Способ выявления нестабильного гемоглобина в крови

СОЮЗ СОВЕТСНИ 1СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 91 (11 4 С 01 К 33/72 3 ЛВЗНАйЖЫ,) 1.И, ЯРЙ ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 28 Бюл. 9 3 чанова088.8)К.Ч. апй Кау К. 81 вр 1 е йегесгоп ог цпвгаЬВпГ. У. Наеваго 1 о 8 у р. 615-629. риноом н споосреди па-. ьзирумесин-бу 8 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТпо изОБРетениям и отнРьтиямПРИ ГКНТ СССР(21) 4253420 (22) 29.05.8 (46) 15.09.8 (71) Централ ский институ ния крови (72) Т.П. Мол (53) 612.015 (56) Сагге 11 МегпоКог ги Ьаево 81 оЬдп, 1972, ч. 25,ный научно-исследователь гематологии и перелива(54) СПОСОБ ВЬИВЛЕНИЯ НЕСТАБИЛЬНОГОГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ(57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, гематологии, аименно к способам выявления нестабильного гемоглобина в крови. Целью изобретения является упрощение способа,Берут кровь из пальца в количестве0,1-0,2 мл капилляром, предварительносмоченным гепарином, отстаивают, плазИзобретение относится к экспементальной медицине, к гематолога именно к диагностике гемоглобипатнй, обусловленных носительствмутантных нестабильных гемоглоби(Нв),Цель изобретения - упрощениесоба,Цель. достигается тем, что непственно эритроциты крови донорациента, взятой из пальца, суспенют в специально приготовленной снормального бутилового спиртатанола с фосфатным буфером при 1 2 му удаляют. Гемолиэат не готовят, а для анализа используют эритроциты, которые в количестве 0,01-0,02 мл добавляют к 2,5-3 мл приготовленной за 30 мин до анализа и тщательно перемешанной смеси 6,5-5,5 Х н-бутанола в 0,1 М натрий-Фосфатном буфере, содержащем 10М 11 аЭДТА с рН 7,4 при 8-25 С. Суспензию эритроцитов в смеси осторожно перемешивают, Через 3+ 1 мин эритроциты донора и пациента растворяются в этой смеси, и суспензия становится прозрачной, Оба раствора - контрольный и исследуемый - инкубируют при 18-25 С. Через 5-60 мин раствор эритроцитов носителя нестабильного Нв мутнеет, а контроль остается проэрач-ным, Помутнение раствора регистрируют визуально или путем измерения оптической плотности при 700+5 нм. Установлена обратная зависимость между температурой и объемной концентрацией н-бутанола в Фосфатном буфере. 250 С с получением прозрачного раствора. Наличие в крови нестабильного Нв регистрируют по помутнению раствора через 5-60 мин по сравнению с прозрачным контролем,Способ осуществляется следующим образом.Для,исследования кровь берут из пальца в количестве 0,1-0,2 мл капилляром, предварительно смоченная гепарином. Затем кровь отстаивают в течение 30-60 мин, плазму удаляют.Для анализа используют эритроциты. Эритроциты в количестве 0,01-0,02 мл3 150816 добавляют к 2,5-3 мл приготовленной за 30 мин до анализа и тщательно перемешанной смеси 6,5-5,5% н-бутанола в О,1 М натрий-фосфатном буфере, со - 3 5 держащем 10 М натриевой соли этилендиаминотетрауксусной кислоты (Ба ЭДТА 7 с рН 7,4 при 18-25 С. Суспензию эритроцитов в смеси осторожно перемешивают палочкой или покачивая пробирку рукой. Через 3-1 мин эритроциты донора и пациента растворяются в этой смеси и суспензия становится прозрачной, Оба раствора - контрольныйо и исследуемый инкубируют при 18-25 С 30 мин. Через 5-60 мин раствор эритроцитов носителя нестабильного Нв мутнеет, а контроль остается прозрачным. Помутнение раствора регистрируют визуально или путем измерения 20 рассеяния растворов без предварительного центрифугирования при 700.5 нм на спектрофотометре,Установлена обратная зависимость 25 между температурой и объемной концентрацией н-бутанола в фосфатном буфере. Для различных интервалов температур составлена таблица, которой следует руководствоваться при выборе 3(1 условий выявления нестабильного Нв в крови предложенным способом.П р и м е р 1. Больная Б (Московская городская детская клиническая больница У 1, история болезни Р 9143) страдает врожденной гемолитической анемией и цианозом. Из пальца берут 0,1 мл крови гематокритным капилляром. Отстаивают, через 30 мин плазму удаляют капилляром. 0,01 мл эритроцио тов больной добавляют при 20 С к 2,5 мл за 30 мин приготовленной и тщательно перемешанной смеси 6,5 н-бутанола в 0,01 М натрий-фосфатном буфере, содержащем 10М МаЭДТА рН 7,4, Аналогичным образом готовят контроль. Смеси осторожно перемешивают путем покачивания пробирки рукой, Через 4 мин суспензии эритроцитов стали прозрачными, Оба раствора инкубируют при 20 С, Через 5 мин раствор зритроцитов больной мутнеет, а конт, роль остается прозрачным, После регистрации оптических плотностей растворов на спектрофотометре "Спекорд" при 700 нм получают следующие показания: контроль 0,03 опт.ед., больная 0,7 опт.ед. У больной диагносцировано носительство нестабильного Нв. 8 4П р и м е р 2. Больная Р (ЦНИИгематологии и переливания крови МЗСССР, история болезни 9 299) страдаетнаследственной гемолитической анемией. Из пальца берут 0,1 мл крови капилляром, предварительно смоченнымгепарином. Кровь отстаивают 45 мин,плазму удаляют капилляром, 0,015 млэритроцитов больной добавляют при23 С к 3 мл за 30 мин приготовленнойи тщательно перемешанной смеси 6,0%н-бутанола в 0,1 М натрий-фосфатномбуфере, содержащем 10 М Ма ЭДТА срН 7,4, Аналогичным образом готовятконтроль. Смеси осторожно перемешивают стеклянной палочкой. Через 3 минобе суспензии эритроцитов становятсяпрозрачными. Пнкубируют при 23 С, Через 15 мин раствор эритроцитов значительно мутнеет, а контроль остаетсяпрозрачным. После регистрации оптических плотностей растворов при702 нм на спектрофотометре "Спекорд"получают следующие показания: контроль 0,02 опт.ед больная 1,4 опт,ед. У больной диагносцировано носительство нестабильного Нв,П р и м ер 3. Больная Ш (Московская городская детская клиническаябольница Р 1, история болезни Р 17462)имеет жалобы на повышенную утомляемость, периодические головные боли.Из пальца берут 0,15 мл крови гематокритным капилляром. Кровь отстаивают 60 мин, плазму удаляют капилляром.0,02 мл эритроцитов больной добавляют при 25"С к 3 мл за 30 мин приготовленной и тщательно перемешаннойсмеси 5,5 па н-бутанола в 0,1 М натрий-фосфатном буфере, содержащем 10 МИаЭДТА с рН 7,4. Аналогичным образомготовят контроль. Смеси осторожно перемешивают путем покачивания пробирки рукой. Через 3 мин суспензии эритроцитов становятся прозрачными. Обаораствора инкубируют 60 мин при 25 С.Раствор эритроцитов больной через60 мин мутнеет, а контроль остаетсяпрозрачным, После регистрации оптических плотностей при 700 нм на спектрофатометре "Спекорд" получают следующие показания: контроль 0,035 опт.ед.,больная - 0,93 опт,ед, У больной диагносцировано носительство нестабильного Нв,Упрощение способа выявления нестабильного Нв позволяет: проводить анания. Составитель В. МитюшинТехред М.Моргентал Корректор Л, Бескид Редактор М. Келемеш Заказ 5536/48 Тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 5 15081 лиз на микроуровне - на крови объемом 0,1-0,2 мл, взятой из пальца; сократить стадии приготовления гемолиэата, термостатирования и прецизионных спектральных измерений, которые длительны и требуют использования специального оборудования. Введенные упрощения позволяют не только детектировать нестабильные Нв у гематоло", гических больных, но и проводить массовые профилактические и популяционные обследования населе 68 6Формула изобретенияСпособ выявления нестабильного гемоглобина в крови, включающий взятие крови, получение эритроцитов и последующую обработку пробы органическим растворителем с последующей регистрацией оптической плотности пробы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, пробу эритроцитов инкубируют 30 мин прио18-25 С в смеси, состоящей из 6,5- 5,5 н-бутанола в О, М натрий"фосфатном буфере, при рН 7,4, содержащем 1 О М этилендиаминтетраацетат натрия.