Способ определения уровня гибридности семян кукурузы

35 40 45 50 и ставят на водяную баню на 60 минопри 60 С. Цеитрифугируют при 5000 яв течение 10 мии. Из надосадочнойжидкости берут аликвоту в 50-60 мкли упаривают досуха под Феном. Белокрастворяют в 25-30 мкл раствора, содержащего 8 М мочевины, 0,67. уксусной кислоты, 57. 2-меркаптоэтанола и203 сахарозы и после прогрева на кипящей водяной бане в течение 5 миннаносят на дорожку геля,Электрофорез проводят в 107.-номполиакриламидном геле в уксуснокислойсистеме, содержащей 8 М мочевины, вгеле толщиной 1 мм с карманами 1 см,После окончания электрофореза гельфиксируют в течение 30 мин в 103-номрастворе трихлоруксусной кислоты,сокрашивают О,ООЬ.-ныл раствором кумасси В - 250 в течение 1,5-2 ч и замеряют относительную электрофоретическую подвижность (ОЭП) белковых компонентов, определив расстояние от старта двух реперных В ,. и С . Последниелегко идентифицируются на электрофореграммах, являясь нижними компонентами двух самых мощных сдвоенных комнонентов. Определив ОЭП всех компонентов, объединяют их в группы в соответствии с их ОЭП: А-группа включает компоненты с ОЭП от 0 до 35,В-группа - с ОЭН от 36 до 42, С-группа.- от 43 до 48; В-группа - от 49до 56 и Е-группа - от 57 до 100. Наосновании подобного анализа электроферограмм составляют белковые формулы для гибридов и их родительскихлиний. После электрофоретическогоанализа 100 зерновок гибрида и сравнения их Формул с Формулами родителейподсчитывают уровень гибридности (количество гибридных зерен) для кажцого гибрида. При этом следует помнить,что гибридным считается такое зерно,зеиновый спектр которого включаетвсе позиции белковых компонентов от-,цовской и материнской линии.В табл. 1 приведены в качествепримера зеиновые (белковые) Формулы.гибрида Краснодарский МГТВ иего .родительских линий, Уровень егогибридности составил 743, т,е. из100 проанализированных зерен только74 имели в своем наборе все компоненты материнской и отцовской линий,остальные 26 зерен имели только материнскую Формулу и, следовательно,получены были в результате самоопыления.В табл. 2 представлены экспериментальные данные по различному соотношению трех важнейших факторов при извлечении зеиновых белков: концентра"ция изопропанола, время экстракциии температура. Видно, что оптимальными данные параметры были при 60-703изопропанола, времени 50-80 мин и 15температуре 55-65 С. При этом количество компонентов в .составе зеина,извлеченных из эндосперма, было максимальным.Использование предложенного способа определения уровня гибридностисемян кукурузы по сравнению с существующим имеет следующие преимущества:позволяет проводить оценку гибридности даже в случае, если родительскиелинии очень близки по,происхождению;благодаря разработанной номенклатурезаписи данных о генотипе в виде зеиновых (белковых) Формул возможновводить и хранить сведения о гибридных комбинациях в памяти ЭВМ (создатьбанк данных по всем гибридным комбинациям); это позволит выявлять такжепроисхождение примесей (инородногогенетического материала) в каждойконкретной зоне семеноводческих хозяйств;,изобретение позволяет сохранить селекционный материал для получения потомства. Формула изобретенияСпособ определения уровня гибридности семян кукурузы, включающий экстракцию зеина и его электрофоретическое разделение с последующим анализом полученных электрофореграмм, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с " целью повышения точности определения, экстракцию зеина проводят 60-707-ным изопропанолом в течение 50-80 мин при 55-65 С и при анализе Фореграмм белковые компоненты группируют в соответствии с их относительной электрофоретической подвижностью, приняв за внутренний стандарт наиболее характерные компоненты В и С 1.+ Редактор М.Циткина Заказ 2864 Тирах 436 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб,д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,уагородз ул. Гагарина, 101 552 нзопроланолв прн50 С, 65 мнн 552 изопропанола при60 С, 45 мин 552 нэопропа" иола при65 с, 45 мнн 552 нэопропанолв прн65 С, 50 мин 602 изопропанола прп 65 С, 50 мни 702 изопропвнола при55 С, 50 мин70 Х изопропвнола прн65 С, Вомин 702 изопропвнола при55 С, Вомнн 602 иэопропа"нона при 55 С, 50 мнн 752 нзопропвнола при55 вС, 50 мин 757. изопропанола лри70 С, 50 мнн 752 иэопропв" иола прн70 С 9 Во мии ОЗО компонентонго ) 27зг 1 зв60646еззз 1 5660 1 677 о76 Составитель ВвДемкинТехред М,Дидык Корректор М.Шароши