Способ определения наличия ингибирующих веществ в молоке

1493949 лактатдегидрогеназы, выделяемой ими в процессе дыхания с тетраэолиевым с синим. При этом молоко, не имеющее б ингибиторов, синеет по истечении т 1 ч 30 мин. В ходе реакции в моло 5д ке не проявляются другие цвета, л кроме синего, что упрощает способ и х повышает достоверность результатов.Поочередное внесение тест-культу 10 в ры смеси тетразолиевого синего спептоном в исследуемую пробу молокап перед началом реакции позволяет всем реагирующим компонентам (индикатор, б тест-культура, ингибитор, если имеется в наличии) контактировать наР протяжении всего контрольного времени. Кроме того, такое поочередное внесение компонентов предотвращает 1 такое взаимодействие (индикатор + 20 тест-культура) вне исследуемого молока, какое происходит с метиленовым голубым (прототип), где предварительно готовится смесь тест-культуры с индикатором для анализа, Все это су щественно влияет на скорость протекания,реакции (ускорение процесса) и достоверность результатов,Окислительно-востановительный по 45 тенциал тетразолиевого синего выше, 30чем у резаэурина и метиленового гулубого, что также характеризует более высокую чувствительность индикатора и способа в целом. Так, например, наличие стрептомицина при помощи тетразолиевого синего можноопределить в молоке при концентрацииего 1 мкг/мл и более, с помощьюрезазурина - 5 мкг/мл, а с метиленовым голубым - 30-50 мкг/мл.Концентрация тетразолиевого синего 0,001-0,002% в реагирующей смеси является оптимальной, Увеличение концентрации до 0,01% ведет кпроявлению ингибирующего действиясамого индикатора на тест-культуру,что проявляется в постеленном снижении интенсивности окраски реагируемой смеси, вплоть до полного отсутствия реакции при концентрации тетразолиевого синего 0,05%, Использова 50ние концентраций индикатора 0,00030,0004-0,0005 и т.д, нецелесообразно по причине того, что интенсивностьокраски при этом хуже, чем при установленных оптимальных значениях.55Это объясняется недостаточным количеством индикатора для полного прохождения реакции,Данный способ позволяет определитьледующие ингибирующие вещества:антииотики (пенициллин, стрептомицин,етрациклин и др,), консервирующие иезинЛицирующие соединения (ормаин, перекись водорода, йодистые илорные препараты и др,). Ингибирующие вещества задерживают размножениемолоке полезной молочнокислой микрофлоры, используемой в виде заквасокри изготовлении молочных продуктов.П р и м е р 1. В две чистые проирки отмеряют по 10 мл исследуемогомолока, В первую пробирку вносятаствор пенициллина, содержащий 1 ИЕ.Обе пробирки ставят в водяную банюи выдерживают при 90 С в течение0 мин. После остывания молока в пробирках до 45 С в каждую из них добавляют по 0,3 мл 16-18 часовой культуры БСг, ТЬеппорМ 1 цз и по 1 мл рабочего раствора, содержащего 0,01% тетразолиевого синего и 4% пептона,Трехкратным перевертыванием пробирокперемешивают их содержимое, Затемпробирку с приготовленной смесью ставят в водяную баню при 43 С, Времяпогружения пробирок в водяную банюсчитают началом анализа, Результатыреакции учитывают через 1 ч 30 мин.В первой пробирке молока (с концентрацией пенициллина 0,1 МЕ/мл) осталось белым, во второй стало синим.П р и м е р 2В две чистые пробирки отмеряют по 10 мл молока. В обепробирки вносят по 20 мкг стрептомицина и ставят их в водяную баню прио85 С на 10 минПосле охлаждениямолока в пробирках до 45 С в каждуюпробирку добавляют по 0,3 мл тесткультуры Бг,ЬегшорЬ 1 пз. В первуюпробирку вносят 1 мл рабочего раствора, содержащего 0,01% тетразолиевого синего и 4% пептона, Трехкратнымперевертыванием пробирок перемешивают содержимое. Затем пробирку сприготовленной смесью ставят в водяную баню при 42 С. Через 1 ч 30 минв первой пробирке учитывают результаты, Иолоко осталось белым (концентрация стрептомицина 2 мкг/мл), Во вто"рую пробирку через 2 ч вносят 1 млрабочего раствора резазурина (0,05%)и снова ставят ее в водяную баню на15 мин, после чего учитывают результаты, Во второй пробирке молоко (сконцентрацией стрептомицина 2 мкг/мл)приобрело розовый цвет,93949 Составитель Н,Абрамова Техред Л.Олийнык Корректор М,Васильева Редактор М.Циткнна Заказ 4103/42 Тираж 789 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-иэдательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 14 Формула изобретенияСпособ определения наличия ингибиррощих веществ в молоке, предусматривающий внесение в исследуемую пробу молока тест-культуры Ягерсососсця СЬеппорМ 1 ия и индикатора с использованием пептона, полученную смесь перемешивают, выдерживают в водяной бане и определяют наличие ингибирующих веществ по изменению цвета молока, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью ускорения способа и повышения точности, в исследуемую пробу молока Бсгереососсця сЬегаорЬ 1 ця вносят поочередно со смесью индикатораи пептона, при этом в качестве индикатора используют тетразолиевый синий с концентрацией 0,001-0,0023 всмеси, а концентрацию пептона устанавливают равной 0,3-0,4 Х.