Способ количественного определения ксимедона в крови

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 33/52 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ О ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКО СВИДЕТЕЛ ЬСТВУ(71) Казанский государственный медицинский институт им. С.В.Курашова и Институт органической и физической химииим. А.Е,Арбузова(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КСИМЕДОНА В КРОВИ(57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности для контроИзобретение относится к области.экспериметральной медицине, в частности к количественному анализу лекарственного вещества пиримидинового ряда - ксимедона, и может быть использовано для контроля содержания препарата в крови человека и животных и для установления доза зависимых эффектов при клинических исследованиях для расширения показаний применения препарата,Способ осуществляют следующим образом.В центрифужную пластмассовую пробирку с предварительно налитой туда хлорной кислотой в объеме 4 мл (7,5-ный раствор, приготовленный путем разбавления НС 104, ч, в 4 раза) по каплям добавляют 1 мл крови (сыворотки) стерильно взятой из вены донора, принимавшего ксимедон. В этот момент наблюдается коагуляция белка 2ля содержания препарата в крови и для установления дозазависимых эффектов при клинических исследованиях. Способ заключается в обработке 1 мл крови 4 мл 7,57 ь-ной хлорной кислотой, отделении образующегося осадка центрифугированием, фильтровании супернатанта и последующем спектрофотометрировании в диапазоне 270-320 нм и по максимуму интенсивности поглощения определяют содержание ксимедона, Способ позволяет определять ксимедон в крови в количестве 0,1 мкг/мл.3 табл. и частичное разрушение клеточных элементов крови с образованием сгустка коричневого цвета и прозрачного надосадка с легким желтым оттенком. Далее содержимое пробирки перемешивают, а затем центрифугируют 15 мин при 15 тыс, об/мин. Надосадок фильтруют через шотовский фильтр М 2, Полученный прозрачный экстракт помещают в сантиметровую кварцевую кювету и регистрируют спектр в диапазоне 270 - 320 нм. Контролем служит проба крови (сыворотки), обработанная аналогичным образом, но полученная отдонора до приема ксимедона. По спектру определяют оптическую плотность в аах полосы (Оп) и по известной формуле находят концентрацию ксимедона, Минимальная концентрация ксимедона, определяемая предлагаемым методом, составляет 0,1 мкг/мл. Следы ксимедона (качественно)можно уловить вплоть до 0,001 мкгмл, Определение проводят при комнатной температуре,В связи с тем, что изменение концентрации хлорной кислоты а большую или 5меньшую сторону от предлагаемой отрицательно сказывается на чувствительностиметода, необходимо строгое соблюдениерекомендуемой степени разбавления кислоты. Применение большего разведения 10приводит к недостаточной коагуляции белков цельной крови, из-за чего растет оптический "белковый фон", ухудшающийусловия регистрации анализируемой полосы, В случае применения более концентрированной НС 104 растет оптический"удельный фон" путем усиления поглощения более концентрированной кислотой ипигментов как результата жесткого гемолиза эритроцитов. 20П р и м е р 1. Определение ксимедона врастворах различной концентрации методом Уф-спектроскопии. Навески ксимедонарастворяют в 7,5%-ном растворе НС 10 а сучетом получения концентраций препаратав растворе кислоты, отличающихся на порядок, мг/мл: 110, 110, 110, 110Определение проводят в кварцевых кюветах на двухлучевом саморегистрирующемспектрофотометре И Иэ Яресогд М 40,Полученные результаты представлены втабл,1.П р и м е р 2, Количественное определение ксимедона в крови человека, получившего перорально препарат, 35Навеску препарата растворяют в 50 млдистиллированной воды из расчета 30 мгкгвеса, после чего донор принимает ее вовнутрь. Перед приемом препарата у донораиз локтевой вены методом венопункции берут 1 мл крови, используемой в дальнейшемв аиде контроля. После приема препаратачерез 20, 40, 60, 120 и 240 мин у донорааналогичным методом берут опытные про.бы крови по 1 мл. 45Далее пробу добавляют по каплям вцентрифужную пластмассовую пробирку, си редварител ьн о налитой в нее 7,5%-нойхлорной кислотой (4 мл).В момент добавления наблюдают коагуляцию белка с частичным разрушением клеточных элементов крови в виде сгустка коричневого цвета и прозрачного надосадка с легким желтоватым оттенком,Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой, а затем центрифугируют 15 мин при 15 тыс. об/мин,Отфильтрованный после центрифугирования надосадок помещают в кварцевую кювету ( = 1 см) и спектрофотометрируют в диапазоне 270-320 нм, Данные опыта приведены в табл. 2.П р и м е р 3. Количественное определение ксимедона в сыворотке крови собаки после внутривенного введения препарата.Навеску препарата растворяют в 10 мл дистиллированной воды из расчета 10 мг/кг веса, после чего собаке вводят препарат методом венопункции поверхностной вены передней лапы,Через 30, 90, 180 и 280 мин этим же методом берут по 4 мл крови (возможен вариант, когда под внутрибрюшинным уретановым наркозом собаке вставляют канюлю в наружную сонную артерию из которой кровь получают многократно. Присутствие уретана в организме животного не мешает определению),До введения препарата у этой же собаки аналогичным образом берут 4 мл крови, используемой в дальнейшем в виде контроля.Взятую кровь помещают в сухую центрифужную пробирку и центрифугируют ее 15 мин при 3 тыс. об/мин. Полученную сыворотку в обьеме 1 мл обрабатывают как в примере 2, При добавлении сыворотки к кислоте образуется осадок белого или кремового цвета, а надосадок прозрачен,Данные опыта приведены в табл, 3, Предлагаемый способ количественного определения ксимедона прост, специфичен и не требует специальной подготовки донора,формула изобретенияСпособ количественного определения ксимедона в крови, включающий обработку крови 7,5 о -ной хлорной кислотой, центрифугирование, далее супернатант спектрофотометрируют в диапазоне 270-320 нм и по максимуму интенсивности поглощения определяют содержание ксимедона.1682930 ТаблицаТаблица 2При расчете количества препарата учитывается коэффициента раэбавления пробы кислотой. который равен 5.Таблица 3еСоставитель Н,Теренина Редактор Н.Бобкова Техред М.Моргентал Корректор В.Гирняк Заказ 3409 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101