Способ диагностики мастита

,15291 П 1 Ь 33/6 ГОСУДАРСТВЕПО ИжИРЕТЕПРИ ГКНТ СССР НОЙ КОМИТЕТИЯМ И ОТКРЫТИЯ Т ТВУ ВИ К АВТО бу уднога молока,02-0,04 мл сого растворананосят на ве ка, Для этого ир абследуемой в об каплей 0,01;,"наг етиленовога зел нюю поверхность полиакриламидног электрофоретичес 0,9 н. уксусной После окраски ге ме во толбика из геля и па 57.-ногоергают аму разделе ислате в те чение 3 амидокрасителе визуалытвори 1 ыхлину проб черным 10 В лислоораг измеряют д сових фрак т;офорегра 0,47-0,49еленому д спектра и оцениваю лксв мол отдельных бел 1.ачест- цианнам элск аяв.-,.нии най полосы ции. При мме като вонутадию есла- ичать Спа аб ат оляет дас лактостаз те ст ицижети масен, по ерн на даклиническай мастит ме в кислтиловым ля к ле и ашив мидон черно затем раси ст Соб осуществляют сл пектр ующим ых белков кислотораств разом.Проб с капле метилов белковых,02-0,04 мл о растворат на верхльно,одмолока в объеме 0,013-ного водно го зеленого нанос электрс Еметил воста рани акриламидпри силеествляютение бел м е р 1дильницы Пробу молок объеме 0,02 о вой ОПИСАНИЕ ИЗ(71) Научно-исследовательский институт экспериментальнои медицины А 11 НСССР и Ленинградский педиатрическиймедицинский институт(56) Голота В.Я., Алтуев Г.Н.венный состав молока при пактамастите. - Акушерство и гинекология,1984, У 9, с. 48-50.(57) Изобретение относится к медне, в частности к хирургии, и мобыть использовано для диагностиктита, Целью изобретения является увеличение точности и ранняя диагностиИзобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для диагностики мастита,Целью изобретения является увеличение точности способа и ранняя диагнюю поверхность предварит готовленного столбика пол ного геля и в течение 3 ч ока 2,0 мА на трубку осулектрофоретическое разде по отношению к мети 1 агностируют раннюю тадии. Точность способа состав7 растворе до дастижениеленым финишной зонылечения геля из труба ют раствором краси 10 В в течение 30- мывают несвязавший ль, визуально оцениваю ют длину пробега отдельн фракций, При появлении н реграммах катодной полос0,47-0,49 по отношениюму ".леному диагностирую дию мастита.вместе с каплей 0,017-ного водногокрасителя метилового зеленого наносятна верхнюю поверхность предварительно подготовленного столбика полиакрил 5амидного геля, находившегося в стеклянной трубочке размером 0,5 х 10 см,Подготовку полиакриламидного геля ипроцедуру электрофореза осуществляютпо прописи Паниям и Чолкли. Полиакриламидный геЛь готовят путем смешивания3 растворов: раствор А: 607 акриламид(Ч/Ч) в ИО; раствор С: 10 раствормочевины,Все растворы можно готовить загодя и хранить на холоде (+4 С) в темной стеклянной посуде с притертой крышкой 20 в течение 2-4 недель. Непосредственно перед анализом растворы сливают в следующем соотношении А:В;С = 2:1:5.Далее к смеси добавляют катализатор полимеризации - персульфат аммония 25 (40 мг на 32 мл смеси; 50 мг на 40 мл смеси). Смесь с катализатором тщательно перемешивают и разливают с помощью пипетки или шприца в стеклянные трубочки на высоту 9 см, а затем 30 наслаивают на смесь дистиллированную воду, В течение 60-90 мин происходит полимеризация геля в трубочках. После окончания полимеризации, устанавливаемой по формированию четкой границы между гелем и водои и явлению синерезиса геля, вьокидают 1 ч и переносят трубочки с гелем в аппарат для злектрофоретического разделения (можно использовать отечественный аппарат 40 марки ПЭФили венгерский аппарат фирмы "Кеапа 1" модель). В верхнюю (анодную) и нижнюю (катодную) камеры заливают по 0,5 л 0,9 н, раствора уксусной кислоты в воде (буфер), при силе тока 2-3 мА на трубку осуществляют процедуру преэлектрофореза, в процессе которой удаляют из геля компоненты, мешающие Фроведенив аналитического электрофореза. После окончания проэлектрофореза буфер в верхней и нккней камерах заменяют свежим. Преэлектрофорез проводят в течение 5-16 ч до постоянных значений тока и напряжения, Можно гели с полиакрил 55 амидным гелем подготавливать за 12 ч до проведения аналитического электрофореза. Пробы анализируемого молока с каплей 0,017-ного водного раствора метилового зеленого наносят на верхнюю поверхность геля, Они являются достаточно плотными, поэтому быстрой диффузии белков в кислый раствор для электрофореза не наблюдается. Электрофорез ведут при постоянной силе тока 2,0 мА на трубку в течение 3 ч. По окончании электрофореза, фиксируемого по достижении индикаторным красителемметиловым зеленым - нижней финишной части столбика геля. Гели извлекают из трубочек традиционным способом и окрашивают в течение 30 мин 0,17-ным раствором амидочерного О В, растворенного в 207.-ном этаноле, 7 ь-ной уксусной кислоте, остальное НО. После скрашивания гели отмывают от несвязавшегося красителя, либо электрофоретически, либо путем смены раствора 0,9 н. уксусной кислоты, Спектр кислоторастворимых белков молока можно ,условно разделить на две зоны. В первой верхней зоне представлено 5 основных белковых фракций, Вторая зона в средней части геля представлена одинарной катодной полосой с К= 0,37- 0,38. К определяют как отношение длины пробега данной белковой полосы к длине пробега метилового зеленого, т.е. к общей длине геля, Диапазон значений Е обусловлен тем, что белковая полоса после прокрашивания имеет определенную толщину, а потому определение длины пробега ее в геле можно осуществлять как по переднему, так и по заднему фронту полосы.П р и м е р 2. Проба молока в объеме 0,02 мл, взятая у родильницы, у которой клинически диагностирован лактостаз, подвергается электрофоретическому анализу так же, как в примере 1, В спектре кислоторастворимыхобелков молока этой пациентки выявлена дополнительная катодная полоса с Еу = 0,41-0,49. Следовательно у больной имеет место начальный этап воспаления в молочной железе при отсутствии его клинического проявления. Диагноз подтвержден клиническими наблюдениями в течение последующих семи дней,П р и м е р 3, Проба молока в объеме 0,02 мл, взятая у родильницы, у которой клинически диагностирован лактостаэ, подвергается электрофоретическому анализу так же, как в примере 1. В спектре кислоторастворимых белков молока этой пациентки изменений по15 мастит. Составитель А. АносовРедактор Т, Парфенова Техред А.Кравчук КорректорС.Шекмар Заказ 7635/40 Тираж 789 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,Я 1 5 15 сравнению с нормой не обнаружено. Диагноз - лактостаз (застои молока), который подтвержден последующими клиническими наблюдениями.С помощью предлагаемого способа возможно однозначно диагностировать начальную стадию развивающегося мастита в тех случаях, когда известные биохимические и физические способы не позволяют этого осуществить, а также дифференцировать воспаление от лактостаза. Точность способа 973, что на 162 выше, чем способа- прототипа. 29124 6 Формула изобретения Способ диагностики мастита путембиохимического исследования молока, 5о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью увеличения точности способаи ранней диагностики, производятэлектрофоретическое разделение белковмолока 0,9 н. уксусной кислотой в 15 Хном полиакриламидном геле и при появлении в электрофореграмме катоднойполосы с й= 0,47-0,49 по отношениюк метиловому зеленому диагностируют