Способ определения способности клеток секретировать простагландин е в среду культивирования

(51)4 С 01 Ы 33 88 РЕТЕНИЯ ПЬСТВ 08 бб/28-14 м сох тстви мен ри еделг пие с вать проста мстаци уралг нук Цель до аннои в обработечение мл стекл угированиеми ресуссредеворотки) до леток в но центрифугировзатем помещали е ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ И Н АВТОРСКОМУ СВИД(71) Всесоюзный онкологическии научный центр А 1 Н СССР(54) СПОСОБ 011 РЕ 11 ЕЛРНИЯ СПОСОБОСТИ КЛЕТОК СЕКРЕТИРОВАТЬ 1 РОСТА 11 йНД 11 Н Г.СРЕДУ КУ 11 БТИ 1111 РОВАН 11(57) Изобретение с сносится .; бион гии клетки и медицине и 1 жет быть спользовано для изучения сп собир. ти нормальных и спухолевых ьл.ток секр" - тировать простагла 1 щин Е. Цельк 1 иб - ретения является опрел лс ние сп г обности клеток секретировать прост; гИзобретение относится к биологииетки и медицине. Цель иэооретения - о бности клеток секрети андии Е (ПГЕ) в культ стигаетгя тем, что кучьтуральные жидкости (КЖ) исследуемых клеварительнс обработанных ианных ингибитором синтезнд етацином, добавляют к нормальным клеткам-киллерам (НК-клеткам), и после инкубации определяют цитотоксическую активность (ЦТА) НК- клеток, Вывод о способности клеток секретировать ПГЕ делают на основании снижения ЦТА НК-клеток после инкубации их с культуральнои ср дой исследуемых клеток, не обработанных инЯО 152 А 1 ландин в культуральную жидкссть, Исследуемые клетки культивируют в присутствии ингибитора синтеза простагландина Е-индометацина или без него,затем почученные культуральные жидкости добавляют к нормальным клеткамкиллерам (НК-клеткам) и после инкубапии определяют цитотоксическую активность (ЦТА) НК-клеток. Вывод о способности исследуемых клеток секретировать простагланднн Е р раду делают на основании снижения 1.ТА НК"клеток в присутствии культурна ьнси жидкости этих клеток, не обработанныхнаометацином, при условии отмены этого эр феьт1 зисчтствин куль;уральнои жид кости исследуемых клеток, обработанных индомеьапином. дометацином, при одновре нении этой активности в КЖ-клеток, обработанных П р и м е р, Двухсуточную культуруток высокоэлокачественной опухоли сирииского хомяка, индуциррусом саркомы Рауса (011 Х -5танную или необработаннуюдвух часов индометацином (ростовой среды), снимали сверсеном, осаждали центрифпри 400 д, в течение 5 минпеидировали в питательнойКРИ 1-640 (с 1 ОХ бычьей сыконцентрации не ниже 2 101 мл среды.Клетки повтор5 мин при 400 а,1529125 1147-689007 = 29 ЗЕ;2252-689 ЦТА НК-клеток, обработанных КЖОПХ-БК снижалась до939-689ООЖ - 5, А.; 251002,10 ыт 1 контрЦТА =1 мас - 1 кдтрГде 1 дя1 д ри 1 мдс количествоимпульсов в надосадочной жидкос ти в опыте,контролеили при полном лизисе таиных культуральными жидкостями клеток-киллеров, при этом способностьклеток секретировать простагландин Ев среду определяют при наличии снижения цитотоксической активности в пробе без индометацина и одновременномотсутствии снижения в пробе с индомеклеток-мишеней соответственно,В данном примере ЦТА интактныхНК-клеток равна тацином. Составитель Е. СинауридзеРедактор Т. Парфенова Техред А.КравчукКорРектоР С,Шекмар Закэ 7635/40 Тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, 1 осква Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент , г.ужгород, ул. Гагарина,101 термостат при 37 С на 20 мин, отсасыовали КЖ и 0,2 мл КЖ добавляли к равному объему суспензии НК-клеток, содержащей (2-5) 1 О клеток в 1 мл сре 5 ды. НК-клетки предварительно выделяли иэ крови человека в ступенчатом градиенте плотности перколла. После 30 мин инкубации при 37 С к НК-клеткам добавляли 0,4 мл меченных дСг клеток тимомы человека ИОЬТ 4 такой концентрации, чтобы соотношение клеток-мишеней и эффекторов (НК-клеток) составляло 1:50, Затем ставили цито- токсический тест стандартным методом в 96-луночкой плате. Через 4 ч отсасывали иэ лунок по 0,1 мл надосадочной жидкости в пластиковые ампулы и просчитывали их в гамма-счетчике. Уровень ЦТА определяли по общепринятой формуле расчета процента лизиса мишенейпроцент выхеда радиоактивной метки из клеток в надосадочную жидкость) ЦТА НК-клеток, обработанных КЖ ОПХ-ЯК преобработанных индометацином, равна1097-6892252-689Из представленных данных видно, что КЖ клеток ОПХ-ЯК снижает ЦТА 1 К-клеток почти в 2 раза (с 293 до 1567.) а индометацин отменяет этот эффект. На основании этих данных был сделан вывод о секреции этими клетками простагландина типа Е.формула изобретения Способ определения способности клеток секретировать простагландин Е в среду культивирования, включающий обработку нормальных клеток-киллеров культуральной жидкостью исследуемых клеток, обработанных индометацином, и культуральной жидкостью тех же клеток, не обработанных индометацином, с последующим определением цитотоксической активности исходных и обрабо