельную оси концентраций на уровне,соответствующем любой произвольно выбравной степени уменьшения силы сокращения,В точках пересечения А и Б получаютдва значения концентраций, вызывающиходинаковый эффект: К - концентрациюстанцартного и Кисследуемого препаратов инсулина, По определению концентрации Ксоответствует некоторое количество м ЕД биологически активного стандартного препарата инсулина в одной единице объема физиологического раствора,К - м ЕД исследуемого инсулина в единице обьема. Так как биологический эффектК" и К,2 одинаков, то из Фю ЕД исследуемого препарата активными являются толь)ко Ь ЕД, остальная часть неактивна. Этоозначает, что исходно взятый для приготовления растворов исследуемый инсулинс предлагаемой активностью й ЕД/мл вдействительности имеет активностьй, ЕД/мл, где сС является нормировочным коэффициентом, определенным какотношение стандартного К. и К исследуемого, вызывающих одинаковый эффект,Ы ив =.К КИспользуя указанную вьве процедуру,определяют биологическую активность инсулина.Экспериментально находят зависимостидоза - аффект для обоих препаратов. Дляпрепарата 1 она представлена зависимостью 1 для препарата 2 - зависимос+тью 2, (фиг. 2). Проводят прямую цФФ ьгпраию, фа ф/лл иму Составитель С, Малютинатыль Техред Т, Маточка Корректо едактор 2/35 Тираж 871 НИИПИ Государственного к, по делам изобретений 13035, Москва, Ж, Рвуказ Прдписное митета ССС открытий цская наб., 5 ал ППП фПатент", г. Ужгород, ул. П ая, 4 1010560 4 параллельно оси концентраций на уровне, с(,0,68, получают, что истинная био 1половинного эффекта, т.е. на уровне . .логическая активность, нормированная 50%-го уменьшения силы сокращения относительно биологической активности под влиянием инсулина. Попучают двастандартного. препарата, равна 27,2 ЕДУмл, значения концентраций, вызывающих ю т.е, является ниже биологической акжиодинаковый эффект. Точке А пересечения, ности, указанной на флаконе. соответствует концеитрация стандартногопрепарата инсулина К. - 2,55 ЕД/мл, Предлагаемый способ позволяет полу- точке Б пересечения - концентрация ис- чить точность определения биологической следуемого препарата инсулина К, 10 активности 5%. По сравнению с извесв 3,75 ЕДУмл. Нвйодят нормировочный . н ым сокращается время определения с коэффициент: ф = К Кт 2,5573,758-30 дней до 2 ч, обеспечивается воз. 0,68. можность автоматизации процесса опреУмножая биологическую активность деления, что значительно ускоряет споисследуемого препарата 40 ЕДРмл на 1 соб.